+ All Categories
Home > Documents > Peanut and Amaranthus leucocarpus lectins discriminate between memory and naive/quiescent porcine...

Peanut and Amaranthus leucocarpus lectins discriminate between memory and naive/quiescent porcine...

Date post: 02-Nov-2016
Category:
Upload: jesus-hernandez
View: 215 times
Download: 3 times
Share this document with a friend
12
Peanut and Amaranthus leucocarpus lectins discriminate between memory and naive/quiescent porcine lymphocytes Jesu Âs Herna Ândez a,b,* , Yonathan Gar®as a , Julio Reyes-Leyva c , Rau Âl Cha Âvez d , Ricardo Lascurain d , Javier Vargas d , Edgar Zenteno d a Departamento de Bioquõ Âmica, Instituto Nacional de Enfermedades Respiratorias, Tlalpan 14080, Mexico b Departamento de Nutricio Ân Animal, Centro de Investigacio Ân en Alimentacio Ân y Desarrollo, A.C. Hermosillo, P.O. Box 1735, Mexico, Mexico c Laboratorio de Virologõ Âa, CIBIOR-IMSS, Puebla 72000, Mexico d Laboratorio de Inmunologõ Âa, Departamento de Bioquõ Âmica, Facultad de Medicina, Mexico, Mexico Received 6 November 2000; received in revised form 3 May 2001; accepted 13 September 2001 Abstract Lectins are relevant tools to isolate and characterize different cellular sub-populations. In this work, we used the lectins Arachis hypogaea Peanut agglutinin, PNA) and Amaranthus leucocarpus ALL), speci®c for Galû1, 3GalNAc, to characterize naive and memory lymphocytes from pigs, experimentally infected with the porcine rubulavirus RvP). Our results showed that both lectins recognized preferentially lymphocytes with the CD4 CD8 phenotype P < 0:05). The phenotypic analysis of the cells recognized by these lectins indicated that PNA lymphocytes showed higher rate of the CD29 antigen PNA CD29 high ) than ALL ALL CD29 low ). The number of PNA CD29 high lymphocytes increased after 8 weeks of experimental infection with RvP, and most of the ALL CD29 low cells became CD29 middle . PNA lymphocytes isolated from infected pigs proliferated after stimulation with the RvP, whereas ALL cells did not. In vitro assays indicated that the ALL cells from previously infected pigs diminished from 7:5 2 to 0:5 0:3% after RvP stimulation; whereas PNA cells increased from 4 1 to 42 2%, whereas no modi®cation in ALL or PNA cellular population was identi®ed in lymphocytes from naive animals after RvP stimulation. Our results suggest that the cellular distribution/organization of the O-glycosydically linked glycans on lymphocytes may correlate with biological functions, and that PNA could be a tool to isolate speci®cally porcine memory T cell subsets, whereas ALL Veterinary Immunology and Immunopathology 84 2002) 71±82 * Corresponding author. Present address: Departamento de Bioquõ Âmica, Facultad de Medicina UNAM, P.O. Box 70159, 04510 Mexico D.F., Mexico. Fax: 52-5665-4623/5623-2169. E-mail address: [email protected] J. Herna Ândez). 0165-2427/02/$ ± see front matter # 2002 Elsevier Science B.V. All rights reserved. PII:S0165-242701)00395-6
Transcript

������ ��� ��������� ��� ����� �������� ���� ������� � ��� ��������������� ����� �� �������

������ ���������������� �������� �������� ���� ����!"����� ���� #�������� ���� "�������� ����� $��%����

&�%�� '�������

������������ �� �� ��������� ������� ���� �� �� ����������� ������� ���� ����� ��� �� !�"�� ������������ �� ������� �� ������ #���� �� ��$���%��� �� �� ��������� �� & ����� �

�'#' (��� � � )'*' � " �+,-� !�"�� � !�"�� .�/ ��� �� �� 0�� %���� #���*�1�!22� )��/� +3���� !�"��

�.�/ ��� �� �� ����� %���� ����������� �� �� ��������� 4������ �� !�������� !�"�� � !�"��

����� ( )��� ��� *+++, ������ � ������ -�� . /�� *++0, ������ 0. 1���� ��� *++0

��������

"���� ��� �������� ����� �� ������ ��� ��������� �--����� ������� ���!����������2 3� ���

���4� �� ���� ��� ����� ������ �&� %��� 5������ �%%������ �)67 ��� ��������� ��� �����

56""7� ���� -�� ���80� .���)6� �� ��������� ���� ��� � ��� �� ������� -�� �%��

�9��� ������� �-���� ��� ��� ����� ���������� 5 ��72 :�� ������� ������ ���� ���� �����

���%���� ���-��������� �� ������� ��� ��� #;<�#;=� ��������� 5) � +�+>72 ?�� ��������������� �- ��� ���� ���%���� �� ����� ����� ������ ���� �)6� �� ������� ������ �%������� �- ��� #;*@ ���%�� 5�)6�#;*@�%�7 ���� 6""� 56""�#;*@���72 ?�� �� ��� �-

�)6�#;*@�%� �� ������� ������� �-��� = ���4� �- �9��� ����� �-���� ��� ��� ��� ��� �- ��� 6""�#;*@��� ���� ��� � #;*@ ����2 �)6� �� ������� ������� -�� �-����

�%� ����-������ �-��� �� ������ ��� ��� ��� ������� 6""� ���� �� ���2 3� ���� ������

������ ���� ��� 6""� ���� -�� ��������� �-���� �%� � ����� -�� A�>� * �� +�>� +�.B�-��� �� �� ������, ������� �)6� ���� ������� -�� <� 0 �� <*� *B� ������� ��

������� � 6""� �� �)6� ������� ��������� ��� ������� � �� ������� -�� ����

�� ��� �-��� �� �� ������2 :�� ������� ��%%��� ���� ��� ������� ������������%������� �- ���

*!%���������� ��4�� %����� �� �� ������� �� �������� ��� ����%�� -������� ���

���� �)6 ���� �� � ���� �� ������ �������� ����� � ��� ? ��� �������� ������� 6""

$�������� 3 �����%� ��� 3 ����������%�

=< 5*++*7 A0C=*

� #����������% ������2 ������� �������D ;������ ���� �� E���F� �� G������ �� /���� H)6/� �2:2

E�9 A+0>@� +<>0+ /�9� ;2G2� /�9�2 G�9D �>*!>((>!<(*.�>(*.!*0(@2�1��� �����D I����J������2��2 9 5�2 ����������72

+0(>!*<*A�+*�K C ��� -���� ����� � *++* &������ 1��� E2$2 6�� �%��� ��������2

�33D 1 + 0 ( > ! * < * A 5 + 0 7 + + . @ > ! (

���� �� ���-�� �� ������ ������������ ? �� �������2 � *++* &������ 1��� E2$2

6�� �%��� ��������2

5�&6 ��7 1���, #;<�#;=�, ������ �%%�����, ��������� ��� ����� ����, "� �������,

*!%���������� ��4�� %�����, /� �������� �� �������2

���� ����� �

"����� ��� ���� ������ -�� *!%���������� ��4�� %����� 5������% ���

�������� ���80� .���)6�0�+ 1���?��7� ���� ���� ����� ���� � ��� -��������� �-��� ����� ��� �� ������ �������������2 E� ������� �%%�������� ��� ������

�%%����� 5������ �&� %���7� � � ������� �� ���-� ���� ����� ����� ��� �!

���� 5 ����� �� ��2� 0@A(7 ��� #;=� ? ���� ������� � ���� 5#�������4 ��� #�����0@=*, $����I�� �� ��2� 0@=., ?��� ��� )����� 0@==72 ?�� ���� -�� ���������

��� ����� 56""7 ��������� ��� ����� �� ������ ��� ���� ������� ��� �����

5"������ �� ��2� 0@@<7� ��� �� �� ���� #;<� �� ������� 5"������ �� ��2� 0@@A72 �)6��� 6"" ��� ��� ��� �%���� �-���� �� ��� �������� ���80� .���)6 5������ �� ��2�

0@A(, '������ �� ��2� 0@@*72

6���� ���� �-���� ��� �� ���� ������� �-������ ����� � %���� ����������

� ��� -������ � ���%���� ����� ��� ����� �� ��� ����� � ����� 51��������

0@@<, � F����!/������ �� ��2� 0@@A72 /������� ���������� ������� ���� ���� ����

�������� � ����� �-���� �%� 5���������� �� ��2� 0@@A72 ��������� ������� �-

��������� ����� ��������� ���� 5�E/#7 -�� �� �-���� �� ��� ��������

������� �� ��� �- ���� ������� ��� ����� ? �� ������� ����� ����% �-�����

��� ������� #;<�#;=� ���� < ���4� �-��� �-���� 5���������� �� ��2� 0@@=72 3�

������� �� �� �� �� ���� �� �������� � ��� ���� -���� ���� � ����������

��������� 50+C(+B7 �- ����� ���� �� ������� ���� ��� #;<�#;=� ���������

51��� ������ �� ��2� 0@=A72 ?�� ������� ������ ��� ���� ������� � ��������� ������

������� �� �� ������ ��� ������ �- ��� �� ����� ���� 5'�4�� ��� ��� ���4���

0@@(72 #;<�#;=� �� ������� �9��� ��������� �- ����� ���%�� �9�������

���� 51� ������ �� ��2� 0@@(, '�4�� ��� ��� ��� ���� 0@@(7� ����� ����

�������� � ��� ��%������ �- ����� � ��� ? ���� 5'�4�� ���� 0@@@, ����������

�� ��2� *++072 �� �� #;<�#;=� ? ���� ��� ���� �� ���� ���� ���%!

������ �������� �� �� �� E ���� 5:��� �� ��2� 0@@=7� ��� ������� �����9 �����

5;� E��� �� ��2� *+++72

?�� ���4���� � �� ���%��� #;<>� ��� ���� �������� � ��4�� �- � ���

? ����2 ����% �� ���� ���� #;<� ? ���� �9����� � �%�! ������� ��%�� ��-�� 5#;<> E7 ���� � ������ � ������� �� �������� ������� �� ��� ���� �- #;<> E

�������� �������� �����% 5E��� �� ��2� 0@@=, '�4�� ��� �� ��2� 0@@=72 3� ��� �������

���� ��%%����� ���� ��� #;*@ � � �������� ��4�� �- ���� � ��� ? ���� 5'�4�� ���

��� ��� ���� 0@@(72 3� ��� ���4� �� �9� ��� ��� ��� �� �- �)6 ��� 6"" ������

���%�� � ��� *!%���������� ������� �- ����� ? ��� ���-�� %���������� ����% �� �

��� ������ ����� ������ ��� �9����� ������� ����� ���%�� ��� ���� � ��% �����

�--����� �� � ��� ? ����2

A* 8' (��������9 �� �' : 0��������& ����� %& ��� ����� ���� %& � ;3��3< +�= 3

� ��������� ��� ���� ��

3'�' ����� ��� $����

&����� ���4 "������� ;��� �������� �� ��� ����� �%� 5LA �����7 ���� �������

-�� � � ���� -�� 2 6� ��� ���� ������ �� �� -��� �- ��� ���� �������D

6�I���4�M� ������� ������ ���� -����� ��� ����� ����������2 1���� �%� ����

�9��� ������� �-���� �� ��������� �� �������� �- > � ����� ����������

50+< ?#3;>+ ��07 �� ��������� ������� 5���������� �� ��2� 0@@=72 ?�� �-���� ���

��� -��� ���!�-���� �%�� ��� ������ ���� �� �������� ���� ����� ��������� � ��

������� -����2 ?�� �� ���� ��� �����%���� � ��� �% 4���� ��� ��� �N!0> ���

/&/ 5������ ����� ��� 0+B -���� ����� ���� � 0++ H� � ������� ��� 0++ �%� �������� �� 51% �� 1� "���� /:� H1672 3�-���� ��� ������� ���� ������ ��

����-�%���� �� 0+�+++� % -�� <> � �� < �# ��� ���� �-����� ��� ������� �

��� ������� � @(!����� ������ ������ 5G���� "������� )�� ������� H1672 $���

���%�� ������� �- ������������ �- �-���� �% 4���� 5�N7 ���� ��� ����������

�� ���������-�%���� �� 0++�+++� % -�� < �� �� < �#� ������� �����%� +2<> � � ���������� ������ � ������� �� �A+ �# ���� ���2 /� �� ���� ���4 ��� %���� � $��� ����

-�� < ���� � /&/ ��� ������ ����� ��� *B -���� ����� ���� ��� >+ �%� �%���� �� 51% �� 1�2 "���� /:� H1672 ������ ���������� � ��� ����������� �-

����� ������� ��� ����� ��� �� ��� ����� �- E���-��� 50@A(7 ��� ������� ����

��I����� �� � ���������� �- *+ %� �2 E�-��� ���� ��� ����������� ������ ��� ����!

�������� 5���������� �� ��2� 0@@=72 #��� ������� ������ �� ������ ���� ���� ��

��%���� ������2

3'3' ����/ ���

/���� �������� �������� 5 6�7 ���!#;< 5A<20*2<� 3%�*�7� ���!#;= 5A(2*200�

3%�*�7 ��� ���!�% ������%� 5A=2*200� 3%�*�7 ���� 4���� ������� �� ;�2 /2;2

�������� 3����� H�������� 3���������� H16 5������� �� ��2� 0@=<72 G��������

����������� 5G3?#7 ������� ��� ���! ���� 3%�*� ��� -�� 1����� 5:9-���� &�%����72

������������ 5�&7 �������!��� ���! ���� 3%�*� -�� '� �� "�� 3�2� 1�� G������

#6� H16� ��� ;0!������� ���� ���!�� �� �0 ���%��!���� 6� <E< 5#;*@7 -�� #������ 12� 1�� ;�%�� #6� H162

3',' .�����

�' ��� ����� ���� 56""7 ��� ������ �%%����� 5�)6 -�� �' �&� %���7 ����

������� -�� ��� ����������% ����� ����� ������� � ?��������� 5/�9�7 ���

������ �� � ��� � ������% ���� � -�� �� �� ����������� �� ������� ���������

5���������� �� ��2� 0@@@, :��� �� ��2� *+++72 6"" ��� �)6 ����� ���� ������� ��� ���

�!�����9���� �� ����� �- ���� 5���� #�� �� #�2� �4-��� 3"� H167� �� � ������

������ ���� �- *D0 51���%� �� ��2� 0@@*72 E���!��I�%���� �)6 �� 6"" ��� ���� �� �

���������� �- 0 �% -�� 0+( ����� ��� �������� ��� #�#��� �!���������� 5���� %���1�� ;�%� #6� H1672 �������� 5���7 �� �!�����!;!%������� �� 5���)67 �� *++ /

8' (��������9 �� �' : 0��������& ����� %& ��� ����� ���� %& � ;3��3< +�= 3 A.

���������� ��� ���� �� ���� ������ �- �)6 �� 6""� ����������2 �)6��� �������

��� G�������� ����������� 5G3?#7 ������� -�� 1% �� �����% �� "������ �� ��2

50@@<72

3'�' #&� �� � ������ ���&�

��������� ����� ��������� ���� 5�E/#7 ���� ������� -�� ����� �� ���� -��

�-���� ��� ���� �%� �� G���C������� 5���� ��� 1�����7 %������ ����-�%����2

�E/# ���� ������ ��� ���!#;=� ���!#;< 6�� ��� ����!������� �)6 �� 6""2

6-��� *+ � ������� �� �� ���� ���� ������ ��� �E1!6 50++ / ����

���������� )�#� +20> /� �� A2*� +2.B ����� ���� ���� �7� ��� ���� ��� �� ����

��� G3?#!���! ���� 3%�*�� �&!��� ���! ���� 3%�*�� ��� #�#��� �!���������� -��

*+ � ������� �� �2 6-��� ���� ���� ��� �E1� ���� ���� �������� ��� � G6#1

&9����� 5E���� O ;4����� /������ $��� #6� H1672 G�� ��� �����% �-

�)6�#;*@� ��� 6""�#;*@� �� �������� �E/# ���� ������ ��� ����!��I�!

%���� �)6 �� 6"" -�� *+ �, �-��� �����% ��� �E1!6� #�#��� �!���������� ���

;0!������� ���!�� �� #;*@ 6� ���� ������ ������ ��� �E1� ��� �������� ��

P�� ��� ����2

3'-' � ��� � � ����%�� ��������% ��

#��� ��������� �- �E/# � �E1!6 ��� ������ ��� 0++ �� �- ��� ���� ���!�% ������%�! �������� ������� �� < �# ����% *+ �2 #���� ���� ������ ��� �������E1!6 ��� ������� ��� ����� ���! ���� ���%������!����� �%��� ��������

��� �������� ��������� ���% � �%��� ������ 5/6#1� /����� E��� 3�2� 1���������

#6� H1672 ?�� ������ ������%�� ���� L@(B �� �������� �� G6#1��2

3'>' 2 ����% � � ����� &��� �&��

&�������- ����� ������% ���������� �- ������%� ���!�������� �E/# 50+A ���

����7 � ������ �E1!6���� ������� ��� ����!�)6 �� !6""2 6-��� *+ � �������

�� �� ���� ���� ������ ��� �E1!6 ��� ������ ��� #�#��� �!����������2 6-��� �

���� ����� ���� ���� ��������� �� 0+A ��0 � �E1 ��� ������ ��� ��� G6#1 &9�������� �)6� ��� 6""� ����2 1����� ���� ���� ������� ������� -�� 0> � ���+2* / ���)6 �� ��� �� �� ���� 6"" ��� �)6� ����������2 ?�� ��������� �- ������

���� ��� �������� ���% ���!#;< �� !#;= 6� ��� �������� ��� G3?#!������� ���

���! ���� 3%�*� ��� �& �������!��� ���! ���� 3%�*�2 )� �--������ � ���������

������������ ���� ������� � ������ �9��� ���� ���-�� �� � ��� ������� �-

�����2 1����� �������� ��� �������� ���� ������ �� ������� -�� �� �������-������

������2

3'+' .&��� �� ������� � ��&

�)6� ��� 6""� ����������� ������ �� ������� -�� �-���� ��� ���� �%� ����

������� �� *�>� 0+> ��� ���� � ������ @(!����� ����� ����� ������ � *++ �� �/3

A< 8' (��������9 �� �' : 0��������& ����� %& ��� ����� ���� %& � ;3��3< +�= 3

������ ��� 5�&�&1!��--���� �/3!0(<+� 1% �7 ������ ����� ��� *� 0+�> /*! �������������� * / ���� ��������� * / "!%���� ��� 0 �%� � %���� ��� ���0+B -���� ��- ���� 72 "� ������� ���� �� ������ ��� ���� ���%�� 50+ �%�0+ �������� ��� 7 -�� > ���� � � �� ���� ������� ��� >B #:* �� .A �# � ��� ��������- +�*>� 0+> ������%��� ���%�� ��������% ���� 56�#72 #��� ����-������ ��� �������

�� ��� ������ �- >+ �� ��� ���� �- ������ ��� ������% 0 �# �- �����!.�!��� ��� 5)�� &�%���� )������ ���� ����� >* #� ��7 -�� ��� ���� 0(C0= � �-

������2 #���� ���� ��������� ���� ����%���� ����� ����� ��� � ��� ���������� ���

���������� ��������� ��� ������� � � E�4 �� "1(+++ 1&!������ 5E�4 ���

G��������� #672 ������ ��� �9������� �� ��� ����� ��� ���� 5� � � 1�;� �- ��������������2 #������ �9��� ���� �� ����-� ������� ��%�� ����� �- 6"" ��� �)6����

���-�� �� ���% +20� 0 ��� 0+ �%�0+ �� �- ������ ��� �- ��� ����2 /� �� ���� ������� ���� �� ������ ���%�� 50+ �%�0+ �� ������ ��� 7� ����� � ��� ������� �� ����� ���� ��� ������ �- ��� �� �������-������ ������2

3' ' )�� ��� �.. ������ � �"���� � ����� ���� $��� ����%��

�E/# -�� �-���� ��� ���� �%� ������� �����%� G���C������� %������ ��!

��-�%���� ���� ������ ��� �E1!6 ��� ������� �� *�>� 0+> ��� ���� � ������ @(!�����

����� ����� ������ � *++ �� �/3 ������ ��� �� ������ ����� �� �������!

-������ ������2 ?�� ���� ���� �� ������ ��� ���� ���%�� 50+ �%�0+ �� ������ ��� 7� � �� ���� ������� ��� >B #:* �� .A �#2 /� �� ���� ��� ���� �� ������ ���%��50+ �%�0+ �� ������ ��� 72 #���� ������ �� ������ �� ������� � ������� �-

��� �-��� <=C0*+ � �- �� ������ ���� ������ ��� ������ �E1 �� �� ���� ��� ��

��� ��������� � �E1, ����� ��� ���� 50+( ��� ����7 ���� ������ ��� ����C6"" ��

G3?#C�)62 6-��� *+ � ������� �� �� 6"" ���� ���� ������ ��� �E1 ��� ������

��� �&C����������2 6-��� � ���� ����� ���� ���� ��������� � �E1 ��� �������� �

��� G6#1 &9�����2 ������ ��� �9������� �� ��� ��� ��������� �- ���� ��������

���%���� �� ��� ����2

� �������

,'�' )��� ��� �..� &��� �&�� �/�� ����������9��� �

?� ����� �� ��� �9������� �-*!%���������� ��������� �����! ��4�� ��������%

��� ���-�� �� �� ������� ��� ���%���� �- �)6 �� 6"" �����2 #������� ����������

���� �--��������� ���%���� �� 6"" ��� �)6 ������ ��� ������� ������ ���� 6""

���%���� ���-��������� #;<�#;=� �� ������� 5) � +�+>7� ��� �)6 ���%����

���� #;<�#;=� ��� #;<�#;=� �� ������� 5) � +�+>7 5?���� 072 6-��� = ���4� �-�-����� ��� ��������� �- �)6� #;<�#;=� �� ������� ������ � ���!-��� �������� � ����� �� ���! ����� �%�� ��� ��� � ���� �- #;<�#;=� ��� �%�������

� ����� 5?���� *72 ?�� ��������� �- 6""�#;<�#;=� �� ������� -�� �-����

�� ��� � ����� ��� ������ �� ���� �%� 5) � +�+>7� ��� � ��%�� ������ �-

#;<�#;=� 5) � +�+>, ?���� *72

8' (��������9 �� �' : 0��������& ����� %& ��� ����� ���� %& � ;3��3< +�= 3 A>

,'3' )��� ��� �&1&��� �&�� �������� ����� ������� �

6� ������ � G%2 0� ��� ������� �- ��� ���� ���%���� �� ����� ����� ������ ����

�)6� �� ������� ������ �%��� ���� �- ��� #;*@ ���%�� 5�)6�#;*@�%�7� ���� ���6""� 56""�#;*@���72 ?�� �� ��� �- �)6�#;*@�%� �� ������� ������� �%��!����� 5) � +�+07 �-��� �9��� ����� �-���� ��� ��� ��� ��� ��� 6""�#;*@��� ������� � #;*@ ����2

