Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct REF MOL2150 Rev. E Um ensaio de PCR em tempo real indicado para a detecção qualitativa e a diferenciação do DNA viral do HSV-1 e/ou HSV-2 in vitro. Para Uso Diagnóstico in vitro APLICAÇÃO O ensaio Focus Diagnostics Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct é indicado para uso no equipamento 3M Integrated Cycler para detecção qualitativa e diferenciação de HSV-1 e HSV-2 presente no fluido cerebroespinhal (CSF, Cerebrospinal Fluid) ou esfregaço genital de pacientes com sinais e sintomas de infecção por HSV-1 ou HSV-2 no sistema nervoso central (CNS, Central Nervous System) ou genitália. Esse teste é auxiliar no diagnóstico diferencial de infecções por HSV-1 e HSV-2 no CNS ou genitália. Resultados negativos não descartam infecção por HSV-1 ou HSV-2 e não devem ser usados isoladamente para tomar decisões de tratamento ou de condutas médicas. O ensaio não é destinado para uso como teste de triagem para detectar a presença de HSV-1 e HSV-2 no sangue ou hemoderivados. RESUMO E EXPLICAÇÃO HSV-1 e HSV-2 são membros da subfamília alfa-herpesviridae. HSV é um vírus envelopado com um capsídeo contendo DNA viral. Embora HSV-1 e HSV-2 sejam estreitamente relacionados, os dois vírus são sorologicamente e geneticamente distintos. 1,2 Herpes genital causada por HSV é uma das doenças sexuais mais comumente transmitidas. Infecção primária por HSV ou reativação de doença latente podem causar lesões cutâneas ou nas mucosas. 1,3 Estas lesões são geralmente auto-limitantes, mas doença severa pode ocorrer em pacientes debilitados, mulheres gestantes e crianças. O diagnóstico de lesões de herpes baseia-se predominantemente em métodos de cultura ou coloração por anticorpo fluorescente direto (DFA, direct fluorescent antibody). 3,4 Entretanto, estes métodos são trabalhosos, demorados e subjetivos. 1,5 Um teste rápido e preciso para infecção por HSV utilizando-se detecção molecular pode ser crítico para tomada de decisão terapêutica e para controle da infecção. 4,5 Encefalite é uma inflamação no cérebro associada a evidências clínicas de disfunção neurológica. Dos patógenos reportados por causar encefalites, a maioria é virus. 6 Em geral, as etiologias mais comumente identificadas nos Estados Unidos são vírus Herpes Simplex, vírus West Nile e enterovírus, seguidos por outros herpes vírus. 6 HSV causa aproximadamente 5-10% de todos os casos de encefalites e é uma das causas mais comuns de encefalite esporádica identificadas globalmente. 6 Encefalite por HSV ocorre em todas as idades e durante todas as estações do ano. A encefalite por HSV-1 é mais comum em adultos e a por HSV-2 é mais comum em neonatos. 6 Um estudo reportou a taxa de 1 caso de herpes para cada 3.200 neonatos nascidos vivos nos EUA. 7 As características clínicas envolvidas com a encefalite por HSV incluem febre, dor de cabeça na região hemicraniana, alterações de linguagem e comportamento, perda de memória e convulsões. 6 A utilidade do teste de amplificação de ácido nucléico (ex. PCR) de amostras de CSF aumentou significativamente a habilidade de diagnosticar infecções do SNC, especialmente infecções virais causadas por herpesvírus. 6 Culturas de CSF geralmente são de valor limitado na determinação de causas virais de encefalites mas são muito importantes no diagnóstico de infecções bacterianas e fúngicas. 6 A Sociedade de Doenças Infecciosas da América (IDSA, Infectious Diseases Society of America) recomenda testar herpes simplex por PCR em todas as amostras de CSF de pacientes com encefalite. Para pacientes com encefalites e resultado de PCR negativo para herpes, deve-se considerar repetir o teste após 3-7 dias naqueles que apresentarem síndrome clínica compatível ou neuroimagem com localização no lóbulo temporal. 6 O Congresso Americano de Obstetrícia e Ginecologia (ACOG, American Congress of Obstetricians and Gynecologists) reconheceu que o PCR do HSV é 1,5-4 vezes mais sensível que a cultura viral, que as amostras de PCR são mais fáceis de serem mantidas e que o PCR é o teste de escolha no diagnóstico de infecções do sistema nervoso central (encefalites e meningites). 8
Transcript
Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct
REF MOL2150 Rev. E
Um ensaio de PCR em tempo real indicado para a detecção qualitativa e a diferenciação do DNA viral do
HSV-1 e/ou HSV-2 in vitro.
Para Uso Diagnóstico in vitro
APLICAÇÃO O ensaio Focus Diagnostics Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct é indicado para uso no equipamento 3M Integrated Cycler para detecção qualitativa e diferenciação de HSV-1 e HSV-2 presente no fluido cerebroespinhal (CSF, Cerebrospinal Fluid) ou esfregaço genital de pacientes com sinais e sintomas de infecção por HSV-1 ou HSV-2 no sistema nervoso central (CNS, Central Nervous System) ou genitália. Esse teste é auxiliar no diagnóstico diferencial de infecções por HSV-1 e HSV-2 no CNS ou genitália. Resultados negativos não descartam infecção por HSV-1 ou HSV-2 e não devem ser usados isoladamente para tomar decisões de tratamento ou de condutas médicas. O ensaio não é destinado para uso como teste de triagem para detectar a presença de HSV-1 e HSV-2 no sangue ou hemoderivados.
RESUMO E EXPLICAÇÃO HSV-1 e HSV-2 são membros da subfamília alfa-herpesviridae. HSV é um vírus envelopado com um capsídeo contendo DNA viral. Embora HSV-1 e HSV-2 sejam estreitamente relacionados, os dois vírus são sorologicamente e geneticamente distintos.1,2 Herpes genital causada por HSV é uma das doenças sexuais mais comumente transmitidas. Infecção primária por HSV ou reativação de doença latente podem causar lesões cutâneas ou nas mucosas.1,3 Estas lesões são geralmente auto-limitantes, mas doença severa pode ocorrer em pacientes debilitados, mulheres gestantes e crianças. O diagnóstico de lesões de herpes baseia-se predominantemente em métodos de cultura ou coloração por anticorpo fluorescente direto (DFA, direct fluorescent antibody).3,4 Entretanto, estes métodos são trabalhosos, demorados e subjetivos.1,5 Um teste rápido e preciso para infecção por HSV utilizando-se detecção molecular pode ser crítico para tomada de decisão terapêutica e para controle da infecção.4,5 Encefalite é uma inflamação no cérebro associada a evidências clínicas de disfunção neurológica. Dos patógenos reportados por causar encefalites, a maioria é virus.6 Em geral, as etiologias mais comumente identificadas nos Estados Unidos são vírus Herpes Simplex, vírus West Nile e enterovírus, seguidos por outros herpes vírus.6 HSV causa aproximadamente 5-10% de todos os casos de encefalites e é uma das causas mais comuns de encefalite esporádica identificadas globalmente.6 Encefalite por HSV ocorre em todas as idades e durante todas as estações do ano. A encefalite por HSV-1 é mais comum em adultos e a por HSV-2 é mais comum em neonatos.6 Um estudo reportou a taxa de 1 caso de herpes para cada 3.200 neonatos nascidos vivos nos EUA.7 As características clínicas envolvidas com a encefalite por HSV incluem febre, dor de cabeça na região hemicraniana, alterações de linguagem e comportamento, perda de memória e convulsões.6 A utilidade do teste de amplificação de ácido nucléico (ex. PCR) de amostras de CSF aumentou significativamente a habilidade de diagnosticar infecções do SNC, especialmente infecções virais causadas por herpesvírus.6 Culturas de CSF geralmente são de valor limitado na determinação de causas virais de encefalites mas são muito importantes no diagnóstico de infecções bacterianas e fúngicas.6 A Sociedade de Doenças Infecciosas da América (IDSA, Infectious Diseases Society of America) recomenda testar herpes simplex por PCR em todas as amostras de CSF de pacientes com encefalite. Para pacientes com encefalites e resultado de PCR negativo para herpes, deve-se considerar repetir o teste após 3-7 dias naqueles que apresentarem síndrome clínica compatível ou neuroimagem com localização no lóbulo temporal.6 O Congresso Americano de Obstetrícia e Ginecologia (ACOG, American Congress of Obstetricians and Gynecologists) reconheceu que o PCR do HSV é 1,5-4 vezes mais sensível que a cultura viral, que as amostras de PCR são mais fáceis de serem mantidas e que o PCR é o teste de escolha no diagnóstico de infecções do sistema nervoso central (encefalites e meningites).8
Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct kit Página 2
PRINCÍPIOS DO PROCEDIMENTO O sistema de ensaio Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct é um PCR em tempo real que permite amplificação direta, detecção e diferenciação do DNA do HSV-1 e/ou HSV-2 de amostras não processadas de CSF e de esfregaço genital sem extração de ácidos nucleicos. O sistema é composto pelo ensaio Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct, 3M Integrated Cycler (com software 3M Integrated Cycler Studio), Direct Amplification Disc (disco de amplificação direta) e acessórios. No ensaio Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct, primers-sondas fluorescentes bidirecionais são usados juntamente com os primers reversos correspondentes para amplificar HSV-1, HSV-2 e controles internos. Regiões conservadas do gene da DNA polimerase de HSV-1 e HSV-2 são alvos para identificar o DNA de HSV-1 e HSV-2 nas amostras. Um controle interno é utilizado para detectar falha e/ou inibição do PCR. MATERIAIS FORNECIDOS O ensaio Focus Diagnostics Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct contém reagentes suficientes para 24 reações. Ao recebê-lo, armazene todos os reagentes em temperatura entre -10 a -30 ºC (não utilize freezer do tipo frost-free). Cada frasco contém material suficiente para uma única utilização. Utilize dentro de 30 minutos após descongelado.
