8/15/2019 Método de Breed.pptx

1/14

Método de BreedRecuentos directos al microscopio

Pedro Miguel Palacios FarfánMicrobiología de los Alimentos

8/15/2019 Método de Breed.pptx

2/14

Es un método en el que se puededeterminar el número de bacterias de unamuestra por examen microscpico directo!El método de tincin no diferencia losorganismos "i"os de los muertos! El númerototal obtenido se denomina #número total$%e usa además para el recuento de célulasanimales &predominante mente leucocitos'que se encuentran en una proporcinele"ada en la lec(e obtenida durante la

8/15/2019 Método de Breed.pptx

3/14

Principio del Método de

BreedPara el planteo de este método resultaesencial que el microscopio este calibradode tal forma que se cono)ca el *REA +E,-AMP. /0%1A, del mismo! 1n "olumen

conocido &2324 ml' de la muestra seextiende sobre un área conocida &4 cm5' delportaob6etos!%e de6a secar3 luego se ti7e 8 se examina al

microscopio!%e determina el número medio de bacteriaso células por campo 8 luego es posiblecalcular así el número de m!o por ml! +e la

muestra original!

8/15/2019 Método de Breed.pptx

4/14

+esarrollo del método deBreed

8/15/2019 Método de Breed.pptx

5/14

+eterminacin del área del campo del microscopio

4! %e prepara el microscopio 8 utili)ando el ocular 42

9 con ob6eti"o de poco aumento se a6usta elmicrmetro de platina de forma que la escalagraduada quede en el centro! &4 mm di"idido en422 unidades de 42 : cada una'

;! %e coloca una gota de aceite de inmersin sobre elmicrmetro de platina 8 se enfoca con el ob6eti"ode inmersin! %e determina el diámetro de campodel microscopio3 en micras3 utili)ando la escala demicrmetro 8 a6ustando la longitud del tubo de

microscopio ligeramente3 si es necesario! Paraposteriores obser"aciones debe mantenerse lamisma longitud de tubo!

8/15/2019 Método de Breed.pptx

6/14

+eterminacin del área del campo del microscopio

5! %e calcula el área del campo del microscopio3 en mm3 para elob6eti"o de inmersin 8 ocular 4293 utili)ando la frmula<

 

+onde < r = radio del campo-onociendo el área del campo del microscopio3 es posible

determinar el factor del microscopio &MF'>! +eterminacin del factor del microscopio calculado <

a' MF = ?úmero de campos en 4 cm; & 422 mm;'

b' ?úmero medio #n$ de organismos o células por campo!

 

8/15/2019 Método de Breed.pptx

7/14

+eterminacin del área del campo del microscopio

c' ?úmero de organismos o células presentes en 4 cm;

d' ?úmero de células u organismos presentes en 4 ml de lamuestra!

En la ma8oría de los microorganismos3 utili)adoscomo se indica un microrganismo por campo

representa aproximadamente 22 222 organismos por&ml' de la muestra!

 

8/15/2019 Método de Breed.pptx

8/14

Preparacin de la extensin

4! %e me)cla bien la muestra que se "a a examinar!

;! %e coloca 2324 ml de muestra sobre un portaob6eto limpio 8 se extiende sobre un área de 4 cm; utili)ando una plantilla o un portaob6etos marcado!,a muestra puede depositarse bien sea<

a' -on una pipeta capilar calibrada para fracciones de 2324ml b' 1tili)ando un asa! 1n asa con > mm de diámetro interno

contiene aproximadamente 2324 ml de muestra!

8/15/2019 Método de Breed.pptx

9/14

Preparacin de la extensin

5! %e seca la extensin inmediatamente colocándola

sobre una superCcie (ori)ontal caliente o en unaestufa a D-! +ebe quedar completamente secaantes de los min para e"itar una posiblemultiplicacin bacteriana!

>! %e ti7e pormétodo adecuado.

8/15/2019 Método de Breed.pptx

10/14

Preparacin de la extensin

! %e examina3 utili)ado ob6eti"o de inmersin!

8/15/2019 Método de Breed.pptx

11/14

8/15/2019 Método de Breed.pptx

12/14

Recuento

+e esta manera el #recuento directo$ es también un

#recuento de grumos$ 8 esta más de acuerdo con losresultados obtenidos por recuento de placa 8a quecada grumo o cadena probablemente dará origen auna %.,A colonia!

8/15/2019 Método de Breed.pptx

13/14

Recuento

;! El número de campos que deben contarse puede

determinarse de acuerdo con el número medio debacterias que aparecen por campo3 según sugiriilson &45' 8 detallamos a continuacin<

Numero medio de

bacterias por campo

Número de campos

que deben contarse2G5 H>

>GH 5;

IG4; 4H

45G; J

;HG2 >

4G422 ;

Más de 422 4

8/15/2019 Método de Breed.pptx

14/14

Recuento

;! %e determina el número medio de bacterias por

campo 8 de a(í se calcula el número por mililitros&ml'!