UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE ODONTOLOGÌA
UNIDAD DE INVESTIGACIÒN, TITULACIÒN Y GRADUACIÒN
¨EFECTIVIDAD ANTIMICROBIANA DEL ACEITE ESENCIAL DE
MINTHOSTACHYS MOLLIS (TIPO) AL 25, 50, 100 % FRENTE A
PORPHYROMONAS GINGIVALIS ESTUDIO IN VITRO¨
Trabajo de titulación previo la obtención del grado Académico de Odontólogo.
AUTOR:
ALEXIS IVÀN AIGAJE SIERRA
TUTOR:
DRA. MYRIAM KATHERINE ZURITA SOLÍS
FEBRERO, 2016
ii
AGRADECIMIENTOS
A mi tutora Dra. Katherine Zurita, docente de la Facultad de Odontología de la Universidad
Central del Ecuador, por su asesoramiento, colaboración y orientación durante todo el transcurso
de elaboración del proyecto de tesis.
A la Dra. Rachide Acosta y F.B. Darwin Roldan por su colaboración y desinteresado apoyo en el
laboratorio de química farmacéutica de la Facultad de Ciencias Químicas de la Universidad
Central del Ecuador.
A mis padres por su paciencia y disposición durante el transcurso de desarrollo de este proyecto.
iii
DEDICATORIA
A mis padres por su abnegada labor, constancia y cariño
siempre siendo el motor y el pilar fundamental
en todo el trayecto de vida universitaria.
A mis abuelitos
por sus inmensas enseñanzas, alegría
y fuerzas de seguir adelante.
A mi familia y familiares
por las ganas de continuar superándose cada día.
iv
AUTORIZACIÒN DE LA PROPIEDAD INTELECTUAL
Yo, ALEXIS IVÀN AIGAJE SIERRA, en calidad de autor del trabajo de investigación
realizado sobre ¨EFECTIVIDAD ANTIMICROBIANA DEL ACEITE ESENCIAL DE
MINTHOSTACHYS MOLLIS (TIPO) AL 25, 50, 100 % FRENTE A
PORPHYROMONAS GINGIVALIS ESTUDIO IN VITRO¨. Por la presente autorizo a la
UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR, hacer uso de todos los contenidos que me
pertenecen o de parte de los que contienen esta obra, con fines estrictamente académicos o de
investigación.
Los derechos que como autor me corresponden, con excepción de la presente autorización,
seguirán vigentes a mi favor, de conformidad con lo establecido en los artículos 5, 6, 8, 19 y
además pertinentes de la Ley de Prioridad Intelectual y su Reglamento.
Quito, 18 de febrero de 2016.
ALEXIS IVÀN AIGAJE SIERRA
1720100781
v
UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR FACULTAD DE ODONTOLOGÌA
UNIDAD DE INVESTIGACIÒN, TITULACIÒN Y GRADUACIÒN
APROBACIÒN DEL TUTOR
Quito, 18 de febrero de 2016
Dra. Mariela Balseca.
COORDINADOR DE LA UNIDAD DE INVESTIGACIÒN GRADUACIÒN Y
TUTULACIÒN DE LA FACULTAD DE ODONTOLOGÌA DE LA UNIVERSIDAD
CENTRAL DEL ECUADOR.
Presente
De mi consideración:
Yo, MYRIAM KATHERINE ZURITA SOLIS, APRUEBO como TUTOR la tesis titulada
¨EFECTIVIDAD ANTIMICROBIANA DEL ACEITE ESENCIAL DE
MINTHOSTACHYS MOLLIS (TIPO) AL 25, 50, 100 % FRENTE A
PORPHYROMONAS GINGIVALIS ESTUDIO IN VITRO¨ que se desarrolló en el área del
conocimiento de la especialidad de Odontología, cuyo AUTOR es el estudiante
Sr. ALEXIS IVÀN AIGAJE SIERRA.