DNA polimerase, tampão, dNTPs, molde de DNA (Controle Interno), -primers-sondas marcadas com corante fluorescente específicos para detecção de HSV-1 e/ou HSV-2 e para o controle interno de DNA.
Alvo Sonda
Fluoróforo (Corante)
Excitação (nm) Emissão (nm) Gene- Alvo
HSV-1 CFR610 590 610 HSV-1 DNA polimerase
HSV-2 FAM 495 520 HSV-2 DNA polimerase
Controle Interno de DNA
Q670 644 670 N.D.
Código de Barras do kit Simplexa™ HSV 1 & 2
Parâmetros específicos do teste.
MATERIAIS FORNECIDOS SEPARADAMENTE 1. Kit do disco de amplificação direta (Direct Amplification Disc) (REF MOL1455)
a) Direct Amplification Discs para uso no 3M Integrated Cycler MATERIAIS NECESSÁRIOS MAS NÃO FORNECIDOS 1. 3M Integrated Cycler com software 3M Integrated Cycler Studio versão 6.0 ou superior 2. Simplexa™ HSV 1 & 2 Positive Control Pack (REF MOL2160) 3. Pipeta de volume fixo de 50 µL (VWR Signature™ Fixed Volume Ergonomic High-Performance Pipette Modelo VWR FE50
ou equivalente) 4. Ponteiras descartáveis, sem nucleasse, estéreis e com filtro para pipetas (recomenda-se usar ponteiras extra longas, ≥ 91
mm, para pipetar diretamente dos tubos primários de coleta). 5. Freezer (descongelamento manual) à temperatura entre -10 e -30 °C (para armazenamento congelado dos componentes do
kit e das amostras) 6. Refrigerador à temperatura entre 2 e 8 °C (para amostras) 7. Luvas descartáveis sem talco
Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct kit Página 3
MATERIAIS RECOMENDADOS 1. CSF sintético Golden West Biologicals: número de catálogo OH1030-S; SeraCare: número de catálogo HSP-515 ou
equivalente para usar como controle sem amostra (No Template Control, NTC) quando amostras de CSF forem testadas. 2. Meio de transporte universal (UTM, Universal Transport Media) para uso como controle sem amostra (No Template Control,
NTC) quando amostras de esfregaço genital forem testadas. MANUZEIO E ARMAZENAMENTO DE REAGENTES 1. Armazene os reagentes a temperaturas entre -10 e -30 °C (não utilize congeladores do tipo frost-free). 2. Antes do uso, deixe os reagentes descongelarem à temperatura ambiente (entre 18 to 25 °C, aproximadamente). 3. Não utilize os kits nem os reagentes fora das datas de validade. 4. Inicie o teste dentro de 30 minutos após a remoção da Mistura Reativa armazenada no freezer. 5. Não turbilhone a Mistura Reativa. 6. Não congele novamente a Mistura Reativa. ADVERTÊNCIAS E PRECAUÇÕES 1. Ao lidar com os reagentes do kit use equipamentos de proteção pessoal, tais como (mas não limitados a) luvas e aventais de
laboratório. Ao terminar os testes, lave cuidadosamente as mãos. 2. Não fume, não beba, não coma, não manipule lentes de contato nem se maquie em áreas em que são usados os reagentes
do kit e/ou amostras de seres humanos. 3. Descarte todos os reagentes do kit e as amostras provenientes de seres humanos que não foram utilizados, de acordo com
as normas locais, estaduais e federais. 4. Considere todas as amostras e discos como capazes de transmitirem agentes infecciosos. A contaminação de amostras de
pacientes ou de reagentes pode originar resultados errados. Utilize boas práticas de laboratório e controle o fluxo de trabalho.9, 10
5. Utilize exclusivamente o protocolo descrito neste folheto. Digressões do protocolo ou o uso de intervalos de tempo ou de temperaturas que não os especificados podem originar resultados errados.
6. A configuração do teste deve ser realizada à temperatura ambiente (entre 18 e 25 °C, aproximadamente). 7. Utilize pipetas de volume fixo ou equivalentes para transferir a amostra e a mistura reativa. 8. Evite tocar a face inferior do laminado que ficará em contato com os orifícios e a superfície do disco. 9. Para evitar resultados potencialmente errôneos, certifique-se de que a amostra e o reagente sejam adicionados nos orifícios
apropriados. 10. Termine de carregar um conjunto de amostra e reagente e aplique o adesivo laminado cobrindo os orifícios antes de abrir o
adesivo laminado do conjunto de orifícios das amostras e reagentes adjacentes. 11. Inicie a corrida dentro de 30 minutos após a remoção do frasco da Mistura Reativa do freezer. 12. Não tente remover o adesivo laminado da cunha que já foi utilizada nem utilizar novamente as cunhas já utilizadas em
corridas anteriores. 13. Os discos podem ser reutilizados até que todas as 8 cunhas tenham sido usadas. Descarte os discos usados sem remover
a tampa laminada em lixo infectante. 14. Após cada uso, armazene os discos DAD horizontalmente com a parte laminada numerada voltada para cima. 15. A mistura reativa contém > 1% glicerol, o que pode causar irritação se inalado ou em contato com a pele. Se ocorrer
inalação ou contato com a pele, deve-se tomar medidas de primeiro socorros. 16. Não utilize o kit se a embalagem ou o conteúdo estiver quebrado ou danificado e entre em contato com a Focus Diagnostics.
As informações para contato estão na última página deste documento. 17. A matriz espectral deve ser instalada em cada 3M Integrated Cycler e não deve ser alterada a menos que um código QR
atualizado para o aparelho seja fornecido pela Focus Diagnostics. A matriz espectral é única para cada 3M Integrated Cycler. A matriz espectral é única para cada 3M Integrated Cycler. A matriz espectral foi fornecida com o aparelho 3M Integrated Cycler na capa do Manual de Hardware do 3M Integrated Cycler. Se o rótulo da matriz não for escaneado ou não puder ser encontrado, entre em contato com a Focus Diagnostics. As informações para contato estão na última página deste documento.
18. Não instalar ou alterar a matriz espectral pode resultar em resultados falsos. INSTRUÇÕES DE USO
A. COLETA DE AMOSTRAS Amostra de CSF Tipo de amostra aceitável é CSF. Amostras devem ser transportadas em gelo e armazenadas entre 2 e 8°C, por até 7 dias após a coleta. Se o período entre a coleta e o processamento da amostra for maior que 7 dias, armazená-la a -70°C. Amostra de esfregaço genital Tipo de amostra aceitável é esfregaço genital, armazenado em meio para transporte BD UVT, Remel M4, Remel M4RT, Remel M5, Remel M6 ou UTM. Seguir as recomendações do fabricante para o meio de coleta e os tipos de esfregaços aceitáveis. Não utilizar esfregaços de alginato de cálcio, pois eles podem conter substâncias que inibem o teste de PCR.
Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct kit Página 4
Amostras devem ser transportadas em gelo e armazenadas entre 2 e 8°C, por até 7 dias após a coleta. Se o período entre a coleta e o processamento da amostra for maior que 7 dias, armazená-la a -70°C.
B. CONFIGURAÇÃO DO EQUIPAMENTO DE PCR EM TEMPO REAL 1. Consulte o manual do operador do 3M Integrated Cycler para obter detalhes sobre como configurar o software 3M
Integrated Cycler Studio e incluir definições de ensaios, programar e analisar as corridas no 3M Integrated Cycler.
C. CARREGAMENTO DO DISCO DE AMPLIFICAÇÃO DIRETA E AMPLIFICAÇÃO POR PCR EM TEMPO REAL
NOTA: Nenhuma extração de amostras é necessária antes da etapa de amplificação por PCR.
1. Selecione as amostras a serem testadas. 2. Descongele os frascos da Mistura Reativa em temperatura ambiente (entre 18 e 25°C, aproximadamente). Descongele
um frasco da Mistura Reativa para cada amostra ou controle a ser testado. 3. Escaneie o código de barras do frasco da Mistura Reativa do Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct Reaction ou do cartão com o
código de barras. 4. Escaneie o código de barras do disco no Direct Amplification Disc (DAD). 5. Escaneie ou digite no identificador de cada amostra. 6. Levante a borda dos adesivos laminados, um a um, sem removê-los totalmente para expor os orifícios Amostra
(SAMPLE) e Reação (R) (Figura 1 e 2). Evite tocar a face inferior do laminado que ficará em contato com os orifícios e a superfície do disco.
7. Certifique-se de que a mistura Reativa esteja totalmente descongelada. Centrifugue brevemente os tubos conforme necessário. (Não turbilhone a Mistura Reativa).