,',' )��� �� ��� ��� ��$� � ���� $��� ����%��

?� ����-� ��� ������� ��������� �- �)6� �� ������� � � �����--����

������ �� �������� ��� ����� �- ����������� ������ �)6� ��� 6""� ���������

����� �� ������� -�� $�!�-���� �% �� ����� � �������� �������� �� ����

���%��2 :�� ������� ������ ���� ���� �)6� ��� 6""� ��� ���������� -�� ��!�-�����%� ���������� �����!.�!��� ��� ��� ��� ��� � �� �%��� ���� ���� ������

������ ����� ������� �)6� ��� 6""� �� ������� ��������� ���� ������ �� �� ��������� ����� ����� 50+ �%7 �- ����� ���� ���%��2 ���� ���%�� �� ������ ��� �%��!����� �%��� 5) � +�+07 � �)6� ��� 6""� ���� � �)6� ��� 6""� 5G%2 *72 �)6� ���6""� ���� -�� ���� �%� ���� ������ �� ������� �� ��� ����2 1� ������ �- ������ �����-�� �-���� ��� ���-���� �%�� ��� � �� ���� �� ��� ��� � �������� 5���� ���

�����72 #������ �9��� ����� ���% �)6 �� 6"" �� ��%���� ������ ���� ����� �����

���� ������ �� �� ����� ����-������ � ����� �� �������2

?���� 0

6������ �- ���� ����� �)6 ��� 6"" ������ ? �� ��������

1����� ��%���� ���� 5B7

�)6 6""

#;<�#;=� 00 � A 00 � <

#;<�#;=� << � (� <* � (�

#;<�#;=� 0< � > *A � =

#;<�#;=� .* � <� *A � >

� ������ ��������� ��� ���� 1�;� �- -��� ���������� ������ 5� � <72� ) � +�+>2

?���� *

6������ �- ����� ����� �)6 ��� 6"" ������ ? �� ������� �-��� ���� ������%��

1����� ��%���� ���� 5B7

�)6 6""

#;<�#;=� @ � * *> � <�

#;<�#;=� =< � (� .< � =�

#;<�#;=� 0< � < 0( � A

#;<�#;=� @ � * *> � A�

� &%�� ���4� �-��� ������� ��� > � �- 0+< ?#3;>+ ��0 �- �� 5� � A72

� ) � +�+>2

A( 8' (��������9 �� �' : 0��������& ����� %& ��� ����� ���� %& � ;3��3< +�= 3

G%2 02 ?��!���� ���-����� ��� ������� �- �E/#2 ������������ �9��� ��� �- �E/# -�� � ���� �%

5�����7 ��� �-��� * ����� �- �-���� 5����� 7 ������ ��� ����!��I�%��� �)6 �� 6"" ����� ��� 6�

���!#;*@2 )� ���� ��������� ��� �������%�� �- ������ ���� ���� ��� ��������2

G%2 *2 �)6� �� ������� ������� �� � ����� ���� ���%��2 �)6�� �)6�� 6""� ��� 6""� �� ������� -�� �-���� �%� ���� ����������� ������ ��� ������� ��� ������%��� ���%�� ��������% ���� � ������� �-

���� ���%��2 ����-������ �������� �- -��� ��� ����!��������� ? ������������� ��� �����-�� �� �����!.�!

��� ��� ���������� 5� 72 ������ ��� �9������� �� ��� ��� �- ����� ��������� 1�&� �- ��� ���� � � A2

8' (��������9 �� �' : 0��������& ����� %& ��� ����� ���� %& � ;3��3< +�= 3 AA

,'�' )��� ��� �..� �� ����� ���� $��� ����%�� �� $���

&9������� �- �)6 ��� 6"" �������� �� ����� ����� �� ������� �-��� ��

�� ������ ��� ����� ��� � ����2 6� ������ � G%2 .� �-��� �� �� ������ ���

��������� �- 6""� ���� � ����� -�� A�>� * �� +�>� +�.B �-��� <= � �� ������,

�������� ��� �)6� ���� ������� -�� <� 0 �� <*� *B2 6-��� <= � �- ���%�� ������ ��

�������� � �)6�6""� ��� ��������� ����������% �� <� +�>B 5G%2 .7, �������� �-���

A*C0*+ �� 6""� ��� �)6�6""� ���� ��������� ������� �)6� ���� �� ���� �������5.<� >B72 #������ �9��� ���� ���-�� �� �� �� ������� -�� �-���� �%� �������

� ������� �- � �� ����� ������ �� �--�� �� �9������� �- 6"" �� �)6 ��������,

�������� ��� ��������� �� ��� �9������� �- �)6 �� 6"" �������� �� �� ������� -��

���!�-���� �%� ��� ��� ����� �-��� �� �� ������ 5��� �����72

G%2 .2 �)6 ��� 6"" ������� �9������� �� ����� �� ������� �-��� ����� ���� ���%�� � ����2 �E/# -��

�-���� �%� ���� ������� ��� �� ��� �9������� �- 6"" ��� �)6 �������� �� ���� �� + � 5�7� <= � 5�7 ���

0*+ � 57 �- ������ ��� ����� ��� �� ���-����� ��� ������2 ?�� ���� 50+( ��� ����7 ���� ������ ���

����C6"" �� G3?#C�)62 6""� ���� ���� ������ ��� �&C����������2 ?�� ���� ���� �������� � ��� G6#1&9�����2 G%��� � � ������������� �9��� ��� �- -���2