MYRIAM KATHERINE ZURITA SOLIS
1708118854
vi
HOJA DE APROBACIÓN DE TESIS
vii
INDICE
AGRADECIMIENTOS ..................................................................................... ii
DEDICATORIA ............................................................................................... iii
AUTORIZACIÒN DE LA PROPIEDAD INTELECTUAL ............................ iv
APROBACIÒN DEL TUTOR .......................................................................... v
HOJA DE APROBACIÓN DE TESIS ............................................................. vi
INDICE DE FIGURAS ............................................................................................ xi
INDICE DE TABLAS. ........................................................................................... xiii
RESUMEN ..................................................................................................... xiv
ABSTRACT ..................................................................................................... xv
INTRODUCCION ........................................................................................... xv
CAPITULO I .......................................................................................................... 3
1.1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA ......................................................................................3
1.2. FORMULACION DEL PROBLEMA .........................................................................................5
1.3. OBJETIVOS .........................................................................................................................6
1.3.1. OBJETIVO GENERAL ............................................................................................................................... 6
1.3.2. OBJETIVOS ESPECÌFICOS ........................................................................................................................ 6
1.4. JUSTIFICACION ...................................................................................................................7
viii
1.5. HIPOTESIS ..........................................................................................................................9
CAPITULO II ....................................................................................................... 10
MARCO TEORICO .............................................................................................. 10
2.1. ANTECEDENTES ................................................................................................................ 10
2.2. PORPHYROMONA GINGIVALIS ......................................................................................... 12
2.2.1. TAXONOMIA ........................................................................................................................................ 13
2.2.2. MORFOLOGIA Y ESTRUCTURA ............................................................................................................. 14
2.2.3. FACTORES DE VIRULENCIA ................................................................................................................... 15
2.2.4. FISIOPATOLOGIA .................................................................................................................................. 19
2.2.5. NUTRICION ........................................................................................................................................... 20
PLANTAS MEDICINALES ..................................................................................... 22
2.3. FITOTERAPIA.................................................................................................................... 22
2.4. PRINCIPIO ACTIVO DE LAS PLANTAS MEDICINALES ............................................................ 23
ACEITES ESENCIALES ......................................................................................... 25
2.5. COMPOSICION ................................................................................................................. 25
2.6. COMPOSICIÓN QUÍMICA .................................................................................................. 25
2.7. PROPIEDADES .................................................................................................................. 26
2.8. LOCALIZACION ................................................................................................................. 27
2.9. PROPIEDADES ORGANOLEPTICAS ..................................................................................... 27
2.10. PROPIEDADES FISICAS ...................................................................................................... 28
ix
MINTHOSTACHYS MOLLIS (TIPO) ...................................................................... 29
3.1. CARACTERISTICAS BOTÁNICAS. ........................................................................................ 29
3.2. CLASIFICACION SITEMÁTICA ............................................................................................. 30
3.3. USOS Y APLICACIONES ..................................................................................................... 31
3.4. EXTRACCION DEL ACEITE ESENCIAL. .................................................................................. 32
3.5. DESTILACION POR ARRASTRE DE VAPOR ........................................................................... 34
3.6. MECANISMO DE ACCION DEL ACEITE ESENCIAL SOBRE LOS MICROORGANISMOS .............. 36
3.7. CARACTERISTICAS FISICO QUIMICAS DEL ACEITE ESENCIAL DE MINTHOSTACHYS MOLLIS
(TIPO) 37
3.8. MOLECULAS PRESENTES EN MINTHOSTACHYS MOLLIS ...................................................... 38
3.8.1. PULEGONA ........................................................................................................................................... 38
3.8.2. MENTONA ............................................................................................................................................ 38
3.8.3. CARVACROL ......................................................................................................................................... 38
3.8.4. CARVONA ............................................................................................................................................. 39
3.8.5. MENTOL ............................................................................................................................................... 39
3.8.6. TIMOL................................................................................................................................................... 39
3.8.7. LINALOL ................................................................................................................................................ 40
CAPITULO III ...................................................................................................... 41
METODOLOGIA ................................................................................................. 41
4.1. TIPO DE ESTUDIO ............................................................................................................. 41
4.2. POBLACION Y MUESTRA ................................................................................................... 42
x
4.3. CRITERIOS DE INCLUSION ................................................................................................. 45
4.4. CRITERIOS DE EXCLUSION ................................................................................................. 45
4.5. VARIABLES ....................................................................................................................... 45
4.5.1. VARIABLE DEPENDIENTE ...................................................................................................................... 45
4.5.2. VARIABLE INDEPENDIENTE .................................................................................................................. 45
4.6. OPERACIONILIZACIÓN DE VARIABLES ............................................................................... 46
PROCEDIMIENTO .............................................................................................. 48
4.7. OBTECION DEL ACEITE DE MINTHOSTACHYS MOLLIS (TIPO) .............................................. 48
4.7.1. RECOLECCION DE MINTHOSTACHYS MOLLIS (TIPO) ............................................................................ 48
4.7.2. EXTRACCION DEL ACEITE ESENCIAL ..................................................................................................... 49
4.7.3. DILUCION DEL ACEITE ESENCIAL .......................................................................................................... 49