8. Use a pipeta de volume fixo para transferir 50 µL da Mistura Reativa para o orifício de reação (R). 9. Use a pipeta de volume fixo para transferir 50 µL das amostras ou do controle; pipete as amostras ou o controle dentro
do orifício amostra (SAMPLE). 10. Cubra a cunha selando os orifícios com o adesivo laminado que havia sido parcialmente levantado e pressione
firmemente próximo a borda da cunha. Se o adesivo laminado original estiver rasgado não carregue a cunha. Neste caso, carregue outra cunha.
11. Rasgue a aba do adesivo laminado de cobertura ao longo da linha perfurada. 12. Repita as etapas 6 a 11 para a(s) próxima(s) amostra(s). 13. Carregue o DAD selado no 3M Integrated Cycler e inicie a corrida.
Figura 1 – Disco com adesivo laminado removido antes do
uso das Cunhas de Amostras [Sample] e Reações [R] número 3
Figura 2 –Orifícios para Amostras [Sample] e Reações [R]
NOTAS (para propósito de informação – não é necessária ação/interpretação do usuário): 1. Os kits da Focus Diagnostics podem conter números de versões para as definições de ensaio. Se o número da versão
existir, o mesmo deverá ser anexado à Definição do ensaio, ex. “Amostra IVD Ensaio 2”. Quando existirem múltiplas versões, o programa automaticamente utiliza a definição do ensaio associada com o número do lote escaneado.
CONTROLE DE QUALIDADE O SimplexaTM HSV 1 & 2 Positive Control Pack (MOL2160) pode ser usado como controle externo para testes de controle de qualidade (QC, Quality Control), treinamento e testes de proficiência. CSF sintético é recomendado como um controle sem amostra (NTC) quando testar amostras de CSF e UTM é recomendado como NTC quando testar amostras de esfregaço genital. Foram estabelecidas as faixas para o controle de qualidade conforme indicado na tabela a seguir. Se os controles não estiverem
Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct kit Página 5
dentro desses parâmetros, os resultados dos pacientes deverão ser considerados inválidos e o teste deve ser repetido. A Focus recomenda testar os controles uma vez por dia. Cada laboratório deve estabelecer suas próprias faixas de controle de qualidade e a frequência de execução dos testes de controle de qualidade tendo como base as leis e regulamentações locais aplicáveis, bem como padrões de boas práticas de laboratório. Consulte a bula do SimplexaTM HSV 1 & 2 Positive Control (PI.MOL2160) para instruções de como correr o controle positivo.
Resultados Esperados do Controle
Tipo de Controle HSV-1 HSV-2 Controle Interno de DNA
(DNA IC, DNA Internal Control) Simplexa™ HSV 1 & 2 Positive Control Pack1 Detectado Detectado Não se aplica2
Controle Sem Amostra (NTC)
Não Detectado Não Detectado Válido
1 Os valores típicos de Ct para o Controle Positivo (Positive Control) variam entre 25 a ≤40. 2. A detecção do DNA do Simplexa™ DNA Internal Control (DNA IC) não é necessária para um resultado válido.
RESULTADOS Ao completar a corrida, o programa automaticamente interpreta e apresenta os resultados.
1. Para cada ID de acesso (ID da Amostra) adicionado, o programa apresenta um resultado: “Detected” (Detectado), “Not Detected” (Não Detectado), “Invalid” (Inválido) ou “EC500” para HSV-1 e HSV-2.
a. Resultado “Detected” indica a presença de DNA do HSV-1 e/ou HSV-2 na amostra do paciente. b. Resultado “Not Detected” indica a ausência de DNA do HSV-1 e/ou HSV-2 na amostra do paciente. c. Resultado “Invalid” indica a inabilidade de determinar a presença ou ausência de DNA do HSV-1 e/ou HSV-2
na amostra do paciente. Esse resultado pode ocorrer devido a 1) falha do Controle interno do DNA (DNA IC) ou 2) falha em detectar quantidades suficientes da amostra. A amostra deve ser testada novamente. Ver a seção “Resultados Inválidos” a seguir.
d. Resultado “EC500” indica um erro na qualidade dos dados para o(s) analito(s) viral(ais) em questão. O programa não foi capaz de determinar uma amplificação válida para a(s) análise(s). A amostra deve ser testada novamente.
e. Resultado “EC505” indica um erro na qualidade dos dados para o analito viral. O programa não foi capaz de determinar uma amplificação válida para o analito. Entre em contato com a assistência técnica da Focus Diagnostics. As informações de contato podem ser encontradas na última página deste documento.
2. Imprimir o relatório conforme necessário. a. Exportar os resultados conforme necessário
RESULTADOS INVÁLIDOS No caso de um resultado “Invalid” (Inválido), teste a amostra novamente com um novo frasco de mistura reativa do mesmo kit ou de um novo kit. Se o problema persistir, entre em contato com o departamento de Serviços Técnicos da Focus Diagnostics. LIMITAÇÕES 1. Para uso de diagnóstico in vitro. 2. Apenas para exportação. 3. Os resultados desse teste devem ser considerados em conjunto com o histórico clínico, dados epidemiológicos e outras
informações laboratoriais disponíveis para a avaliação clínica do paciente. 4. A detecção do ácido nucleico viral depende da coleta, do transporte, manuseio e armazenamento apropriado da amostra. A
não realização dos procedimentos apropriados em qualquer um desses passos pode levar a resultados incorretos. 5. A prevalência de infecção(ções) oral(is) pode(m) afetar o valor prognóstico do teste. 6. Os resultados negativos não excluem infecções por HSV no SNC e não devem ser utilizados como base sólida para
tratamento ou outras condutas médicas. 7. Resultados falso-negativos podem ocorrer se os vírus estiverem presentes em um nível abaixo da sensibilidade analítica do
ensaio ou se o vírus tiver mutações genômicas, inserções, deleções ou rearranjos ou se o teste for realizado muito precocemente no decurso da enfermidade.
8. Para pacientes com encefalites e resultado de PCR negativo para herpes, deve-se considerar repetir o teste após 3-7 dias naqueles que apresentarem síndrome clínica compatível ou neuroimagem com localização no lóbulo temporal.3
9. Em algumas circunstâncias, poderá ser indicada a repetição do teste ou a execução do teste com outro dispositivo. Este teste não descarta a presença de infecção causadas por outros patógenos virais ou bacterianos.
10. Um resultado positivo neste teste não descarta infecções causadas por outros patógenos virais ou bacterianos. Os ácidos nucleicos virais podem persistir in vivo independentemente da viabilidade do vírus. A detecção do analito alvo não implica que os correspondentes vírus sejam infecciosos ou os causadores dos sintomas clínicos.
11. Quando altos níveis de HSV-1 estiverem presentes juntamente com baixos níveis de HSV-2, o sinal da reação do HSV-2 pode não ser adequado para ser detectado devido à interferência competitiva.
Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct kit Página 6
12. A prevalência de infecção(ções) oral(is) pode(m) afetar o valor prognóstico do teste. 13. Este é um teste qualitativo e não fornece um valor quantitativo para os vírus presentes e detectados. 14. O desempenho desse teste não foi estabelecido para triagem de HSV em amostras de sangue ou de hemoderivados ou para
uso com amostras que não sejam CSF ou esfregaço genital. 15. O desempenho desse teste não foi estabelecido para indivíduos imunocomprometidos. 16. O desempenho desse teste não foi estabelecido para monitorar o tratamento da infecção por HSV no SNC. 17. A informação do frasco da Mistura Reativa do Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct só pode ser transferida para o 3M Integrated
Cycler Studio através do escaneador de código de barras. Se o escaneador não estiver funcionando, ou se você não puder transferir a informação por qualquer razão, entre em contato com os Serviços Técnicos da Focus Diagnostics.
Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct kit Página 7
CARACTERÍSTICAS DE DESEMPENHO VALORES ESPERADOS – Amostras de CSF Os valores esperados observados de HSV-1 e HSV-2 na população prospectiva no estudo clínico do ensaio Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct variaram entre as instituições e são mostrados na tabela abaixo.
População da Amostra
Local de Coleta a Amostra
No. de Amostras
Valores Esperados baseados em Ensaio Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct
HSV-1 HSV-2 Não
Detectado
Prospectivo
1 31 0,0% (0/31) 6,5% (2/31) 93,5% (29/31)
7 24 4,2% (1/24) 0,0% (0/24) 95,8% (23/24)
8 94 4,3% (4/94) 5,3% (5/94) 90,4% (85/94)
9 15 0,0% (0/15) 0,0% (0/15) 100,0% (15/15)
All 164 3,0%
(5/164) 4,3%
(7/164) 92,7%
(152/164)
Categoria de Idade
Prospectivo - Número de Amostras pelo Ensaio Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct
Combinado Feminino Masculino
HSV-1
HSV-2
Não Detectado
TodosHSV
-1 HSV
-2 Não
Detectado Todos
HSV-1
HSV-2
Não Detectado
Todos
Do nascimento a 1 mês de idade
- 1 9 10 - - 6 6 - 1 3 4
>1 mês até 2 anos de idade
- 1 25 26 - - 8 8 - 1 17 18
>2 anos até 12 anos de idade
- - 9 9 - - 6 6 - - 3 3
>12 anos até 21 anos de idade
- 1 11 12 - 1 4 5 - - 7 7
>21 anos até 60 anos de idade
4 4 65 73 3 1 35 39 1 3 30 34
> 60 anos de idade
1 - 33 34 1 - 20 21 - - 13 13
Todos 5 7 152 164 4 2 79 85 1 5 73 79
Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct kit Página 8
VALORES ESPERADOS – Amostras de esfregaço genital Os valores esperados observados de HSV-1 e HSV-2 na população prospectiva no estudo clínico do ensaio Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct variaram entre as instituições e são mostrados na tabela abaixo.