A= 8' (��������9 �� �' : 0��������& ����� %& ��� ����� ���� %& � ;3��3< +�= 3

,'-' 2�%�� ���������& � )��� ��� �..�

3� ��� ��������� �� ���-�� �� ������ ������ �� ������ �9��� ����� ���% *++ /

��� -�� �)6 ��� ���)6 -�� 6""2 "��� ��������� ���� � ������� �������� �

��� ������2

� �������� �

?�� %���������� ������� �� ? ��� ���-�� %���������� ���%�� ���� ���� � ���

��� �� ����� ��� %���� �� ��� �������� 5������� �� ��2� 0@@.72 3� ����� �� � �����

�� �� ������ �������� �- ? ���� � �������� �� �9������� �- ��� ? ��� ������� ���

��� #;<� ��� #;=� �!������� �������, -������ ���� ���� #;<�#;=� �� ��������9��� ��������� �- ����� ���%�� �9�������!���� 51� ������ �� ��2� 0@@(,

'�4�� ��� ��� ��� ���� 0@@(, ���������� �� ��2� *++072 G�� ��� ������ � ����� ��

���-�� �� ����-� ����� ��%��������� ���� ��������� ? ��� �������� �������� -

����� ��������� �� �� ���� �� ����%��� � ��� ��� �--���� ? ���� -�� ���� ? ����2

3� ��� ������ �� ������ ���� ����� �� ������� �9������% �)6� ��� � #;*@�%�,������� ���� #;*@��� �� ������� ���� ���%���� �� ��� ���� -�� �' ��� �����

������ ��� %�� ����� ����� ������� �9������� �� ���%�� � ��� �����!� �������

��%������� �- *!%����� ����% ��� ������� �- ����� ? ����2

��!����� ������� ������� �� �9������ �- �)6�#;<�#;=� ����2 ?�� ������� �)6 ����% ��������� ��� �� ������ �- ���� ���� ���� ���� #;*@�%�2 ?�� ���������

�- 6""� #;*@���� ��� ��� � �� ��������� �� ���� ��� �������� �� ���� ����������-��� �� �-����2 ����� #;*@ � ��� 80 ������ �- ��� ���%�� ���� -������ �� �

������� -�� ��� ������� ������� �- ��� �9���������� ���9, � � ������� � ��I���� �-

�%!��!�� �� ����� 9���%��-�� ��� � �� �% ��� �--��������� �- �� �������

���%����� ���� 5� ����!/��� �� ��2� *+++72 ?���� ���� ��%%����� ���� ������ �

�)6 ����% �- ? ���� � � �������� �- � ��� ? ��� ������� ����% ���� �-����

��� ���� ��%%����� ���� ����� #;<�#;=� �� ������� ���� � ��� -������

51� ������ �� ��2� 0@@(, '�4�� ��� ��� ��� ���� 0@@(, ���������� �� ��2� *++072

?�� � ��� ��������� �� �)6� �� ������� ��%%����� ���� �)6� ���� %�� ����� � �����--���� ? ����� ��� ��� ���� ��������� �� 6""� �� ������� %�� ��������� ������ �� ������� � � ����!���%�� �����2 ?� ����� ��� ���������� ��� ����� �-

����������� ������ �)6� ��� 6""� ��������� ����� �� ������� �� ����� �

�������� �������� �� �� ��� ��������2 #���P���� ��� �������� �- ������ �)6���)6�� 6""�� ��� 6""� �� ������� ������ ���� ���� �)6� ��� 6""� ��� ����������-�� $�!�-���� �%� ���� ���� �� ������� �� �� ������ ��� ����� ����� �- ����� ����

���%��� ������� �)6� ��� 6""� �� ������� -�� $�!�-���� �%� ���� ������ ��

�������2 6� �� ��������� � ���� #;=� ? ���� 5�����%��� �� ��2� *+++7� ��� ����������� ���� ����� �)6� ��� 6""� ���� ����� � �����--���� ? ���� ������������� ���� 6""� ���� ����� ������������ ����2?�� ������ �- 6"" � ������ �� ���)6 � ��� ���� ��� �- ���� 0*!%���������

��4�� %������ ��� �� ? 5���80� .���)6!1���?��7 ��� ?� ���%��� 5���)6�0�+ 1���?��75'������ �� ��2� 0@@*7, ������%�� �)6 ����� � ��� ������ -�� ��� :�� -�� #< �-

8' (��������9 �� �' : 0��������& ����� %& ��� ����� ���� %& � ;3��3< +�= 3 A@

��� � ��� �� � ? ���%��� � ��� ���� �� ��������� ���� ��� ���� �� ���� ������

��� ��� ������� ������� � ��� ���80� <��)6 ����������� ������� �� ���� *

*!%��������� ��4�� %����� �� #;<. ��� #;<> -�� ������� ? ���� 5;� /��

�� ��2� 0@=(, ������ �� ��2� 0@A(, Q� �� ��2� 0@@(7, �� ���� �� � ���� **!%����� �� ��� #;=

��� -�� ������� ? ���� 5#����� �� ��2� 0@@<, ������ �� ��2� 0@@=72 ?�� ����� �-

�������� �- �)6��� #;*@�%� ? ���� ������� �%������� � �-���� �� ���2 3� �

������� ���� �)6 �����% %�� ����-� ��� ���-�� ������� ���� �� ����%���

� ��� -�� ���� ���� 5�����%��� �� ��2� *+++72 :�� ����%� ���� ��� ������� �- �

������� ������ ���� ���������� �� ���� �� �������� ������� ? ��� ����������� ���

���� ������ �� �� 6""� ��� #;*@���2 ?�� ���� �� ������ ������� -�� 6"" � �

%��������� �- A+ 4;�� � � � ����� ��������� *!%������������� ��� ��� ��� 5R0AB7

�� ���%� ��� ��� G��!�������� ����� �� �� ������� ��� �����-�� �% %����� -����!8

���� 33 ������� 5������ �� ��2� *+++72 ?�� �� ������ *!��4�� %����� ������ ��� 6""