4.8. PREPARACION DEL INOCULO BACTERIANO ....................................................................... 50
4.9. PREPARACION DE LOS DISCOS DE PAPEL ........................................................................... 50
4.10. SIEMBRA EN EL AGAR SANGRE ......................................................................................... 51
4.11. CEPA BACTERIANA ........................................................................................................... 51
4.12. PRUEBAS DE SUCEPTIBILIDAD BACTERIANA ...................................................................... 52
4.13. DETERMINACION DEL EFECTO ANTIBACTERIANO .............................................................. 53
CAPITULO IV ..................................................................................................... 54
5.1. RESULTADOS ................................................................................................................... 54
5.2. DISCUSIÓN ....................................................................................................................... 62
CAPITULO V ...................................................................................................... 64
xi
6.1. CONCLUSIONES ................................................................................................................ 64
6.2. RECOMENDACIONES ........................................................................................................ 65
BIBLIOGRAFIA ................................................................................................... 66
ANEXOS ............................................................................................................ 72
xi
INDICE DE FIGURAS
Figura 1: Minthostachys mollis (Tipo), se la puede encontrar de manera silvestre. ......................................... 29
Figura 2: Mecanismos de extracción del aceite esencial................................................................................... 33
Figura 3: Destilación por arrastre de vapor de agua en el laboratorio. ............................................................. 35
Figura 4: Características físico químicas del aceite esencial de Minthostachys mollis (tipo). ......................... 37
Figura 5: Efectividad antibacteriana según la escala de Duraffourd. ................................................................ 61
Figura 6: Resultados del laboratorio de química farmacéutica. ........................................................................ 73
Figura 7: Efectividad antimicrobiana del aceite esencial de minthostachys mollis (tipo) en sus diferentes
concentraciones. ................................................................................................................................................. 74
Figura 8: Certificado del laboratorio de análisis clínico y bacteriológico. ....................................................... 76
Figura 9: Lugar de recolección en la parroquia de Pifo del distrito metropolitano de Quito. ........................... 77
Figura 10: Planta a recolectar Minthostachys mollis (tipo). ............................................................................. 77
Figura 11: Agitación continua de la planta con agua. ....................................................................................... 78
Figura 12: Destilación por arrastre de vapor de agua. ...................................................................................... 79
Figura 13: Embudos de separación con solvente (hexano). .............................................................................. 80
Figura 14: Destilación, en esta fase se evapora el hexano. .............................................................................. 81
Figura 15: Aceite esencial de Minthostachys mollis (tipo) a sus diferentes concentraciones. .......................... 82
Figura 16: Recolección de Porphyromonas gingivalis para la preparación del inoculo bacteriano. ................. 83
Figura 17: Dilución en agua destilada de P. gingivalis para la preparación del inoculo bacteriano. ................ 83
Figura 18: Comparación del inoculo bacteriano de manera visual con una solución MCfarland de igual
concentración. .................................................................................................................................................... 84
Figura 19: Colocación del antimicrobiano, aceite esencial de minthostachys mollis (tipo) puro, al 25% y 50%,
en los discos de papel. ........................................................................................................................................ 85
Figura 20: Discos de papel embebidos a las diferentes concentraciones de aceite esencial. ............................ 85
xii
Figura 21: Discos de papel dos de los cuales estan embebimos con agua como control negativo y dos con
clorhexidina 0,12% como control positivo......................................................................................................... 86
Figura 22: Hisopado del inoculo bacteriano en todas las cajas Petri. ............................................................... 87
Figura 23: Colocación de los discos de papel embebidos con el aceite esencial de tipo en las cajas de Petri. . 87
Figura 24: A de más de la clorhexidina al 12% como control positivo, se usó discos de 10 ug de ampicilina. 88
Figura 25: Cajas de Petri colocadas en una jarra de incubación de anaerobios. ............................................... 89
Figura 26: Se coloca en la jarra una vela para consumir el oxígeno dentro de esta y que se vuelva un medio
anaerobio. ........................................................................................................................................................... 89
Figura 27: Colocación de la jarra de incubación de anaerobios en la incubadora a 37 grados centígrados. ..... 90
Figura 28: En la caja de Petri # 2 podemos observar la inhibición de la bacteria tras 48 horas de incubación.91
Figura 29: En la caja de Petri # 9 podemos observar la inhibición de la bacteria tras 48 horas de incubación.92
Figura 30: Medición de los halos de inhibición con un calibrador para método de ensayo de la susceptibilidad
de Kirby Bauer. .................................................................................................................................................. 93
Figura 31: Halos de inhibición del control negativo agua y del control positivo clorhexidina 0,12%. ............ 94
Figura 32: Halos de inhibición del control positivo alternativo disco de Ampicilina de 10 ug. ....................... 95
xiii
INDICE DE TABLAS.
Tabla 1: TAMAÑO DE LA MUESTRA, COMPARACIÓN DE DOS MEDIAS. ....................................... 43
Tabla 2: PRUEBAS NO PARAMÉTRICAS: PRUEBAS DE NORMALIDAD. ......................................... 54
Tabla 3: PRUEBA NO PARAMÉTRICA: KRUSKAL WALLIS. ............................................................... 55
Tabla 4: COMPARACIONES POR PAREJAS DE CONCENTRACIONES. ............................................ 56
Tabla 5: PRUEBA NO PARAMÉTRICA: KRUSKAL WALLIS. ............................................................... 57
Tabla 6: COMPARACIONES POR PAREJAS DE CONCENTRACIONES. ............................................ 58
Tabla7: EFECTIVIDAD ANTIBACTERIANA SEGÚN LA ESCALA DE DURAFFOURD. .................. 60
xiv
UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE ODONTOLOGÌA
¨EFECTIVIDAD ANTIMICROBIANA DEL ACEITE ESENCIAL DE
MINTHOSTACHYS MOLLIS (TIPO) AL 25, 50, 100 % FRENTE A
PORPHYROMONAS GINGIVALIS ESTUDIO IN VITRO¨
Autor: Alexis Iván Aigaje Sierra.
Tutor: Myriam Katherine Zurita Solís.
Fecha: Quito, 18 de febrero de 2016.
RESUMEN
El propósito de esta investigación fue determinar la actividad antibacteriana de la
Minthostachys mollis (TIPO) frente a la Porphyromonas gingivalis que es uno de los
principales periodontopatógenos. Se elaboró un aceite esencial utilizando la técnica de
destilación por arrastre de vapor de agua, obteniendo 10ml luego del procedimiento, el
mismo que fue diluido para obtener tres concentraciones al 25%, 50% y 100%, se utilizó
Clorhexidina al 0,12% y Ampicilina de 10ug como control positivo y agua como control
negativo. Al realizar las pruebas de sensibilidad in vitro se obtuvo los siguientes resultados:
la efectividad antibacteriana en la concentración al 25% obtuvo un halo promedio de 11,2
mm, al 50% la efectividad alcanzó un halo promedio de 9,6 mm y al 100% logró un halo
promedio de 13,6 mm siendo esta concentración la más efectiva. Los controles positivos
estuvieron en un rango de muy sensibles y sumamente sensibles y el control negativo no
obtuvo efectividad.
