REPUBLICA DEMOCRATICA DE COLOMBIAUNIVERSIDAD POPULAR DEL CESARFACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUDBIOQUIMICADOCENTE: MARTIN NUEZ

REALIZADO POR:Snchez Murgas Luisa Fernanda Brito HelenIns Irene ArioRamrez Maroli

Valledupar 22 de marzo de 2013INTRODUCCION

Los lpidos son compuestos insolubles en agua pero solubles en compuestos orgnicos tales como acetona, alcohol, cloroformo o benceno. Generalmente se encuentran distribuidos en la naturaleza como steres de cidos grasos de cadena larga. Su hidrlisis alcalina conocida como saponificacin origina un alcohol y la sal de sodio o potasio de sus cidos grasos constituyentes, los cuales pueden ser solubles en agua.Desde el punto de vista qumico, los lpidos pueden dividirse en dos grupos principales: simples y compuestos. Los esteroides y las vitaminas liposolubles tambin son considerados lpidos, pues presentan caractersticas similares de solubilidad y se conocen como lpidos derivados. Sin embargo, muchos de estos compuestos son alcoholes y no esteres y por lo tanto no pueden saponificarse.Los lpidos son constituyentes importantes de la alimentacin, no solo por su elevado valor energtico, sino tambin por las vitaminas liposolubles y los cidos grasos esenciales contenidos en la grasa de los alimentos naturales. En el cuerpo, las grasas sirven como una fuente eficiente de energa directa, y potencialmente, cuando estn almacenadas en el tejido adiposo.Sirven como aislante trmico en los tejidos subcutneos y alrededor de ciertos rganos, y los lpidos no polares actan como aislantes elctricos que permiten la propagacin rpida de las ondas despolarizantes a lo largo de los miembros mielinizados. El contenido de lpidos en el tejido nervioso es particularmente alto. Lpidos y protenas combinados son constituyentes celulares importantes que se encuentran en la membrana celular y en las mitocondrias y sirven tambin como medios para transportar lpidos en la sangre.El conocimiento de la bioqumica de los lpidos es importante en la comprensin de muchas reas biomdicas de inters, por ejemplo, la obesidad, arteriosclerosis y el papel de varios cidos grasos poliinsaturados en la nutricin y la salud.

OBJETIVOS

Familiarizar al alumno con las pruebas ms comunes y simples del comportamiento de los lpidos. Basndose en su estructura molecular ver las diferentes reacciones y como ocurren. Observar el comportamiento reaccionante de diversos lpidos para una serie de reactivos comn. Analizar sus observaciones y resultados.

MARCOTERICO

Los lpidos son molculas constituidas por C, Hy en menorproporcin, Oxigeno; tambin pueden tener en su estructura Py N. Son hidrfobos (insolubles enagua y en otros disolventes polares), sin embargo,son solubles en solventes apolares como acetona, ter, benceno, etc.FUNCIONES DE LOS LIPIDOS: Reserva de energa Aislantes trmicos Proteccin EstructuralLos lpidos ms abundantes son los que poseen cidos grasos, es decir, los lpidos saponificables Deelloslos triglicridos (grasasyaceites)sonlosmscaractersticos.Enlostriglicridosunamolculadeglicerinaseencuentraesterificada por tres molculas de cidos grasos. La reaccin de formacin ser la siguiente: GLICERINA+3ACIDOSGRASOSSTER+AGUA (Alcohol) (Triglicrido). La caracterstica comn a todos los lpidos es que son insolubles en agua y solubles en disolventes orgnicos como la gasolina, benceno, xilol,cloroformo...Cuando se mezcla agua y aceite y se agita la mezcla se forma una emulsin transitoria.. Esto significa que si se deja la mezcla reposar unos instantes, las gotas de aceite, de menor densidad, suben y se unen entre s, formndose dos capas, la superior de aceite y la inferior de agua comprobndose su insolubilidad enagua.