Identificação do local de coleta da amostra
Todos
Resultado da cultura ELVIS (Prevalência)
Resultado Simplexa (Valores Esperados)
Resultado do sequenciamento ( Valores Esperados)
HSV 1 & 2 Não
detectado
HSV-1 Detectado,
HSV-2 Não
detectado
HSV-1 Não testado
& HSV-2 Detectado
Não Avaliado
HSV 1 & 2 Detectado
HSV 1 & 2 Não
detectado
HSV-1 Detectado & HSV-2
Não detectado
HSV-1 Não detectado & HSV-2
Detectado
Não Avaliado
HSV-1 Detectado
HSV 1 & 2 Não
detectado
HSV-2 Detectado
Não Avaliado
1 256 64,5%
(165/256) 14,1%
(36/256) 20,3%
(52/256) 1,2%
(3/256) 0,4%
(1/256) 53,9%
(138/256) 16,0%
(41/256) 28,5%
(73/256) 1,2%
(3/256) 16,0%
(41/256) 54,3%
(139/256) 27,3%
(70/256) 2,3%
(6/256)
2 74 78,4% (58/74)
6,8% (5/74)
6,8% (5/74) 8,1% (6/74)
1,4% (1/74)
73,0% (54/74)
9,5% (7/74)
12,2% (9/74)
4,1% (3/74)
6,8% (5/74)
74,3% (55/74)
9,5% (7/74)
9,5% (7/74)
3 78 59,0% (46/78)
6,4% (5/78)
32,1% (25/78)
2,6% (2/78)
1,3% (1/78)
51,3% (40/78)
19,2% (15/78)
26,9% (21/78)
1,3% (1/78)
16,7% (13/78)
51,3% (40/78)
28,2% (22/78)
3,8% (3/78)
5 140 51,4%
(72/140) 12,1%
(17/140) 24,3%
(34/140) 12,1%
(17/140) 1,4%
(2/140) 47,1%
(66/140) 20,0%
(28/140) 27,1%
(38/140) 4,3%
(6/140) 18,6%
(26/140) 47,1%
(66/140) 28,6%
(40/140) 5,7%
(8/140)
9 89 58,4% (52/89)
11,2% (10/89)
29,2% (26/89)
1,1% (1/89)
0,0% (0/89)
51,7% (46/89)
21,3% (19/89)
25,8% (23/89)
1,1% (1/89)
22,5% (20/89)
49,4% (44/89)
25,8% (23/89)
2,2% (2/89)
10 81 64,2% (52/81)
6,2% (5/81)
23,5% (19/81)
6,2% (5/81)
0,0% (0/81)
56,8% (46/81)
16,0% (13/81)
23,5% (19/81)
3,7% (3/81)
17,3% (14/81)
48,1% (39/81)
22,2% (18/81)
12,3% (10/81)
Todos 718 62,0%
(445/718) 10,9%
(78/718) 22,4%
(161/718) 4,7%
(34/718) 0,7%
(5/718) 54,3%
(390/718) 17,1%
(123/718) 25,5%
(183/718) 2,4%
(17/718) 16,6%
(119/718) 53,3%
(383/718) 25,1%
(180/718)5,0%
(36/718)
Demografia da Amostra pelo Ensaio Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct
Gênero Idade do Grupo Todos
Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct
HSV 1&2 Detectado
HSV 1&2 Não
Detectado
HSV1 Detectado & HSV2 Não Detectado
HSV1 Não Detectado &
HSV2 Detectado
Não Avaliado
Feminino
Mais de 1 mês até 2 anos de idade 2 0,0% (0/2) 50,0% (1/2) 50,0% (1/2) 0,0% (0/2) 0.0% (0/2)
Mais de 2 anos até 12 anos de idade 10 0,0% (0/10) 90,0% (9/10) 0,0% (0/10) 10,0% (1/10) 0.0% (0/10)
Mais de 12 anos até 18 anos de idade 56 0,0% (0/56) 62,5% (35/56)
10,7% (6/56) 25,0% (14/56)
1.8% (1/56)
Mais de 18 anos até 21 anos de idade 61 0,0% (0/61) 29,5% (18/61)
32,8% (20/61)
34,4% (21/61)
3.3% (2/61)
Mais de 21 anos de idade 503 0,8% (4/503) 54,3%
(273/503) 16,9%
(85/503) 25,8%
(130/503) 2.2% (11/503)
Todos 632 0.6% (4/632) 53,2%
(336/632) 17,7%
(112/632) 26,3%
(166/632) 2,2% (14/632)
Masculino
Mais de >1 mês até 2 anos de idade 1 0,0% (0/1) 0,0% (0/1) 100,0% (1/1) 0,0% (0/1) 0.0% (0/1)
Mais de 2 anos até 12 anos de idade 2 0,0% (0/2) 100,0% (2/2) 0,0% (0/2) 0,0% (0/2) 0.0% (0/2)
Mais de 12 anos até 18 anos de idad 3 0,0% (0/3) 100,0% (3/3) 0,0% (0/3) 0,0% (0/3) 0.0% (0/3)
Mais de 18 anos até 21 anos de idade 12 0,0% (0/12) 33,3% (4/12) 25,0% (3/12) 41,7% (5/12) 0.0% (0/12)
Mais de 21 anos de idade 66 1,5% (1/66) 68,2% (45/66)
CONCORDÂNCIA CLÍNICA – Amostra de CSF Um total de duzentas e dezenove (219) amostras de CSF foram prospectivamente ou retrospectivamente coletadas de pacientes com sinais e sintomas de infecção por vírus Herpes Simplex (HSV) no SNC em oito locais de coleta externos. Todos os locais de coleta enviaram as amostras congeladas para a Focus Diagnostics. Duas alíquotas foram preparadas de cada amostra e as amostras foram, em seguida, testadas a cego. Uma alíquota foi enviada para ser testada externamente enquanto a outra alíquota permaneceu na Focus Diagnostics para sequenciamento. Cinco locais externos realizaram o teste SimplexaTM HSV 1 & 2 Direct Assay incluindo quarto locais de coleta. Focus Diagnostics realizou testes nas amostras utilizando PCR seguido por análises com ensaios de sequenciamento bidirecional. Resultados da ensaio Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct foram comparados com os resultados de ensaios de sequenciamento bidirecional (comparador). Resultados da imagem neural e impressões clínicas documentados em um formulário de relatório de caso (CRF, Case Report Form), conforme determinado pelo médico responsável pelo paciente, e outras informações clínicas como bioquímica sanguínea, cultura bacteriana, MRI/CT (ressonância magnética e tomografia computadorizada) e resultados de PCR internos foram coletados para todos os pacientes. O Diagnóstico Final leva em consideração todos os achados laboratoriais e os resultados de um teste PCR realizado localmente, juntamente com a apresentação clínica do paciente. Nenhuma amostra duplamente positiva (HSV-1 e HSV-2 positivos) foi encontrada. A tabela abaixo mostra a distribuição dos diferentes parâmetros clínicos coletados de pacientes que foram confirmados como positivos e negativos pelo comparador.
Parâmetro
Pacientes que são considerados positivos pelo
comparador para HSV (Número e %)
Pacientes que são considerados negativos pelo
comparador para HSV (Número e %)
Resultados de ressonância magnética sugestivos de infecção por HSV
18/65 (27,7%) 9/154 (5,8%)
Resultados de ressonância magnética não sugestivos de infecção por HSV
43/65 (66,2%) 121/154 (78,6%)
Resultados de ressonância magnética não disponíveis 4/65 (6,2%) 24/154 (15,6%)
Diagnóstico Final positivo para infecção por HSV 61/65 (93,8%) 33/154 (21,4%)
Diagnóstico Final negativo para infecção por HSV 4/65 (6,2%) 121/154 (78,6%)
Cultura bacteriana positiva 2/65 (3,1%) 4/154 (2,6%)
Cultura bacteriana negativa 63/65 (96,9%) 145/154 (94,2%)
Cultura bacteriana não realizada 0/65 (0,0%) 5/154 (3,2%)
A tabela seguinte resume os resultados de concordância do ensaio Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct com o comparador (resultados de dois ensaios de sequenciamento por PCR). Trezentos (300) ensaios de sequenciamento de pares de bases de DNA dideoxi foram validados para dois genes alvos de HSV diferentes. Foi utilizado PCR SYBR Green usando-se amostra de DNA extraída de paciente para testar todas as amostras. Amplicons de amostras positivas foram usadas para sequenciamento bidirecional. Requerimentos de sequência tiveram escala “phred” de qualidade ≥20 (para cada base) e um comprimento de leitura contínuo ≥200 e uma cobertura 2x ≥180. Alinhamentos de sequência foram analisados contra o banco de dados GenBank usando o programa de procura BLAST para determinar se a amostra do paciente foi positiva para HSV-1 ou HSV-2.