Palabras clave: Minthostachys mollis, Tipo, aceite esencial, Porphyromonas gingivalis,
efectividad antimicrobiana.
xv
UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE ODONTOLOGÌA
¨ANTIMICROBIAL EFFECTIVENESS OF ESSENTIAL OIL MINTHOSTACHYS
MOLLIS (TYPE) AT 25, 50, 100% AGAINST PORPHYROMONAS GINGIVALIS IN
VITRO STUDY¨.
Author: Alexis Iván Aigaje Sierra.
Tutor: Myriam Katherine Zurita Solis.
Date: Quito, February 18, 2016.
ABSTRACT
The purpose of this research was to determine the antibacterial activity of Minthostachys mollis
(TYPE) against Porphyromonas gingivalis is a leading periodontopathogens. an essential oil was
prepared using the technique of stripping steam, obtaining 10ml after the procedure, the same
that was diluted to obtain three concentrations 25%, 50% and 100%, was used Chlorhexidine
0.12% ampicillin and 10ug as positive control and water as negative control. When performing
susceptibility testing in vitro the following results were obtained: the antibacterial effectiveness
of the concentration to 25% halo earned an average of 11.2 mm, 50% effectiveness averaged 9.6
mm halo and 100 % it achieved an average of 13.6 mm halo being the most effective
concentration. Positive controls ranged from very sensitive and highly sensitive negative control
and scored effectiveness.
Keywords: Minthostachys mollis, type, essential oil, Porphyromonas gingivalis, antimicrobial
effectiveness.
1
INTRODUCCIÓN
(Vela, 2011) Toda zona anatómica del cuerpo humano está contaminada con una flora
habitual normal, la cavidad bucal no es la excepción, se encuentra constituida por patógenos
facultativos y por no patógenos, en relación al contenido íleo-cecal cuya flora microbiana es de
106 – 10
11, la placa supra gingival tiene 10
10 – 10
12 bacterias por gramo y la saliva 10
8 bacterias
por mililitro es decir que la cavidad bucal es una de las más contaminadas del organismo,
muchos son los fármacos que se encaminan a la disminución de carga microbiana tanto en salud
como en enfermedad, pero existen alternativas con un similar grado de eficacia y sin efectos
adversos, estamos hablando de los aceites esenciales, obtenidos de plantas, arbustos, flores, etc.
(CEP, 2010) Y (Waizel Bucay, February 2010 ) Nos mencionan que el correcto
conocimiento, manejo y utilización de las plantas medicinales nos permite su empleo con fines
curativos y nos previene de intoxicaciones graves o mortales, por lo que hay que rescatar que
hoy en día más personas están interesadas en el uso de la fitoterapia como alternativa para los
productos obtenidos a través de la fabricación química y buscan opciones únicamente naturales.
(Stashenko, Octubre 2009) Hace alusión a las plantas llamadas medicinales con todo el
peso histórico y sus beneficios son capaces de generar esencias en cantidades apreciables y sus
componentes, solos o en combinación, exhiben una o varias actividades biológicas como por
ejemplo, anti bacteriana, antiviral, anti fúngica, cabe mencionar que todos los aceites esenciales
2
producen un efecto antiséptico. Las plantas y todos sus beneficios activos han sido utilizados por
la humanidad desde siempre, numerosos son los estudios que muestran las innumerables
cualidades que estas poseen y sus diversas aplicaciones.
3
CAPITULO I
1.1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
(Pérez Luyo, 2005) El factor más importante en la patogenia de la enfermedad es la
capacidad de un gran número de bacterias orales de producir ácidos a partir de los hidratos de
carbono de la dieta. Esta hipótesis fue sustentada experimentalmente al aislar varios grupos de
microorganismos orales.
(Pérez Luyo, 2005) Dichos microorganismos orales, localizados en sitios específicos de
la superficie bucal, comprenden las bacterias que producen las sustancias químicas (ácidos
orgánicos y enzimas proteolíticas) que causan la destrucción de los componentes inorgánicos y
orgánicos de la cavidad oral.
(Cano, Bonilla, Roque, & Ruiz, 2008) La actividad antimicrobiana, antifúngica e
inclusive antiviral de la Minthostachys mollis (Tipo), son propiedades apreciables debido a que
los aceites esenciales pueden actuar como desacopladores, los cuales interfieren en la
translocación de los protones sobre la membrana y consecuentemente interrumpir la fosforilacion
del ADP.
4
(Alonso, 2015) En todo el callejón interandino que incluye a Perú, Argentina, Ecuador se
puede encontrar una gran variedad de plantas que presentan amplias cualidades que sabiéndolas
aprovechar, como elementos básicos, nos dan una gama de productos medicinales, que pueden
ser utilizados por la población como una alternativa a los tratamientos convencionales.
5
1.2. FORMULACION DEL PROBLEMA
La presente investigación se realizará en base a evaluar si el aceite esencial del
Minthostachys mollis (Tipo) al 25, 50 y 100% posee efectividad antimicrobiana sobre
Porphyromonas gingivalis.
¿Qué porcentaje de aceite esencial de Minthostachys mollis (Tipo) causa mejor
efectividad antimicrobiana in vitro frente a Porphyromonas gingivalis?
6
1.3. OBJETIVOS
1.3.1. OBJETIVO GENERAL
Evaluar la efectividad antimicrobiana del aceite esencial de Minthostachys mollis
(Tipo) frente a Porphyromonas Gingivalis.