��� ������� � ���� ������� �� ������� 5"������ �� ��2� 0@@<7 ��� � �� �� ? ����

��� ��� #;<�#;<> 6�#;*A� ���������� �����% ���� ��� ���� ������� � ��������������� � ���� �� ������� ��� ������������� 5"������ �� ��2� 0@@A72

?�� *!%���������� ���%�� ���� ��� � ����� �� ������� ��� ����� � ���

����� ���� �� ������� -�� ���-�4�% ��� ��������� �- � �����--���� ���� �� ���� �-

���%�� �����������2 6��������� � ��� ���-�� %���������� �� ���� �--�� ? ���

���%���� �- 6�#�� �� ��������� ��� ������� ������� 5NI ���!:�� ��� H����

0@@>72 ?�� ���� �������� �- ? ��� ���-�� %���������� ������ ���� �����

���%�� �--�� ? ��� -������ � ������ �� ������% �������� ��� ����� �������

���� ��� �--����� � ��� ? ���� 5�����%��� �� ��2� *+++, "������ �� ��2� 0@@A, ������

�� ��2� *+++72

���� �����������

?���4� ��� ��� �� ���)��� 53)& 7������/���F���� �������%��6������ 5H)6/7 -��

������ ��������2 ?�� ���4 ��� ��������� � ���� �� #:)6#�? 5.<=0<!/� *A(+@!/7

��� ;�6�6 5�6�33?!3)**<>@=7 H)6/2

����������

E���� &2E2� 1��������� 12/2� E���� #2� 0@@=2 #;<� ? ��� � ���� #;<> ������� ��� ��� ��������� �-

���%��S� ��-��% �����2 3 ����2 ?���� 0@� (0C(<2

E���-���� /2/2� 0@A(2 6 ���� ��� ������� ����� -�� ��� �����-���� �- ��%�� �������� �- ������

�����% ��� ������ �- ������C��� ����%2 6���2 E��� 2 A*� *<=C*>@2

#������ "2�2� /� ���4� #2� N������ ;2� '� ���4�� 2� 0@@<2 ? ��� ������� ������� � ������ ��-����

�- ��� ���� #;= ���2 �2 3 ����2 0>*� .@AC<+02

#�������4� 2� #����� �2�2� 0@=*2 ������ ���� ����% �� � ��4�� -�� ������� ? ����%� �� �������2

?�� �� <� (0C(A2

;� E���� ?2�2� $�� ��I� &2/2� ;� $����� �2&2� E���� 62?2� *+++2 #������ -����� -�� ����������� ����!

�� ������ ����� #;<� #;=����� �� �������2 $��� 3 ����2 0.� >00C>*+2;� /��� 62� "�� �2� �������� �2/2� 1������ )2� 0@=(2 3����-���� �- %���������� ���� ��� �������� -��

������ �%%����� �� ����� 5�����7 ���� ��� �����2 G&E1 "���2 0@<� *=C.*2

=+ 8' (��������9 �� �' : 0��������& ����� %& ��� ����� ���� %& � ;3��3< +�= 3

������� /2� /����!N������ N2� "��� "2� E�� � "2� 6� ��� 2� 0@@=2 6��������� � ��� ���-�� ������������

�� ? ���� -�� ������ �-���� � �� ����%��� �--����! � ��� #;=� ? ���� -�� ���� ����2 �2

3 ����2 0(0� (<0C(<=2

�������� Q2� �������� �2N2� N�� � 12� ���%� /2� E�� � "2�2� 0@@.2 �%������ �- ����� *�.!����������-�����

�9������� ��������� ��� �������� �- ������ �%%����� 5�)67� �� �)6� ��������� � ��������%

��� �����2 �2 E��2 #�� 2 *(=� .+=0C.+=@2

�����%���� "2&2� ������� /2� E�� � "2�2� 6�� ��� �2;2� 6� ��� 2� *+++2 ;--��������% ������� � ��� ���

�--���� #;= ? ���� �� ������� �9������� �- ��� ���-�� *!%�����2 �2 &9�2 /��2 0@0� 0*<0C0*<(2

����������� �2� � ���� �2� '������� 2� /������ �2� ����!"����� �2� '������� &2� 0@@A2 )�� ���� �����

��� �� ���������� �����2 ��2 3��2 )�2 &�-2 ��2 0+� *>+C*>>2

����������� �2� ����!"����� �2� '������� 2� � ���� �2� '������� &2� 0@@=2 3 ���� �� ����� ����������

�-���� � ����� �%�2 $��2 3 ����2 3 ���������2 (<� .(AC.=02

����������� �2� ���-��� �2� )���� 62� /������ #2� /�����T�� "2G2� '������� &2� *++02 #� ������� ��������� �-

��� #;<�#;=� ��� #;<�#;=� �� ������� � ��� ��� �������� �� ����� ����������2 $��2 3 ����23 ���������2 A@� *<@C*>@2

����������� �2� E���� /2� ������� G2� ������� 12� ;������ �2� '������� &2� :��F��� E2� 0@@@2 6 � ������� �����

�� ��� ���-���� �- ��� ��������� ��� ����� ���2 �&� � ������� ����2 ����2 E��� 2 E�������2

*@� *0@C*.<2

� ����!/���� 62� ������� �2�2� �� 6�����!#���� ;2G2� /������ "2� E�������� /2�2� "������ ;2� *+++2

/������� ����% ��� ������������ �- ��� �% �� ���%�� �� �� �� #;*@� ��� ���%�� ����0 ������2