MATERIALES

ACIDOS GRASOS: (butrico, esterico y oleico)GRASAS Y ACEITES: (margarina, mantequilla, aceite de oliva)FOSFOLIPIDOS: (lecitina de huevo)SOLVENTES: (acetona, alcohol, cloroformo y ter)

PROCEDIMIENTO RESULTADOSMETODO 1Examinamos la solubilidad de los lpidos y cidos grasos en agua y en los solventes orgnicos dados anteriormente: anote las diferencias entre los grupos principales de lpidos.

METODO 3Tomamos 1 tubo de ensayo y le adicionamos 2 ml de aceite, luego le agregamos alcohol y 1ml de agua; agitamos y dejamos reposar.

RESULTADOSSe emulsifico tomo un color blanco lechoso.

METODO 4En 2 tubos de ensayo colocamos 3 ml de agua, agregamos 2 gotas de aceite de oliva a uno de los tubos, y una solucin de lecitina en aceite de oliva al otro tubo mezclamos y comparamos la solubilidad de las emulsiones formadas. Qu efecto tiene la lecitina y porque?RESULTADOSLecitina, aceite de oliva y agua, se form una solucin y un pequeo anillo en al parte de abajo.Agua y aceite: se form una solucin de color blanco parido y un anillo amarillo claro en la parte de arriba.

SOLUBILIDADMezclar un poco de lectecina con agua, observar que se dispersa formando un coloide.RESULTADOSEl agua se mezcl con unas gotas de lecitina se form un coloide en la parte de abajo de color amarillo y el agua queda de color blanco aplico, con unas pequeas burbujas en la parte de arriba.

TINCIONLos lpidos se colorean selectivamente de rojo anaranjado con colorante de sudan IITECNICADisponer de una gradilla 2 tubos de ensayo clocando en ambos 2ml de aceite.Aadir a uno de los tubos 4-5 gotas de solucin alcohlica de sudadIII.Al otro tubo agrega 4-5 gotas de tinta roja.Agitar ambos tubos y dejar reposar.Observar con resultados: en el tubo con sudanIII todo el aceite tiene aparecer teido mientras que el tubo con tinta, esta se ira al fondo y el aceite no estar teidoRESULTADOS2 tubos. En el tubo 1: 5 gotas de sudan 3: las partculas se tieron y se dispersaron por todo el tubo.Tuvo 2: 3 gotas de tinta roja: se tio el aceite pero las partculas de la tinta quedaron abajo.

PREGUNTAS

1) Como se encuentra los fosfolpidos en la membrana.

En las membranas celulares los fosfolpidos juegan un papel muy importante, ya que controlan la transferencia de sustancias hacia el interior o exterior de la clula.

Los fosfolpidos son anfipticos, esto es que son simultneamente hidroflicos e hidrofbicos. En efecto, una parte de su estructura es soluble en agua (hidroflica), mientras que la otra, es soluble en lpidos (hidrofbica).

Es en la parte hidroflica donde se encuentran el grupo fosfato y el aminoalcohol o base nitrogenada.

Esta caracterstica estructural hace posible que los fosfolpidos participen en el intercambio de sustancias entre un sistema acuoso y un sistema lipdico, separando y aislando a los dos sistemas, a la vez que los mantiene juntos.

En medio acuoso las colas de los fosfolpidos (constituidas por la molcula de gricerol y los cidos grasos) tienden a disponerse en manera tal de formar un ambiente local hidrofbico.

Al entrar en contaco con el agua, las molculas de fosfolpidos se organizan formando micelas o bicapas que son grupos macromoleculares con gran cantidad de lpidos. En estas estructuras las cadenas hidrofbicas de cidos grasos se alinean unas con otras, interactuando entre ellas y dejando sus extremos hidroflicos en contacto con el agua.

2) porque la lecitina forma una emulsin en presencia de agua

debe tener la capacidad de integrarse en la estructura del agua, algo as como infiltrarse, debe ser algo parecido a lo del jabn, que tiene una parte que atrae al agua (hidrofilica) y otra que atrae a las grasas o aceites (hidrofobica), y que puede emulsionar a las grasas.Concisamente, alguna parte de la molcula debe tener la capacidad de formar puentes de hidrgeno con las molculas de agua, lo que le permite emulsionar con el agua.

3) Escriba la estructura del colesterol, cido desoxilico, extradiol, progesterona, vitamina a y b.