1.3.2. OBJETIVOS ESPECÌFICOS
Identificar la actividad antimicrobiana cualitativamente y cuantitativamente del
aceite esencial de Minthostachys mollis (Tipo) al 25, 50, 100% frente a
Porphyromonas Gingivalis.
Establecer diferencias de inhibición entre fármacos tradicionales (Clorhexidina al
0,12% y Ampicilina de 10 ug) y la actividad antimicrobiana del aceite esencial de
Minthostachys mollis (Tipo) al 25, 50 y 100% frente a Porphyromonas Gingivalis.
Determinar cuál es la concentración más óptima del aceite esencial de Minthostachys
mollis (Tipo) en la inhibición de Porphyromonas Gingivalis.
7
1.4. JUSTIFICACION
Según la OMS las enfermedades bucodentales más frecuentes son la caries dental y
las periodontopatias, después de la caries dental cuya prevalencia es de 60 a 90% en
escolares, las periodontopatias son las más comunes y la Gingivitis encabeza este listado,
sabiendo que esta enfermedad siempre va a preceder a la periodontitis y a enfermedades
periodontales más severas. Por lo tanto la Porphyromonas gingivalis tiene un papel
preponderante ya que es una de las bacterias que está presente en las primeras instancias
para que se produzcan dichas patologías.
El objetivo de esta investigación es conocer de una manera más profunda la capacidad
antimicrobiana del aceite esencial de Minthostachys mollis (Tipo) al 25, 50 y 100% frente a
Porphyromonas Gingivalis, investigaciones que le preceden ya han demostrado cierta
actividad antibacteriana y antimicótica frente a bacterias y hongos orales y no solo se la
utilizado en este campo, por décadas se le ha dado un rol importante a esta planta en el
campo de la agricultura y de la alimentación en países como Perú.
La presente se basa en múltiples pesquisas que muestran la variada utilidad que se
puede dar a las plantas llamadas medicinales, los distintos componentes que constituyen los
aceites esenciales como los metabolitos, que nos brindan esa preciada actividad contra
microorganismos.
8
Abundante es la cantidad de microorganismos presentes en la cavidad oral, los
mismos que constituyen una flora habitual, normal del aparato estomatognático, cuando este
equilibrio se pierde hablamos de que el organismo entra en un estado patológico, en dicha
situación muchas de las bacterias exacerban produciendo múltiples lesiones.
Es aquí cuando intervienen las ciencias médicas, utilizando varios productos,
basándonos en la evidencia acumulada, podemos tomar como alternativa los productos
naturales.
9
1.5. HIPOTESIS
(Ho) El aceite esencial de Minthostachys mollis (Tipo), no presenta actividad
antimicrobiana frente a Porphyromonas Gingivalis.
(Hi) El aceite esencial de Minthostachys mollis (Tipo), tiene una extraordinaria actividad
antimicrobiana frente a Porphyromonas Gingivalis.
10
CAPITULO II
MARCO TEORICO
2.1. ANTECEDENTES
DÍAZ LEDESMA (2005), su investigación estuvo encaminada a la ¨Determinación de la
actividad antibacteriana in vitro de Minthostachys mollis griseb (muña) frente a bacterias orales
de importancia estomatológica¨, concluyendo que existe una marcada actividad antibacteriana
frente al Streptococcus mutans, Lactobacillus sp., Fusubacterium nucleatum, Agregatibacter
actinomicetencomitans, Actinomyces sp. La bacteria más sensible al aceite fue Fusobacterium
nucleatum con una media de 20,13 mm de diámetro en sus halos de inhibición seguida de
Agregatibacter actinomicetencomitans con una media de 18,42 mm de diámetro en sus halos de
inhibición.
AZAÑA ESPINOZA (2010), estudió la ¨Efectividad Antibacteriana in vitro del aceite
esencial de Minthostachys mollis griseb (muña) sobre bacterias prevalentes en patologías
periapicales crónicas de origen endodóntico¨, obteniendo resultados favorables ya que el aceite
esencial puro y en sus diluciones presentó efectividad antibacteriana tanto cuantitativamente
como cualitativamente mayor al alcohol etílico al 70º y menor al Paramonoclorofenol
alcanforado frente a las muestras bacterianas en estudio, que fueron el Fusobacterium nucleatum
ATCC 25586, Prevotella melaninogénica ATCC 25845, Enterococcus faecalis ATCC 29212 y
muestras de conducto radicular con Periodontitis Apical Crónica.
11
CRUZADO DONATO (2012) determinó la ¨Concentración inhibitoria mínima in vitro de
Minthostachys mollis (muña) frente al Streptococcus mutans ATCC 35668¨, la Concentración
Inhibitoria Mínima (CIM), después del conteo de Unidades Formadoras de Colonias (UFC´s) de
Streptococcus mutans, se concluyó que es en una concentración al 50% ya que es desde este
porcentaje que presenta efecto inhibitorio y este efecto se incrementa en relación directa con el
aumento de la concentración.
HUARI GUERRERO (2014), su estudio se basó en determinar el ¨Efecto antibacteriano
in vitro del aceite esencial de Minthostachys mollis (muña) en Streptococcus mutans¨,
determinando que existe un efecto inhibitorio mayor del aceite al 100% sobre la bacteria con un
halo promedio de 10.79 mm, comparado con las diluciones al 50 % y 25 %.