?������������� A+� (<@C(>>2

NI ���!:��� 12� H���� ?2� 0@@>2 #;*. ������ ��� �� %�������!����% ���� � ��� ��� �%%��%���� �-

&E$!�����-�� �� �� �� E!��� ����2 ��������%� >� <<.C<>02

"������� 2� #������ 2� ������ �2� ������ 62� /�����T�� "2G2� '������� &2� 0@@<2 ��%���� �- � #;<�

���� �������� ��� ���� ������������ �� ��������� ��� ����� ����2 3 �����%� =.� <0+C<0.2

"������� 2� ������� G2� E���� 2� #������ 2� /������!#���� 12� 6������� �2� '������� &2� 0@@A2 ���������

��� ����� ���� ���%���� �� �� ���� ? ��� �������������2 3 ����2 3�����2 *(� >A@C>=A2

:���� E2� 1� ��-���� 62� /�����%��� #2� Q�� ������ N2� ���%� �2� �-�--� &2� 1��� ������ 62� ���� �2� 0@@=2

$���!������ ����������� ����!���-� �9������ #;<�#;=� � ��� ? ������ ���� � ����2 �2$���2 A*� <=((C<=A02

:���� E2� E���� /2� ������ �2� /�����T�� "2G2� ���-��� �2� '������� &2� *+++2 ?�� ��������� ������� �-

������ 5������ �&� %���7 ���%%������2 �2 6%�2 G��� #�� 2 <=� (*(AC(*A+2

������� /2&2� N����� &262� "����� 2� 1������ )2� 0@A(2 3 ����� �� ������ �� ��� ���-�� �- ��� ������

5������ �&� %���7 �%%�����2 #��������2 ��2 >0� 0+AC00+2

�������� /2;2� "������ �2N2� 1���� ;2�2� 0@=<2 ���������� ��� ������������ �- �������� ��������

������ ��� ����� �E"2 �2 3 ����2 0..� .(=C.A.2

������� G2� "������� 2� #������ 2� :���� E2� ����������� �2� ;������ �2� '������� &2� *+++2 3������� �- ���

������� -�� ��������� ��� ����� ���� -�� ���� ���� ��� �����2 ��������%� 0+� <>@C<(>2

� F����!/������� �2� ����������!�����%�� �2� ����!"����� �2� '������� &2� /�����!"������ �2� N������� 12�

0@@A2 "����� � ��� ���������� ���� �- ����� �9��� ������� �-���� ��� ����� ����������2 �2 #� �2

������2 00A� *.AC*>*2

������ �2� "�4��!3������ /2� 1������ )2� 0@A(2 1�������� �- ���� ��� ����� ��� ��� ������������� ��

��� ��� �- ������ �%%�����2 #���2 3 ����2 *>� 0*@C0.<2

1��� ������� 62� �������� /2�2� E����%� �2�2� ���I� 12� N�������4� H2�2� 0@=A2 1 ��������� �9������� �-

#;< ��� #;= ���%��� �� � ���������� ��������� �- �����% ����� ? �� �������2 &��2 �2 3 ����2 0A�

0*@AC0.+*2

1���%�� ;2� /������� �2� ;���� 12� )�������� �2� /��%������ 12� #��4��� &2 5&��27� 0@@*2 6���C����

#�� ����D 6 �������42 ���� #�� �� #� ����� �4-���� 3"� H162

1� ��-���� 62� ���� �2� 1��� ������� 62� 0@@(2 G������� ������������ �- ����� #;<�#;=�

�9������ ? �� �������2 #���2 3 ����2 0(=� *@0C*@@2

1�������� �262� 0@@<2 E��� ��� ������2 3�D /��%���� Q2"2 5&�27 ;������ �- 1���� (�� &����2 3��� 1����

H������� ������ 6 ��� 3���� H1� �2 *.AC*<02

?���� 12� )����� �2� 0@==2 ������� ���� �- ����� ����� � ������� ? ���� � ��� ���%���� �- ����%���

3�2 �2 3 ����2 0<0� <<+C<<*2

8' (��������9 �� �' : 0��������& ����� %& ��� ����� ���� %& � ;3��3< +�= 3 =0

$����I��� G2Q2� ������ �2#2� ��� ;�%%����� :2�2� E�44��� �2;2� "������ /2#2E2� ;������ �2� ���I����� �2� 0@=.2

?�� %�������� �--����� /H!)6)6� ����� ������ � �� �� ���4�����2 E��� 2 E�����2 ��2

#� ��2 00A� <A+C<A(2

Q�� Q2� ������� �2�2� ����� �262� 1������� 12:2� N������ N2�2� 0@@(2 3����-���� �- #;= �� � ������ �%%�����

5�)67 ������� ������ �� ����� ��� �����2 �2 &9�2 /��2 0=<� A>@CA(A2

'������� &2� "������� 2� /�����T�� "2G2� $������� "2� ;������ �2� /�������� �2� 0@@*2 1��-�� �-

��������� ��� ����� ����2 ������I�%��� �2 @� *+<C*+=2

'�4�� ���� G262� 0@@@2 &9������ #;<�#;= ������!������ ? ����2 $��2 3 ����2 3 ���������2 A*�

>>C((2

'�4�� ���� G2� ���4��� �2 2� 0@@(2 ;�������� �- ����� #;<�#;= ������!������ ? �� ������� �

����!�������� �� ���� ������2 3 �����%� =A� <@.C>+<2

'�4�� ���� G2� ��� ���� 2� 0@@(2 G������� ��� �������� ������� �- ����� ��������� ����� #;<�#;=

������!������ ? ����2 3 �����%� =A� >++C>+=2

'�4�� ���� G262� ������� #2� 1�������� Q2/2� 1����4��� ;2� ��� ���� 2�2� ���%� �2� 1��� ������ 62�

"������ �2N2� 0@@=2 ;�-���� �- ��� ���-�� �- �������� �������� �%���� ����� #;<> ���

#;<> D ������ -�� ��� #;<>�#;<> ��� #;<< ���%���� �- ��� 1���� 3����������� 1��� #;

Q��4����2 $��2 3 ����2 3 ���������2 (+� .(AC.=A2

=* 8' (��������9 �� �' : 0��������& ����� %& ��� ����� ���� %& � ;3��3< +�= 3


Recommended