Colesterol: La frmula qumica del colesterol se representa de dos formas: C27H46O / C27H45OH.Es unlpidoesteroide,molculadeciclopentanoperhidrofenantreno(oesterano), constituida por cuatro carboxilos condensados o fundidos, denominados A, B, C y D, que presentan varias sustituciones

Dosradicales metiloen las posiciones C-10 y C-13. Una cadenaalifticaramificada de 8 carbonos en la posicin C-17. Ungrupo hidroxiloen la posicin C-3. Una instauracin entre los carbonos C-5 y C-6.En la molcula de colesterol se puede distinguir unacabeza polarconstituida por elgrupo hidroxiloy una cola o porcinapolarformada por el carbociclo de ncleos condensados y los sustituyentesalifticos. As, el colesterol es una molcula tan hidrfoba que la solubilidad de colesterol libre en agua es de 10-8My, al igual que los otroslpidos, es bastante soluble en disolventes apolares como elcloroformo(CHCl3).

Estradiol: es unahormonaesteroidesexual femenina. El estradiol es abreviado E2 ya que tiene dos grupos hidroxilos en su estructura molecular. Laestronatiene 1 (E1) y elestrioltiene 3 (E3). El estradiol es alrededor de 10 veces ms potente que la estrona y alrededor de 80 veces ms potente que el estriol en sus efectos estrognicos. A excepcin de la fase temprana folicular delciclo menstrual, sus niveles sanguneos son algo ms altos que los de la estrona durante los aos reproductivos de la mujer. Por lo tanto, el estradiol es elestrgenopredominante durante los aos reproductivos tanto en los niveles sricos absolutos como tambin en la actividad estrognica. Durante la menopausia, la estrona es el estrgeno predominante y durante elembarazo, el estriol es el estrgeno predominante en trminos de niveles sricos. El estradiol tambin est presente en los hombres, siendo producida como un metabolito activo de latestosteronapor la enzimaaromatasa. Los niveles de estradiol en los hombres (8-40 pg/ml) son ms o menos comparables a los de una mujer posmenopusica. El estradiol "en vivo" es inconvertible con estrona; siendo favorecida la conversin del estradiol a estrona. El estradiol no slo tiene un impacto crtico en el funcionamiento sexual y reproductivo, sino que tambin afecta a otros rganos, incluyendo loshuesos.

Progesterona: Laprogesterona, tambin conocida comoP4(pregn-4-en-3,20-diona), es unahormona esteroideC-21 involucrada en elciclo menstrualfemenino,embarazo(promueve lagestacin) yembriognesisde loshumanosy otras especies. La progesterona pertenece a una clase de hormonas llamadasprogestgenos, y es el principal progestgeno humano de origen natural. Su fuente principal es elovario(cuerpo lteo) y laplacenta, la progesterona tambin puede sintetizarse en lasglndulas adrenalesy en elhgado.La progesterona es una de las hormonas sexuales que se desarrollan en la pubertad y en la adolescencia en el sexo femenino, acta principalmente durante la segunda parte delciclo menstrual, parando los cambiosendometrialesque inducen losestrgenosy estimulando los cambios madurativos, preparando as alendometriopara la implantacin del embrin. Estos efectos tambin ocurren en lasmamas. La progesterona tambin se encarga de engrosar y mantener sujeto al endometrio en el tero: al bajar sus niveles, el endometrio se cae, produciendo lamenstruacin. Es la hormona responsable del desarrollo decaracteres sexuales secundariosen una mujer, y sirve para mantener el embarazo.

Vitamina a: Lavitamina A,retinoloantixeroftlmicallamada as por la deficiencia de esta vitamina, es unavitamina liposoluble(es decir que es soluble en cuerpos grasos, aceites y que no se puede liberar en la orina como normalmente lo hacen lasvitaminas hidrosolubles) que interviene en la formacin y mantenimiento de las clulas epiteliales, en el crecimiento seo, el desarrollo, proteccin y regulacin de la piel y de las mucosas. La vitamina A es un nutriente esencial para el ser humano. Se conoce tambin comoretinol, ya que generapigmentosnecesarios para el funcionamiento de laretina. Desempea un papel importante en el desarrollo de una buena visin, especialmente ante la luz tenue. Tambin se puede requerir para la reproduccin y la lactancia. El-caroteno, que tiene propiedadesantioxidantesque ayudan a eliminar radicales libres previniendo el envejecimiento celular, es un precursor de la vitamina A. El retinol puede oxidarse hasta formar elcido retinoico, un cido de uso medicinal. Esta vitamina posee 3vitameros(vitaminas que tienen ms de una forma qumica) son elretinol, elretinaly elcido retinico.