12
2.2. PORPHYROMONA GINGIVALIS
(Jannet, Vijaya, & John, 2000) (Ramos Perfecto Donald, 2O11) Varias bacterias tienen
una gran particularidad por colonizar y prosperar a nivel subgingival estando mucho más
vinculadas con enfermedades periodontales, la P. gingivalis es un bacilo Gram negativo
anaerobio estricto sobresaliente en la periodontitis crónica, al igual que el Agregatibacter
actinomicetencomitans que está presente en esta patología, los diversos factores de virulencia de
la Porphyromonas Gingivalis la hacen sumamente agresiva, ya que utiliza las condiciones del
huésped para inducir mayor daño y en el surco gingival halla los requisitos óptimos para su
desarrollo provocando una devastación lenta y persistente de los tejidos periodontales.
(Ramos Perfecto Donald, 2O11) (Jannet, Vijaya, & John, 2000) La P. gingivalis incluso
suele exhibirse mucho más patógeno siendo un agente de riesgo para infecciones pulmonares,
parto pre termino y bajo peso al nacer, y acrecienta el riesgo de infarto al miocardio cuando
existe su presencia en placas arterioescleróticas.
(Liébana Ureña, 2002) El género Porphyromonas engloba bacterias asacarolíticas, nos
referimos a que no metabolizan los carbohidratos ni por la ruta de Embdem-Meyerhof-Parnas
(glucólisis) ni por la vía de las pentosas fosfato; esto último se debe a que no poseen las enzimas
glucosa-6-fosfato deshidrogenasa y gluconato-6-fosfato deshidrogenasa. Se vale de compuestos
13
nitrogenados para obtener energía, no progresan en presencia de bilis al 20% y son susceptibles a
concentraciones superiores a 2 µg/ml de vancomicina.
(Liébana Ureña, 2002) Las especies del género de interés en patología humana son: P.
asaccharolytica la misma que está vinculada con patología extraoral, ya que pertenece a la
microbiota normal del colon y la vagina, P. gingivalis, P. endodontalis y P. catoniae, que se
desarrollan en su hábitat natural que es la cavidad oral y excepcionalmente producen procesos
patológicos fuera de ella.
(Ronimus & Morgan, 2003) La vía de Embdem-Meyerhof-Parnas (glucólisis)
anteriormente nombrada es la secuencia metabólica en la que se oxida la glucosa, cuando no
existe la presencia de oxígeno esta es la única vía que produce ATP en los animales, se trata de
nueve reacciones enzimáticas mediante las que se obtienen dos moléculas de piruvato y dos
equivalentes reducidos de NADH, los que al incorporarse en la cadena respiratoria crean cuatro
moléculas de adenosín trifosfato (ATP).
2.2.1. TAXONOMIA
(De Palm, Khalaf, & Bengtsson, 2013) (Ramos Perfecto Donald, 2O11) El empleo de
nuevos métodos de clasificación basándose en biología molecular como ADN-ADN hibridación
y otras, apoyó al género bacteroides que en primeras instancias se lo clasifico como un grupo de
14
bacterias heterogéneas, anaerobios obligados Gram negativas no esporuladas y de forma bacilar,
del cual la bacteria en estudio pudo ser definida en un grupo homogéneo de especies a partir de
los bacteroides, nombrados ahora Porphyromonas, que en un comienzo eran tres especies P.
gingivalis, P. asaccharolyticus, P. endodontales, siendo particularidad de estas él no ser
fermentadores, tener como sustrato el nitrógeno y emplear a la tripticasa y a la peptona para
obtener energía.
(Negroni, 2009) Actualmente a la Porphyromonas gingivalis se la define como un
cocobacilo Gram-negativo, no móvil, anaerobio estricto, asacarolítico, concerniente al filo
Bacteroidetes.
2.2.2. MORFOLOGIA Y ESTRUCTURA
(Ramos Perfecto Donald, 2O11) Se lo observa como capsulado no esporulado sin flagelos
y abundantes fimbrias, a nivel de la membrana externa de la pared celular expone endotoxinas,
en su superficie presenta una diversa cantidad de enzimas que benefician a la virulencia y posee
la habilidad de elaborar enzimas que degradan las proteínas, se la considera un potencial
comensal en la cavidad oral y mide de 1 a 3,5 um de largo por 0,5 a 0,8 um de ancho.
15
(Macín Cabrera, 2015) La tonalidad marrón oscuro o negro de las colonias se debe a la
facultad que posee para almacenar hierro, acumulándolo superficialmente para metabolizar en
situaciones deficitarias, de ahí que se las conoce como bacterias pigmentadas de negro, las
colonias no son fluorescentes bajo la luz ultravioleta.
2.2.3. FACTORES DE VIRULENCIA
(Diaz Zuñiga J, 2012) Lo que determina a un microorganismo como virulento es la
cualidad de producir metabolitos tóxicos, enzimas, toxinas, al igual que la producción de
componentes de la superficie o pared celular que le posibilitan eludir las barreras protectoras e
invadir y sobrevivir en los tejidos y células del anfitrión. Así podemos precisar a la virulencia
como la capacidad de un microorganismo de interferir con los procesos metabólicos y
fisiológicos del hospedador lo que conlleva a la instauración de una enfermedad.