Cinquenta e cinco (55) amostras retrospectivas/pré-selecionadas de HSV positivo (como determinado pelos locais de coleta) vindas de quatro locais foram coletadas entre 2004 e 2013 e confirmadamente como positivas pelo comparador, sendo usadas para suplementar o estudo prospectivo para avaliar a sensibilidade do Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct. Os resultados estão demonstrados na tabela abaixo:
CONCORDÂNCIA CLÍNICA – Amostra de Esfregaço Genital Um total de setecentas e dezoito (718) amostras de esfregaço genital foram prospectivamente coletadas de pacientes com sinais e sintomas de vírus herpes simplex (HSV) genital por 6 locais de coleta geograficamente diferentes. Todos os locais de coleta coletaram e testaram amostras de esfregaço genital e enviaram amostras para um laboratório central para teste de cultura. Para cultura, cada amostra foi primeiramente testada para HSV-2 e, se positiva para HSV-2, nenhum outro teste foi realizado. Amostras que foram negativas na cultura de HSV-2 foram posteriormente testadas para positividade na cultura de HSV-1. Dois positivos não foram identificados no ensaio. As amostras retidas foram enviadas para a Focus Diagnostics e testadas em um ensaio validado de sequenciamento bidirecional e foram detectados duplos positivos.
PPA 100,0%(3/3) IC 95%: 43,8 a 100,0% PPA 85,7%(6/7) IC 95%: 48,7 a 97,4%
NPA 98,8%(159/161) IC 95%: 95,6 a 99,7% NPA 99,4%(156/157) IC 95%: 96,5 a 99,9%
*1/2 das amostras apresentaram um diagnóstico final de meningite, considerando as informações da tabela.
#A amostra foi coletada do paciente com um diagnóstico final de meningite, considerando as informações da tabela.
##A amostra foi coletada do paciente com um diagnóstico final de meningite, considerando as informações da tabela.
Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct kit Página 11
Resultados de sequenciamento bidirecional de HSV-1
Concordância clínica – (Total para HSV-1)
Simplexa™ HSV 1 & 2
Direct
Método de sequenciamento validado
Detectado Não
detectado Total
Detectado 114 11a 125
Não detectado
3b 546 549
Total 117 557 674
%PPA 97,4%(114/117)
IC 95%: 92,7% a 99,1%
%NPA 98,0%(546/557)
IC 95%: 96,5% a 98,9%
%PPV 91,2%(114/125)
IC 95%: 84,9% a 95,0%
%NPV 99,5%(546/549)
IC 95%: 98,4% a 99,8% a Das onze (11) amostras discordantes, duas (2) amostras foram Detectadas como HSV-1, seis (6) foram Não Detectadas para ambos HSV-1 e HSV-2 e três (3) amostras foram Detectadas como HSV-2 e não testadas para HSV-1 quando testadas usando o método de cultura.
b Das três (3) amostras discordantes, duas (2) foram Não Detectadas para ambos HSV-1 e HSV-2 e uma (1) amostra foi Detectada como HSV-2 quando testada usando o método de cultura.
Resultados de sequenciamento bidirecional de HSV-2
Concordância Clinica – (Total para HSV-2)
Resultados do Simplexa
Método de sequenciamento validado
Detectado Não
detectado Total
Detectado 174 11c 185
Não detectado
3d 486 489
Total 177 497 674
%PPA 98,3%(174/177)
IC 95%: 95,1% a 99,4%
%NPA 97,8%(486/497)
IC 95%: 96,1% a 98,8%
%PPV 94,1%(174/185)
IC 95%: 89,7% a 96,6%
%NPV 99,4%(486/489)
IC 95%: 98,2% a 99,8% c Das onze (11) amostras discordantes, uma (1) amostra foi Detectada como HSV-2 e não testada para HSV-1 e dez (10) amostras foram Não Detectadas para ambos HSV-1 e HSV-2 quando testadas usando o método de cultura.
d Das três (3) amostras discordantes, três (3) amostras foram Não detectadas para ambos HSV-1 e HSV-2 quando testadas usando o método de cultura.
Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct kit Página 12
REPRODUTIBILIDADE – Amostra de CSF A reprodutibilidade do ensaio Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct foi avaliada. Três locais de pesquisa avaliaram a reprodutibilidade do dispositivo entre locais, entre dias, entre ensaios e intra-ensaios. Cada laboratório testou o controle positivo e um painel de cinco “misturas” de amostras planejadas incluindo uma com baixa positividade (aproximadamente 1 vez o limite de detecção, LoD) e médio positiva (aproximadamente 4 vezes o limite de detecção, LoD) para cada analito e uma com alta negatividade. A amostra negativa alta continha uma pequena quantidade de HSV-1 e HSV-2 e foi planejada para ser negativa em aproximadamente 95% das vezes. Os ensaios foram realizados em triplicata em cinco dias diferentes. Cada local do estudo tinha dois operadores, cada um deles realizou o ensaio com todo o painel de amostras e o controle positivo uma vez por dia, perfazendo um total de dois conjuntos de dados por dia. Os resultados combinados para todos os locais estão apresentados nas tabelas abaixo.
REPRODUTIBILIDADE - Amostra de esfregaço genital A reprodutibilidade do ensaio Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct foi avaliada. Três locais de pesquisa avaliaram a reprodutibilidade do dispositivo entre locais, entre dias, entre ensaios e intra-ensaios. Cada laboratório testou o controle positivo e um painel de cinco “misturas” de amostras planejadas incluindo uma com baixa positividade (aproximadamente 1-2 vezes o limite de detecção, LoD) e médio positiva (aproximadamente 2-4 vezes o limite de detecção, LoD) para cada analito e uma com alta negatividade. A amostra negativa alta continha uma pequena quantidade de HSV-1 e HSV-2 e foi planejada para ser negativa em aproximadamente 95% das vezes. Os ensaios foram realizados em triplicata em cinco dias diferentes. Cada local do estudo tinha dois operadores, cada um deles realizou o ensaio com todo o painel de amostras e o controle positivo uma vez por dia, perfazendo um total de dois conjuntos de dados por dia. Os resultados combinados para todos os locais estão apresentados nas tabelas abaixo.
Amostra
Local – 1 Local – 2 Local – 3 % Total
concordância com os
resultados esperados
95% CI%
Concordância com os
resultados esperados
Média de Ct
Total %CV
% Concordância
com os resultados esperados
Média de Ct
Total %CV
% Concordância
com os resultados esperados
Média de Ct
Total %CV
HSV-1 Resultado
HSV-1 Baixa Positividade
100,0% (30/30)
36,0 2,2 100,0% (30/30) 36,1 2,6 100,0% (30/30)
36,3 2,7 100,0% (90/90)
95,9 a 100,0%
HSV-1 Positividade Mediana
100,0% (30/30)
34,4 1,7 100,0% (30/30) 34,8 1,2 100,0% (30/30)
34,6 1,9 100,0% (90/90)
95,9 a 100,0%
HSV-2 Baixa Positividade
100,0% (30/30) c
N.D. N.D. 100,0% (30/30)a N.D. N.D. 96,7%
(29/30) c N.D. N.D.
98,9% (89/90)c
94,0 a 99,8%
HSV-2 Positividade Mediana
100,0% (30/30) c
N.D. N.D. 96,7% (29/30)
c N.D. N.D.
100,0% (30/30) c
N.D. N.D. 98,9%
(89/90)a 94,0 a 99,8%
Negativa Alta 96,7%
(29/30)a 38,8 0,0
93,3% (28/30)c
38,7 0,5 90,0%
(27/30) c 38,0 4,1
93,3% (84/90)c
86,2 a 96,9%
Controle Positivo
100,0% (30/30)
29,9 0,8 100,0% (30/30) 30,4 1,3 100,0% (29/29)
29,9 2,8 100,0% (89/89)
95,9 a 100,0%
Concordância Total
99,4% (179/180) 98,3% (177/180) 97,8% (175/179) 98,5% (531/539)97,1 a 99,2%
c) Os resultados esperados para as amostras com baixa positividade para HSV-2, média positividade para HSV-2 e alta negatividade são “Negativo” para HSV-1.
Amostra
Local – 1 Local – 2 Local – 3 % Total
concordância com os
resultados esperados
95% CI%
Concordância com os
resultados esperados
Média de Ct
Total %CV
% Concordância
com os resultados esperados
Média de Ct
Total %CV
% Concordância
com os resultados esperados
Média de Ct
Total %CV
HSV-2 Resultado
HSV-1 Baixa Positividade
100,0% (30/30)d N.D. N.D. 100,0% (30/30) d N.D. N.D. 96,7% (29/30) b 41,1 0,0 98.9%
(89/90) d 94,0% a 99,8%
HSV-1 Positividade Mediana
100,0% (30/30) d N.D. N.D. 100,0% (30/30) d N.D. N.D. 100,0% (30/30) b N.D. N.D. 100,0% (90/90) d
d) Os resultados esperados para as amostras com baixa positividade para HSV-1, média positividade para HSV-1 e alta negatividade são “Negativo” para HSV-2.
Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct kit Página 15
Amostra
Local – 1 Local – 2 Local – 3
% Total concordância
com os resultados esperados
95% CI %
Concordânciacom os
resultados esperados
Média de Ct
Total %CV
% Concordância
com os resultados esperados
Média de Ct
Total %CV
% Concordância
com os resultados esperados
Média de Ct
Total %CV
DNA IC Resultado
HSV-1 Baixa Positividade
100,0% (30/30)
29,6 0,7 100,0% (30/30)
29,8 1,2 100,0% (30/30) 29,7 1,0 100,0% (90/90)95,9% a 100,0%
HSV-1 Positividade Mediana
100,0% (30/30)
29,6 0,8 100,0% (30/30)
29,8 1,4 100,0% (30/30) 29,7 0,9 100,0% (90/90)95,9% a 100,0%
HSV-2 Baixa Positividade
100,0% (30/30)
29,6 0,8 100,0% (30/30)
29,8 1,2 100,0% (30/30) 29,7 1,0 100,0% (90/90)95,9% a 100,0%
HSV-2 Positividade Mediana
100,0% (30/30)
29,5 0,6 100,0% (30/30)
29,7 1,4 100,0% (30/30) 29,8 1,4 100,0% (90/90)95,9% a 100,0%
Negativa Alta 100,0% (30/30)
29,6 0,6 100,0% (30/30)
29,8 1,2 100,0% (30/30) 29,7 1,0 100,0% (90/90)95,9% a 100,0%
Controle Positivo
100,0% (30/30)
29,5 0,5 100,0% (30/30)
29,7 1,4 100,0% (29/29) 29,7 0,9 100,0% (89/89)95,9% a 100,0%
SENSIBILIDADE ANALÍTICA/LIMITE DE DETECÇÃO – Amostras de CSF O limite de Detecção (LoD, Limit of Detection) foi determinado para o ensaio Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct utilizando estoques quantificados de HSV-1 e HSV-2 diluídos de forma seriada em matriz de CSF humana negativa. LoD foi determinado como sendo a menor concentração possível de ser detectada positiva em > 95% das vezes.
Cepa Viral Concentração de LoD
(TCID50/ml) Resultado Qualitativo
(Nº Detectado/ Nº Total) Média Ct ± SD
(apenas Replicatas Detectadas) HSV-1
McIntyre 5 31/32 37,1 ± 1,17
HSV-1 HF 40 31/32 36,9 ± 0,90
HSV-2 G 1,25 31/32 38,3 ± 0,74
HSV-2 MS 20 32/32 37,2 ± 1,03
SENSIBILIDADE ANALÍTICA/LIMITE DE DETECÇÃO – Amostras de esfregaço genital O limite de Detecção (LoD, Limit of Detection) foi determinado para o ensaio Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct utilizando estoques quantificados de HSV-1 e HSV-2 diluídos de forma seriada em matriz negativa de esfregaço genital. LoD foi determinado como sendo a menor concentração possível de ser detectada positiva em > 95% das vezes.
Cepa Viral Concentração de LoD (TCID50/ml)
Resultado Qualitativo
(Nº Detectado/ Nº Total)
Média Ct ± SD (apenas Replicatas
Detectadas)
HSV-1 McIntyre
4 32/32 36,4 ± 1,16
HSV-1 HF 160 32/32 35,2 ± 1,03
HSV-2 G 2 32/32 37,5 ± 1,08
HSV-2 MS 10 31/32 37,9 ± 1,15
Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct kit Página 16
REATIVIDADE ANALÍTICA/ REATIVIDADE CRUZADA Reatividade Analítica – Amostra de CSF A reatividade analítica do ensaio Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct foi avaliada usando-se diferentes cepas de HSV-1 que não haviam sido utilizadas no ensaio de determinação do limite de detecção (LoD). Não havia cepas adicionais disponíveis para o HSV-2. O material viral quantificado foi adicionado em CSF negativo utilizando-se apenas uma diluição e o ensaio foi realizado em triplicata. O ensaio Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct foi capaz de detectar outras cepas do vírus HSV-1.
Reatividade Analítica com Cepas Virais Adicionais
Cepa de HSV Concentration de referência
(TCID50/ml)
Resultado Qualitativo (Nº Detectado/ Nº Total)
HSV-1 HSV-2
HSV-1 KOS 20 3/3 0/3
HSV-1 F
20 2/3 0/3
40 3/3 0/3
80 3/3 0/3
Reatividade Analítica – Esfregaço genital A reatividade analítica do ensaio Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct foi avaliada usando-se diferentes cepas de HSV-1 que não haviam sido utilizadas no ensaio de determinação do limite de detecção (LoD). Não havia cepas adicionais disponíveis para o HSV-2. O material viral quantificado foi adicionado em matriz negativa de esfregaço genital utilizando-se apenas uma diluição e o ensaio foi realizado em triplicata. O ensaio Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct foi capaz de detectar outras cepas do vírus HSV-1.
Reatividade Analítica com Cepas Virais Adicionais
Cepa de HSV Concentração de referência
(TCID50/ml)
Resultado Qualitativo (Nº Detectado/ Nº Total)
HSV-1 HSV-2
HSV-1 KOS 16 3/3 0/3
HSV-1 F 32 3/3 0/3
Reatividade Cruzada (Especificidade analítica) – Amostra de CSF A especificidade analítica do ensaio Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct foi avaliada ao testar a habilidade de identificar exclusivamente os vírus HSV-1 e HSV-2 sem reatividade cruzada com organismos intimamente relacionados, que causem sintomas clínicos semelhantes ou que possam estar presentes na CSF. Cinquenta e um (51) agentes com potencial para reatividade cruzada foram adicionados a amostras negativas de CSF e o ensaio foi realizado em triplicata. Nenhuma reatividade cruzada foi observada.
No. Agente de reação cruzada Concentração do Teste Resultado Qualitativo (Nº
Detectado/ Nº Total) HSV-1 HSV-2
1 Referência Não aplicável 0/20 0/20
2 Adenovírus (tipo 1) 1,00 X 105 TCID50/ml 0/3 0/3
3 Adenovírus (tipo 7A) 1,00 X 105 TCID50/ml 0/3 0/3
4 BKV 1,00 X 105 cópias/ml 0/3 0/3
5 Citrobacter freundii 1,00 X 106 UFC/ml 0/3 0/3
6 Citrobacter koseri 1,00 X 106 UFC/ml 0/3 0/3
7 Cryptococcus neoformans 1,00 X 106 UFC/ml 0/3 0/3
8 Citomegalovírus (AD169) 1,00 X 105 TCID50/ml 0/3 0/3
9 Dengue (Tipo 1) 1,00 X 105 TCID50/ml 0/3 0/3
10 Encephalomyocarditis vírus 1,00 X 105 TCID50/ml 0/3 0/3
Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct kit Página 17
No. Agente de reação cruzada Concentração do Teste Resultado Qualitativo (Nº
Detectado/ Nº Total) HSV-1 HSV-2
11 Enterobacter aerogenes 1,00 X 106 UFC/ml 0/3 0/3
50 Toxoplasma gondii 1,00 X 106 taquizoítos /ml 0/3 0/3
Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct kit Página 18
No. Agente de reação cruzada Concentração do Teste Resultado Qualitativo (Nº
Detectado/ Nº Total) HSV-1 HSV-2
51 Vírus varicella zoster 1,00 X 105 cópias/ml 0/3 0/3
52 Vírus West Nile 1,00 X 105 TCID50/ml 0/3 0/3
* Material quantificado não estava disponível para teste; neste caso o vendedor forneceu um fluido de cultura com Ct conhecido. O local de coleta foi instruído a diluir o estoque a um valor de Ct relevante; fator de diluição 1:200.
Reatividade Cruzada (Especificidade analítica) – Amostra de esfregaço genital A especificidade analítica do ensaio Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct foi avaliada ao testar a habilidade de identificar exclusivamente os vírus HSV-1 e HSV-2 sem reatividade cruzada com organismos intimamente relacionados, ou que causem sintomas clínicos semelhantes ou que possam estar presentes no esfregaço da região genital. Trinta e seis (36) agentes com potencial para reatividade cruzada foram adicionados a amostras negativas de esfregaço genital e o ensaio foi realizado em triplicata.