Vitamina d: Lavitamina D,calciferoloantirraquticaes unheterolpidoinsaponificabledel grupo de losesteroides. Se le llama tambinvitaminaantirraquticaya que su dficit provocaraquitismo. Es unaprovitaminasoluble en grasas y se puede obtener de dos maneras: Mediante laingestinde alimentos que contengan esta vitamina, por ejemplo: lalechey elhuevo. Por la transformacin delcolesterolo del ergosterol (propio de los vegetales) por la exposicin a los rayos solares UV.Se estima que 1000 IU diarias es la cantidad de vitamina D suficiente para un individuo sano adulto ya sea hombre o mujer.

La vitamina D es la encargada de regular el paso decalcio(Ca2+) a los huesos. Por ello si la vitamina D falta, este paso no se produce y los huesos empiezan a debilitarse y a curvarse producindose malformaciones irreversibles: elraquitismo. Esta enfermedad afecta especialmente a los nios

4) Cuales sin las tcnicas de anlisis de colesterol y de triglicridos.

Determinacin de colesterol por mtodos enzimticos.Algunos de los primeros mtodos para efectuar pruebas de colesterol incluan la obtencin de productos coloreados, haciendo reaccionar el colesterol con sustancias fuertemente cidas. Dado que se descubri que los steres de colesterol y el colesterol libre no producen cantidades equivalentes de color esto dio lugar a la adicin de un paso de saponificacin para transformar los steres de colesterol en colesterol libre. Actualmente se utilizan mtodos ms rpidos y seguros que utilizan enzimas como reactivos para las pruebas de colesterol.Los mtodos enzimticos para el anlisis de colesterol fueron ideados en los aos 70 y desde entonces han reemplazado los mtodos qumicos casi completamente.Los mtodos enzimticos se ven menos sujetos a posibles interferencias por sustancias no esterlicas que los mtodos qumicos. No obstante, no hay absoluta especificidad para el colesterol, dado que su oxidasa puede reaccionar tambin con otros estelores, que se sabe que estn tambin presentes en el plasma, y con esteroles vegetales, presentes en concentraciones apreciables en la circulacin en pacientes con *-sitosterolemia. El mtodo atribuido a Flegg lleva a cabo el anlisis en tres pasos; el grupo 3-OH del colesterol es oxidado y el agua oxigenada, que es uno de los productos de la reaccin, se determina enzimticamente: Hidrlisis de los steres de colesterol mediante la colesterol esterasa (CE).

Colesterol esterificado CE Colesterol libre + cido graso Oxidacin del colesterol mediante la colesterol oxidasa (CO) para producir perxido de hidrgeno.

Colesterol libre + O2 CO 4-Colestenona + H2O2 Oxidacin de un cromgeno con el perxido de hidrgeno en una reaccin catalizada por la peroxidasa para producir un producto coloreado.