(Garcia Reyna Roberto, 2015) La P. gingivalis es una bacteria asacarolitica anaerobia que
fabrica una amplio abanico de factores de virulencia entre los que tenemos: cisteín proteasas,
lipopolisacáridos, cápsulas y fimbrias, estas últimas codifican el gen fimA. Todos esos factores
están encaminados a la adquisición de hierro y péptidos de crecimiento como fuente de energía a
partir de la hemina (hierroprotoporfirina IX), la cual la obtiene de la hemoglobina, haptoglobina,
mioglobina, metahemoglobina, oxihemoglobina, lactoperoxidasa albúmina, catalasa, y citocromo
c, de los glóbulos rojos por medio de su reclutamiento en el lugar de la invasión.
16
Podemos listar los factores de virulencia de esta bacteria periodontopatógena.
2.2.3.1. CAPSULA
(Ramos Perfecto Donald, 2O11) El rol preponderante que juega en la evasión del sistema
inmunológico, le otorgan una vital importancia a esta estructura, lo hace eludiendo la fagocitosis,
opsonización y accionar del complemento, está compuesta por polisacáridos, siendo un gen
codificante de epimerasa epsC esencial para su síntesis, existiendo 6 serotipos capsulares de k1 a
k6.
2.2.3.2. MEMBRANA EXTERNA
(Macín Cabrera, 2015) Posee un papel indispensable al favorecer a la adhesión y
congregación bacteriana, colonización de células epiteliales y fibroblastos, formación y
mantenimiento de la biopelicula subgingival.
17
2.2.3.3. FIMBRIAS
(Liébana Ureña, 2002) Estas actúan como adhesinas, fomentan los fenómenos de
congregación y adhesión a superficies epiteliales y dentales con la mediación de la saliva, al
igual que las proteínas de la membrana externa. Poseen la capacidad de sumarse a distintas
moléculas, células y sustratos, como epitelial, fibronectina, fibrinógeno, lactoferrina, al mismo
tiempo expone cualidades quimiotacticas y de inducción de citoquinas, se presentan en forma
perítrica de 0,3 a 3,0 um de largo y 5 nm de ancho, compuestos por monómeros de fimbrilina,
codificadas por el gen fimA.
2.2.3.4. PROTEASAS
(Liébana Ureña, 2002) Gracias a ellas se obtiene la capacidad de penetración,
multiplicación y diseminación que la bacteria posee, ya que consigue nutrientes a partir de los
tejidos del anfitrión, induciendo significativos daños tisulares. La Porphyromonas gingivalis
genera una vasta serie de enzimas proteolíticas; varias de las cuales se asocian a la membrana
externa y otras se liberan al exterior o son transportadas a distancia por las vesículas
superficiales.
18
(Macín Cabrera, 2015) Está implicada en la destrucción del periodonto, tejido conectivo
del diente y reabsorción ósea, presentan acción hemolítica que es la desintegración de hematíes
para obtener hierro, dentro de sus propiedades tenemos:
Elevación de la permeabilidad vascular del surco gingival, inflamación y mayor
número de nutrientes para las bacterias debido a la destrucción de proteínas
reguladoras, destrucción de inmunoglobulinas igAI, igAII e igG
Perciben hierro de moléculas que engloben transferrina, lactoferrina o hemoglobina
Activación de metaloproteasas en la matriz de células epiteliales que rodea al diente
resultando en la destrucción tisular
(Del Río Martinez, 2006) Se consideran a las colagenasas y a las aminopeptidasas como
decisivas en la patogénesis de las bacterias, además existen otras proteinasas específicas como
arginina y lisina proteinasa que son proteinasas cisteínas y han recibido un nombre en común
gingipains y son un potente normalizador de la permeabilidad vascular, siendo capaces de
inducir la permeabilidad vascular en el plasma humano y unirse directamente a bradiquininas. La
Arg-gingipain es capaz de inactivar especies oxigeno reactivas (bactericidas naturales)
producidas por PMNN el cual es un primordial mecanismo de defensa del hospedador.
19
2.2.3.5. PROTEASAS CASEINOLITICAS
(Macín Cabrera, 2015) Inhiben la actividad bacteriana de PMNN pero el principal papel
de estas es degradar colágeno tipo I y IV, igG humana, fibronectina y complemento C3, C4, C5 y
C5a.
2.2.3.6. METABOLITOS TÓXICOS TISULARES
(Liébana Ureña, 2002) La particularidad principal de estas es aumentar la permeabilidad
de la mucosa oral, son ácidos grasos de cadena corta, compuestos azufrados volátiles, amoníaco
e indol. También posee moléculas antibacterianas, varios de los metabolitos mencionados
desempeñan un rol competitivo con diferentes bacterias; a ellos hay que sumar la elaboración de
bacteriocinas por parte de determinadas cepas de P. gingivalis. Todas estas moléculas están
implicadas en las vastas interrelaciones que las bacterias instauran en la cavidad oral.
2.2.4. FISIOPATOLOGIA
(Ramos Perfecto Donald, 2O11) Se presenta a través de la saliva por contagio o
transmisión por individuos infectados, es considerado un colonizador secundario, comensal del
surco gingival, su capacidad de adherirse principalmente por sus fimbrias perítricas tipo Ib, II así
20
como por sus vesículas de membrana, hemaglutininas, capsula, le proporcionan la facultad de dar
el primer paso en la colonización del surco, poder adaptarse e invadir las células epiteliales en un
lapso aproximado de 20 minutos, logrando replicarse dentro de ellas y diseminarse a las células
de alrededor, esta peculiaridad de invadir la célula le da la capacidad de evadir las defensas del
anfitrión.