No. Agentes com potencial para
reatividade cruzada Concentração do Teste
Resultado Qualitativo(Nº Detectado/ Nº Total)
HSV-1 HSV-2
1 Nenhum (Referência) Não aplicável 0/15 0/15
2 Bacteroides fragilis 1,00 X 106 UFC/ml 0/3 0/3
3 Bacteroides ureolyticus** Não se aplica Não se aplica Não se aplica
4 Candida albicans 1,00 X 106 UFC/ml 0/3 0/3
5 Chlamydia trachomatis 1,00 X 106 IFU/ml 0/3 0/3
6 Clostridium sordellii 1,00 X 106 UFC/ml 0/3 0/3
7 Corynebacterium genitalium 1,00 X 106 UFC/ml 0/3 0/3
8 Citomegalovírus cepa AD169 1,00 X 105 TCID50/ml 0/3 0/3
9 Enterococcus faecalis vanB 1,00 X 106 UFC/ml 0/3 0/3
12 Escherichia coli O157H7 1,00 X 106 UFC/ml 0/3 0/3
13 Gardnerella vaginalis 1,00 X 106 UFC/ml 0/3 0/3
14 Hepatite B 1,00 X 105 UI/ml 0/3 0/3
15 Hepatite C 1,00 X 105 UI/ml 0/3 0/3
16 HHV-6 (Cepa Z29) 1,00 X 105 TCID50/ml 0/3 0/3
17 HHV-7 SB 1,00 X 105 TCID50/ml 0/3 0/3
18 HIV-1 IIIB 1,00 X 105 cópias/ml 0/3 0/3
19 HIV-2 NIHZ* Não disponível 0/3 0/3
20 HPV18 Recombinante 1,00 X 105 pfu/ml 0/3 0/3
21 Lactobacillus acidophilus 1,00 X 106 UFC/ml 0/3 0/3
22 Mobiluncus mulieris 1,00 X 106 UFC/ml 0/3 0/3
23 Mycoplasma genitalium** Não se aplica Não se aplica Não se aplica
24 Mycoplasma hominis 1,00 X 106 CCU/ml 0/3 0/3
25 Neisseria gonorrhoeae 1,00 X 106 UFC/ml 0/3 0/3
26 Proteus vulgaris 1,00 X 106 UFC/ml 0/3 0/3
27 Rubéola 1,00 X 105 TCID50/ml 0/3 0/3
28 Staphylococcus aureus (MRSA), ATCC 700699
1,00 X 106 UFC/ml 0/3 0/3
29 Staphylococcus epidermidis (MRSE), ATCC 29887
1,00 X 106 UFC/ml 0/3 0/3
30 Staphylococcus saprophyticus 1,00 X 106 UFC/ml 0/3 0/3
Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct kit Página 19
No. Agentes com potencial para
reatividade cruzada Concentração do Teste
Resultado Qualitativo(Nº Detectado/ Nº Total)
HSV-1 HSV-2
31 Streptococcus mitis 1,00 X 106 UFC/ml 0/3 0/3
32 Streptococcus pyogenes, M1 1,00 X 106 UFC/ml 0/3 0/3
33 Toxoplasma gondii 1,00 X 106 taquizoítos /ml 0/3 0/3
34 Treponema pallidum** Não se aplica Não se aplica Não se aplica
35 Trichomonas vaginalis 1,00 X 106 CCU/ml 0/3 0/3
36 Ureaplasma urealyticum 1,00 X 106 CCU/ml 0/3 0/3
37 VZV 1,00 X 105 cópias/ml 0/3 0/3
*Material quantificado não estava disponível para teste; neste caso o vendedor forneceu um fluido de cultura com um valor de Ct conhecido. O local de coleta foi instruído a diluir o estoque para um valor de Ct conhecido; fator de diluição 1:50. **Microorganismo</3290><3291> não estava disponível para teste, então foi realizada análise NCBI BLAST in-silico e nenhuma reatividade cruzada foi encontrada.
INTERFERÊNCIA – Amostra de CSF O desempenho do ensaio Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct foi avaliado com substâncias potencialmente interferentes que podem estar presentes nas amostras de CSF nas concentrações indicadas na tabela a seguir. Um total de sete (7) substâncias potencialmente interferentes foram testadas em amostras de baixa positividade para HSV-1 e HSV-2 (4 vezes LoD) em matriz CSF e o ensaio foi realizado em triplicata. Nenhuma interferência foi observada.
Interferente Potencial Concentração do Interferente
INTERFERÊNCIA – Amostra de esfregaço genital O desempenho do ensaio Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct foi avaliado com substâncias potencialmente interferentes que podem estar presentes nas amostras de esfregaço da região genital, nas concentrações indicadas na tabela a seguir. Um total de cinco (5) substâncias potencialmente interferentes foram testadas em amostras de baixa positividade para HSV-1 e HSV-2 (4 vezes LoD) em matriz negativa de esfregaço genital e o ensaio foi realizado em triplicata. Nenhuma interferência foi observada.
Interferente Potencial Concentração do Interferente Nº de detecções/total
HSV-1 HSV-2 IC
Albumina 10 mg/ml 3/3 3/3 3/3
Caseína 10 mg/ml 3/3 3/3 3/3
Sangue Total 10% v/v 3/3 3/3 3/3
Urina 10% v/v 3/3 3/3 3/3
KY Gel 5% v/v 3/3 3/3 3/3
Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct kit Página 20
INTERFERÊNCIA COMPETITIVA – Amostra de CSF A interferência competitiva foi estudada para avaliar o efeito de coinfecções clinicamente relevantes em cada analito detectado pelo ensaio Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct. O estudo avaliou se uma concentração alta de um vírus na amostra poderia potencialmente afetar o desempenho do ensaio Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct para o outro alvo presente em níveis baixos. Foi preparada uma amostra com baixos teores, aproximadamente 4 vezes o LoD para cada cepa (HSV-1 McIntryre e HSV-2 G) e um Ct de referência (“baseline”) foi determinado para cada amostra. Cada vírus concomitante infectante potencial foi adicionado à amostra com baixos níveis e o ensaio foi realizado em triplicata. Foi observada interferência competitiva nas amostras com concentração alta do vírus HSV-1 e baixa concentração do vírus HSV-2. Os resultados de referência (“baseline”) também estão demonstrados na tabela.
Referência
(Baixa Concentração) Interferência Competitiva
(Alta Concentração) Resultado Qualitativo
(Nº Detectado/ Nº Total)
Strain Concentração LoD
(TCID50/ml) Cepa
Concentração LoD (TCID50/ml)
HSV-1 HSV-2
HSV-1 McIntyre 20 - - 5/5 0/5
HSV-1 McIntyre 20 HSV-2 G 10000 3/3 3/3
HSV-2 G 5 - - 0/5 5/5
HSV-2 G 5 HSV-1 McIntyre 20000 8/8 1/8
HSV-2 G 5 HSV-1 McIntyre 10000 8/8 6/8
HSV-2 G 5 HSV-1 McIntyre 5000 3/3 3/3
INTERFERÊNCIA COMPETITIVA – Amostra de Esfregaço Genital A interferência competitiva foi estudada para avaliar o efeito de coinfecções clinicamente relevantes em cada analito detectado pelo ensaio Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct. O estudo avaliou se uma concentração alta de um vírus na amostra poderia potencialmente afetar o desempenho do ensaio Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct para o outro alvo presente em níveis baixos. Foi preparada uma amostra com baixos teores, aproximadamente 4 vezes o LoD para cada cepa (HSV-1 McIntryre e HSV-2 G) e um Ct de referência (“baseline”) foi determinado para cada amostra. Cada vírus concomitante infectante potencial foi adicionado à amostra com baixos níveis e o ensaio foi realizado em triplicata. Os resultados de referência (“baseline”) também estão demonstrados na tabela.
INIBIÇÃO POR OUTROS MICROORGANISMOS – Amostra de CSF O ensaio The Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct foi avaliado testando sua habilidade de identificar os vírus HSV-1 e HSV-2 quando outro organismo potencialmente inibidor está presente. Um painel de cinquenta e um (51) organismos potencialmente inibidores foi individualmente adicionado a uma mistura de amostras de CSF de baixa concentração (aproximadamente 4 vezes o LoD) de HSV-1 e HSV-2. Cada amostra de microrganismo foi inicialmente testada em triplicata, e uma das replicatas não detectava os alvos HSV-1 e HSV-2, então cinco replicatas adicionais foram testadas para confirmar se os microrganismos testados causavam alguma inibição. Se a maioria das replicatas (>4/8) apresentasse resultado “Não detectado”, o efeito inibitório seria determinado. Nenhum dos microrganismos testados causou resultado “Não detectado” em >4/8 das replicatas. 1/8 das replicatas de JCV (MAD-4) e de Raiva apresentaram resultado “Não Detectado” para HSV-2 e 2/8 replicatas de Dengue (Tipo 1) apresentaram resultado “Não detectado” para HSV-2. Nenhuma inibição por outros microrganismos foi observada para HSV-1 ou HSV-2. Nenhuma inibição por outros microrganismos foi observada para HSV-1 ou HSV-2.
No. Microrganismo Concentração do Teste
Resultado Qualitativo (Nº Detectado/ Nº
Total) HSV-1 HSV-2
1 Referência Não aplicável 20/20 20/20
2 Adenovírus (tipo 1) 1,00 X 105 TCID50/ml 3/3 3/3
3 Adenovírus (tipo 7A) 1,00 X 105 TCID50/ml 3/3 3/3
4 BKV 1,00 X 105 cópias/ml 3/3 3/3
5 Citrobacter freundii 1,00 X 106 UFC/ml 3/3 3/3
6 Citrobacter koseri 1,00 X 106 UFC/ml 3/3 3/3
7 Cryptococcus neoformans 1,00 X 106 UFC/ml 3/3 3/3
8 Citomegalovírus (AD169) 1,00 X 105 TCID50/ml 3/3 3/3
9 Dengue (Tipo 1) 1,00 X 105 TCID50/ml 8/8 **6/8
10 Encephalomyocarditis vírus 1,00 X 105 TCID50/ml 3/3 3/3
11 Enterobacter aerogenes 1,00 X 106 UFC/ml 3/3 3/3
50 Toxoplasma gondii 1,00 X 106 taquizoites/ml 3/3 3/3
51 Vírus varicella zoster 1,00 X 105 cópias/ml 3/3 3/3
52 Vírus West Nile 1,00 X 105 TCID50/ml 3/3 3/3
* Material quantificado não estava disponível para teste; neste caso o vendedor forneceu um fluido de cultura com um valor de Ct conhecido. O local de coleta foi instruído a diluir o estoque para um valor de Ct conhecido; fator de diluição 1:200. **1/3 e 1/5 das replicatas apresentaram resultado “não detectado” para HSV-2 no teste inicial e confirmatório respectivamente. ***1/3 das replicatas apresentou resultado “não detectado” para HSV-2 no teste inicial.