H2O2 + fenol +4- aminoantipirina peroxidasa quinoneimina + H2OCon respecto a las enzimas que actan en estas reacciones, se puede decir que:La colesterol esterasa (CE) se encuentra presente en el jugo pancretico y en el intestino, transforma los esteres del colesterol en colesterol y cido graso libre, y es precisamente en esta forma libre como es absorbido el colesterol por el intestino.La colesterol oxidasa (CO) se encuentra en la vescula biliar y el intestino y produce la oxidacin del colesterol libre debido a que el organismo es incapaz de oxidar colesterol hasta dixido de carbono por lo que solo puede excretarlo en la bilis donde parte del colesterol libre se convierte en cidos biliares.Determinacin de triglicridos por mtodos enzimticos.Los mtodos antiguos incluan extracciones con disolventes orgnicos y eran prolongados en su elaboracin. Al igual que sucede con el colesterol, los mtodos enzimticos han reemplazado los mtodos qumicos en la mayora de las finalidades. Los anlisis se realizan directamente en plasma o en suero y no estn sujetos a interferencias por los fosfolpidos o la glucosa. En la actualidad la mayora de los mtodos siguen dos pasos: Descomposicin de los triglicridos por una lipasa en cidos grasos libres y glicerol.TG LPL Glicerol + cidos grasos libres Fosfoliracin del glicerol catalizada por la glicerol quinasa (GK).Glicerol + ATP GK Glicerol-3-P + ADP Oxidacin del glicerol-3-fosfato catalizada por la glicerol fosfato oxidasa.Glicerol-3-P + O2 GPO Dihidroxiacetona fosfato + H2O2 En presencia de peroxidasa el perxido provoca el acoplamiento del 4-clorofenol y la 4-aminoantipirina dando lugar a un derivado quinonmico de color rojo. La intensidad de la coloracin es proporcional a la concentracin de triglicridos y se mide fotomtricamente.La lipoproteina lipasa (LPL) se encuentra en su forma activa, en el endotelio vascular. Presenta varios sitios funcionales, distintos entre s y que contribuyen a su efectividad cataltica o la modulan: Un sitio de unin a la porcin lipdica de la superficie del sustrato. Un sitio de unin a la apo C-II. Un sitio de unin de los triglicridos. Un sitio cataltico. Un sitio de interaccin entre sus dos subunidades.La glicerol quinasa (GK) es una enzima donde su mayor actividad se encuentra en el hgado y la corteza renal. Esta desempea un papel fundamental en la velocidad de flujo gluconeogenico a partir del glicerol.DETERMINACIN DEL COLESTEROL:Reactivo: Tampn fosfato 150mM (pH 7.2) Fenolato sdico 7.8mM 4-aminoantipirina 0.4 mM Colesterol Esterasa (CE) > 1.7 *kat/L Colesterol Oxidasa (CO) > 1 *kat/L Peroxidasa > 20 *kat/LDETERMINACIN DE TRIGLICRIDOReactivo Tampn Pipes 42mM (pH 7.5) Adenosina trifosfato (ATP) 1mM 4-aminoantipirina 0.5 mM Lipoprotena Lipasa (LPL) > 50 *kat/L Glicerol quinasa (GK) > 13 *kat/L Glicerol fosfato oxidasa >25 *kat/L Peroxidasa > 5 *kat/L 4-Clorofenol 6mMLas tcnicas que utilizamos en estas determinaciones son la espectrofotometria y la electroforesis. La espectrofotometria se refiere al uso de la luz para medir las concentraciones de sustancias qumicas mientras que la electroforesis consiste en la aplicacin de un campo elctrico sobre una muestra y observar sus variaciones con respecto al campo.Vamos a emplear como tcnica el ensayo enzimtico colorimetrico a punto final (todo el sustrato se convierte a producto), donde la longitud de onda se va a medir dentro de la banda del visible.Las muestras se colocan en tubos o en placas:Placa: - El aparato utilizado es un lector de placas.Las cubetas de la placa se rellenan con multipipeta (250 microlitros) aunque antes se ha utilizado micropipeta para poner 10 microlitros. La multipipeta cada vez que se rellena puede echar 250 microlitros 10 veces por lo que es muy til cuando se quiere poner el mismo volumen de un mismo compuesto.Las muestras se realizan por triplicado.Para incubar las muestras se utiliza un hinchador de placas.Tubo: - El aparato utilizado es un espectrofotometro.Los tubos se rellenan por completo con micropipeta.Las muestras se realizan por duplicado.Para incubar las muestras se utiliza un bao de agua.Para la determinacin de colesterol se utiliz placa y para la determinacin de triglicridos tubos.Los pasos para