INIBIÇÃO POR OUTROS MICROORGANISMOS – Amostra de esfregaço genital O ensaio The Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct foi avaliado testando sua habilidade de identificar os vírus HSV-1 e HSV-2 quando outro organismo potencialmente inibidor está presente. O painel de trinta e seis (36) organismos potencialmente inibidores foi individualmente adicionado a uma mistura de amostras de esfregaço genital com baixa concentração (aproximadamente 4 vezes o LoD) de HSV-1 e HSV-2. Cada amostra de microrganismo foi inicialmente testada em triplicata e no caso de uma das replicatas apresentar resultado “Não Detectado” para alvos HSV-1 ou HSV-2, então cinco replicatas adicionais seriam testadas para confirmar se qualquer inibição era causada pelos microrganismos. Se a maioria das replicatas (>4/8) apresentasse resultado “Não detectado”, o efeito inibitório seria determinado. Nenhum dos microrganismos testados causou resultado “Não detectado” em >4/8 das replicatas.
No. Microrganismo Concentração do Teste
Resultado Qualitativo(Nº Detectado/ Nº Total)
HSV-1 HSV-2
1 Referência Não se aplica 15/15 15/15
2 Bacteroides fragilis 1,00 X 106 UFC/ml 3/3 3/3
3 Bacteroides ureolyticus** Não se aplica Não se aplica
Não se aplica
4 Candida albicans 1,00 X 106 UFC/ml 3/3 3/3
5 Chlamydia trachomatis 1,00 X 106 IFU/ml 3/3 3/3
Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct kit Página 23
No. Microrganismo Concentração do Teste
Resultado Qualitativo(Nº Detectado/ Nº Total)
HSV-1 HSV-2
6 Clostridium sordellii 1,00 X 106 UFC/ml 3/3 3/3
7 Corynebacterium genitalium 1,00 X 106 UFC/ml 3/3 3/3
8 Cytomegalovirus 1,00 X 105 TCID50/ml 3/3 3/3
9 Enterococcus faecalis vanB 1,00 X 106 UFC/ml 3/3 3/3
12 Escherichia coli O157H7 1,00 X 106 UFC/ml 3/3 3/3
13 Gardnerella vaginalis 1,00 X 106 UFC/ml 3/3 3/3
14 Hepatite B 1,00 X 105 UI/ml 3/3 3/3
15 Hepatite C 1,00 X 105 UI/ml 3/3 3/3
16 HHV-6 (Cepa Z29) 1,00 X 105 TCID50/ml 3/3 3/3
17 HHV-7 SB 1,00 X 105 TCID50/ml 3/3 3/3
18 HIV-1 IIIB 1,00 X 105 cópias/ml 3/3 3/3
19 HIV-2 NIHZ* Não disponível 3/3 3/3
20 HPV18 Recombinante 1,00 X 105 pfu/ml 3/3 3/3
21 Lactobacillus acidophilus 1,00 X 106 UFC/ml 3/3 3/3
22 Mobiluncus mulieris 1,00 X 106 UFC/ml 3/3 3/3
23 Mycoplasma genitalium** Não aplicável Não se aplica
Não se aplica
24 Mycoplasma hominis 1,00 X 106 CCU/ml 3/3 3/3
25 Neisseria gonorrhoeae 1,00 X 106 UFC/ml 3/3 3/3
26 Proteus vulgaris 1,00 X 106 UFC/ml 3/3 3/3
27 Rubéola 1,00 X 105 TCID50/ml 3/3 3/3
28 Staphylococcus aureus (MRSA), ATCC 700699
1,00 X 106 UFC/ml 3/3 3/3
29 Staphylococcus epidermidis (MRSE), ATCC 29887
1,00 X 106 UFC/ml 3/3 3/3
30 Staphylococcus saprophyticus 1,00 X 106 UFC/ml 3/3 3/3
31 Streptococcus mitis 1,00 X 106 UFC/ml 3/3 3/3
32 Streptococcus pyogenes, M1 1,00 X 106 UFC/ml 3/3 3/3
33 Toxoplasma gondii 1,00 X 106 taquizoites/ml 3/3 3/3
34 Treponema pallidum** Não aplicável Não se aplica
Não se aplica
35 Trichomonas vaginalis 1,00 X 106 CCU/ml 3/3 3/3
36 Ureaplasma urealyticum 1,00 X 106 CCU/ml 3/3 3/3
37 VZV 1,00 X 105 cópias/ml 3/3 3/3
* Material quantificado não estava disponível para teste; neste caso o vendedor forneceu um fluido de cultura com um valor de Ct conhecido. O local de coleta foi instruído a diluir o estoque para um valor de Ct conhecido; fator de diluição 1:50. ****Microorganismo não estava disponível para teste, então foi realizada análise NCBI BLAST in-silico e nenhuma reatividade cruzada foi encontrada.
Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct kit Página 24
CONTAMINAÇÃO CRUZADA A amplificação por carreação para os ensaios Simplexa™, incluindo o ensaio Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct, foi avaliada pelo ensaio viral Simplexa™ Flu A/B & RSV Direct REF MOL2650 (K120413) e pode ser encontrado no site do FDA. O estudo pode ser aplicado para o ensaio Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct uma vez que esse estudo não é analito específico. No Simplexa™ Flu A/B & RSV Direct REF MOL2650 (K120413), o estudo de amplificação por carreação procurou pela presença de contaminação em amostras negativas adjacentes a amostras fortemente positivas. O estudo foi desenvolvido para posicionar alternadamente amostras altamente positivas e negativas em cada disco. Nenhuma evidência de contaminação por carreação foi observada. ESTUDO FRESCO VS CONGELADO As amostras devem ser transportadas no gelo e armazenadas entre 2 e 8°C por até 7 dias após a coleta. Se houver uma atraso de mais de 7 dias no processamento da amostra, armazene a amostra a -70°C. REFERÊNCIAS
1. Corey Lawrence, (2004) Herpes Simplex virus, In: Madell G.L., Bennett, J.E. and Dolin R., eds., Principles and Practice of
Infectious Diseases, 6th edition, Philadelphia, PA Elsevier, Churchill and Livingstone: pp 1762-80. 2. Szpara, Moriah L., et al. (2010) Sequence Variability in clinical and Laboratory Isolates of Herpes Simplex Virus 1 Reveals
New Mutations. J Virol. 84(10):5303-13. 3. Adelson, Martin E., et al. (2005) Simultaneous detection of herpes simplex virus types 1 and 2 by real-time PCR and
Pyrosequencing. J. Clin. Virol. 33:25-34. 4. Cunningham, A.L., Dwyer D.E.. (2002) Herpes simplex and varicella-zoster virus infections. Med J Aust. 177(2):267-73. 5. Schmutzhard, Julia, et al. (2004) Detection of herpes simplex virus type 1, herpes simplex virus type 2 and varicella-zoster
virus in skin lesions. Comparison of real-time PCR, nested PCR and virus isolation. J. Clin. Virol. 29:120-6. 6. Allan R. Tunkel, Carol A. Glaser, Karen C. Bloch, James J. Sejvar, Christina M. Marra, Karen L. Roos, Barry J. Hartman,
Sheldon L. Kaplan, W. Michael Scheld, and Richard J. Whitley (2008). The Management of Encephalitis: Clinical Practice Guidelines by the Infectious Diseases Society of America. Clinical Infectious Diseases 47:303-327.
7. Brown, Z, Wald, A, Ashley Morrow, R, Selke, S, Zeh, J, Corey, L. (2003) Effect of Serologic Status and Cesarean Delivery on Transmission Rates of Herpes Simplex Virus From Mother to Infant. JAMA 289(2): 203-9
8. ACOG Practice Bulletin – Clinical Management Guidelines for Obstetrician-Gynecologists. No. 57. (2004) 104 (5 pt 1):1111-8 9. US Department of Health and Human Services PHS/CDC/NIH. Biosafety in microbiology and biomedical laboratories,
Washington DC: US Government Printing Office, 2007 10. CLSI: MM3-A2 Molecular diagnostic methods for infectious disease; approved guideline, 2nd ed. Wayne, PA: Clinical
Laboratory Standards Institute, 2006.
A utilização de sondas da Scorpions® em diagnóstico humano in vitro é coberta pela licença a Focus Diagnostics, Inc. da Qiagen Manchester,UK. Scorpion é uma marca registrada da Qiagen Manchester,UK. Os corantes Black Hole Quencher™, CAL Fluor™, Quasar™ são marcas da Biosearch Technologies, Inc. ('BTI'). A tecnologia dos corantes Black Hole Quencher, CAL Fluor and Quasar é licenciada segundo um acordo com a BTI, e esses produtos são vendidos exclusivamente para propósitos clínicos, de diagnóstico ou de pesquisa e desenvolvimento.
REPRESENTATE AUTORIZADO mdi Europa GmbH, Langenhagener Str. 71 30855, Langenhagen-Hannover, Alemanha