la determinacin de colesterol son los siguientes:Se saca de la nevera 2 eppendorf en los cuales se encuentra el calibrador y el control patolgico. El calibrador es una solucin diluida del analito que sirve para realizar la recta de calibrado; el control patolgico es una solucin con una concentracin conocida del analito, este control va a presentar un valor en el lector de placas que debe estar dentro de un intervalo de confianza que indica si se puede seguir realizando la determinacin. Existen dos tipos de intervalo: 1) media + 2*desviacin tpica; 2) media + 3*desviacin tpica, este ltimo recibe el nombre de intervalo permisible.Adems de los dos eppendorf, se saca de la nevera 3 tubos que corresponden a 3 muestras de tres pacientes diferentes. Estos tubos se deben poner en hielo para que no pierdan la temperatura de la nevera.Tambin es necesario un blanco para realizar el cero de absorbancia, en este caso ser solucin salina ya que se va a asemejar a las condiciones fisiolgicas del medio.Ahora en la placa, se debe aadir 10l de blanco, calibrado, control patolgico y de las tres muestras; esto se realiza por triplicado para tener una mayor fiabilidad en los resultados. Posteriormente se ponen 250 l de la solucin reactiva que contiene las enzimas (esta solucin es propia del colesterol y contiene las enzimas colesterol esterasa y colesterol oxidasa que han sido explicadas en el apartado anterior). Al ser por triplicado se pipetean 250l x 3 veces.Despus de pipetear todos los volmenes, se debe incubar las muestras en un hinchador de placas durante 10 minutos a una temperatura de 37C que es la temperatura a la que se realiza las diferentes reacciones enzimticas ya que el cuerpo humano se encuentra a esa temperatura.Despus del hinchador, se observa que han aparecido en la placa unos productos coloreados por lo que ahora se debe medir la absorbancia y la concentracin en el lector de placas.Todo este proceso lo repetimos dos veces debido al mal pipeteo del volumen de 250 l.Con respecto a la determinacin de trigliceridos, los pasos seguidos son los siguientes:Se coge de nuevo de la nevera 2 eppendorf que contienen calibrador y control patolgico,Las muestras utilizadas son las mismas que las de la determinacin del colesterol.En este caso se utiliz tubos para realizar la determinacin. En los tubos se puso el blanco, el calibrador, el control patolgico y las tres muestras. Esta determinacin se realiz por duplicado.En cada tubo se puso 10 l de cada sustrato y 1 ml de solucin reactiva en este caso de trigliceridos (esta solucin lleva las enzimas que reaccionan con los trigliceridos que son lipoproteina lipasa, glicerol quinasa y glicerol fosfato oxidasa. este volumen de 1 ml se pipeteo con micropipeta. Al ser por duplicado se puso 1 ml x 2.Se incuba 5 minutos las muestras en un bao de agua que se encuentra a 37C para que se asemeje a la temperatura del cuerpo humano.Aparece en los tubos, un producto coloreado que se lleva al espectrofotometro y este da los valores de la absorbancia y de la concentracin de trigliceridos en las muestras.Los valores tanto de colesterol y trigliceridos as como su discusin se explicaran en los siguientes apartados.5) Que enzimas logran en el aparato digestivo la hidrolisis de grasaSon varias: Boca:lipasa bucal estmago: lipasa gstrica Intestino delgado: lipasa pancretica-colipasa, esterasa del colesterol, lipasa pancretica dependiente de sales biliaresEstas ltimas son la que producen la mayor hidrolisis, las provenientes del pncreas y las sales biliares.6) Cul es la funcin estructural de lipoprotenas plasmticaLas lipoprotenas son macromolculas cuya funcin es empaquetar los lpidos insolubles en el medio acuoso del plasma y transportarlos desde el intestino y el hgado a los tejidos perifricos y, desde stos, devolver el colesterol al hgado para su eliminacin del organismo en forma de cidos biliares fundamentalmente.

BIBLIOGRAFIA

http://www.profesorenlinea.cl/Ciencias/Fosfolipidos.htmlhttp://es.answers.yahoo.com/question/index?qid=20070929173206AA3y4yAhttp://es.wikipedia.org/wiki/Colesterolhttp://es.wikipedia.org/wiki/Estradiol

http://es.wikipedia.org/wiki/Vitamina_A

http://html.rincondelvago.com/bioquimica_17.html