(Jannet, Vijaya, & John, 2000) La P. gingivalis posee la capacidad de degradar diversas
proteínas, componentes del surco gingival, ligamento periodontal y hueso alveolar, además de
alterar la respuesta propia y específica del hospedador. A todo esto se suma un factor huésped,
que ante la presencia de esta bacteria, activa una inmensidad de respuestas que pueden exacerbar
el proceso inflamatorio presente en el surco, aumentando el proceso de destrucción del
periodonto.
2.2.5. NUTRICION
(Del Río Martinez, 2006) El ecosistema subgingival suministra un entorno propicio para
esta especie ya que invariablemente coloniza en sitios donde la tensión de oxigeno es ínfima,
pero en la cual hay sustratos abundantes en nitrógeno, en estos sitios el potencial redox es bajo y
más bajo aun en bolsas periodontales que posee nutrientes endógenos ricos en péptidos y
aminoácidos.
21
(Grenier, 2014) La P. gingivalis necesita de un requerimiento imprescindible de hierro
para crecer sin embargo cuando existe una deficiencia del mismo en el sistema de poros de la
bacteria (sideporo, los cuales quelan hemina) utiliza hemina (hierro protoporfirina IX), los
niveles de hemina son cambiantes en boca y el sangramiento, como resultado de la inflamación
gingival, elevaría su conglomeración subgingival, de modo que este puede ser un factor que
predispone a la acumulación de la bacteria. Esta hemina que se almacena en la membrana
extracelular actúa como ¨basurero¨ de oxigeno fomentando a conservar un microambiente
anaerobio.
(Diaz Zuñiga J, 2012) Su notoriedad como colonizador se debe a su capacidad de
adhesión a los diferentes tipos de células de los tejidos de la cavidad oral, con otras bacterias,
con la matriz extracelular y con componentes salivales. Esta capacidad de adhesión es
proporcionada por las fimbrias, componente que además ha sido asociado a su potencial
patogénico; de hecho, la mayoría de pacientes con inflamación de los tejidos de soporte dentarios
(periodontitis) presentan el genotipo fimA II seguido en frecuencia por el genotipo fimA IV,
mientras que el genotipo fimA tipo I, III y V se detectan mayoritariamente en los adultos sanos
con presencia de P. gingivalis.
22
PLANTAS MEDICINALES
2.3. FITOTERAPIA
(Vanaclocha B, 2006) La fitoterapia etimológicamente significa la ¨terapéutica de las
plantas¨, se define como la ciencia que estudia el empleo de los productos de origen vegetal con
motivo terapéutico, ya sea para prever, atenuar o curar un estado patológico
(CEP, 2010) Cada vez es mayor el contacto que tiene la sociedad con la naturaleza, desde
niños se nos enseña a valorarla y respetarla, y al hecho de que la flora ha sido en todas las épocas
un patrimonio trascendental utilizado por el hombre desde la nutrición hasta la cosmética y
siempre presentes en el ámbito curativo. Desde el comienzo de las civilizaciones los remedios
naturales fueron el principal e incluso el único medio del que se disponía, actualmente existe un
gran conocimiento para desarrollar los estudios de manipulación química y así usar los principios
activos de las plantas, esto hizo que se ahondara la investigación de aquellas especies vegetales
que poseen cualidades medicinales y acrecentar su experiencia en el empleo de los productos que
de ellas se extraen.
(Alonso, 2015) No podemos obviar la biodiversidad que engloba a los seres vivos que
cohabitan la tierra, ya que la flora y fauna es característica de cada región y país, siendo el
resultado miles de millones de años de evolución biológica, se estima que existen 400 mil
23
especies de plantas en el planeta y probablemente el 20% posee un potencial medicinal
importante para la salud humana.
(Instituto Tecnologico Superior Esculapio, 2013) Especies como la Sangre de Drago
(Croton spp.) o la Uña de Gato (Uncaria tomentosa) son sinónimo de salud a bajo costo, pero si
se obtienen, producen y comercializan de manera sostenida y legal podrían convertirse en el
origen de elevados ingresos y más aún si esos procesos tienen el respaldo administrativo y
técnico adecuado. En el país existen aproximadamente 500 especies de plantas medicinales
conocidas.
(Instituto Tecnologico Superior Esculapio, 2013) De las quinientas especies de plantas
medicinales que se conocen, 228 se registraron como las más utilizadas al mismo tiempo 125 son
las más comercializadas, tomando en cuenta que serían muchas más si se sumaran las aún no
conocidas o reportadas.
2.4. PRINCIPIO ACTIVO DE LAS PLANTAS MEDICINALES
(Azaña Espinoza, 2010) El valor que se le otorga a la fitoterapia, se debe a la presencia de
sustancias químicas, mismas sustancias que generan un efecto fisiológico en el organismo, aún
no se conoce la naturaleza química de muchos de estos, otros han sido imitados, purificados o
sintetizados y por lo general pertenecen a uno de estos grupos: aceites esenciales, glúcidos,
24
alcaloides, taninos, sapogeninas, fenoles, terpenos, quinonas, carotenoides, resinas, flavonoides,
cumarinas.
(Vanaclocha B, 2006) Entre los productos de origen vegetal, los hay de diverso grado de
valor farmacológico y toxicológico: muy potentes (la hoja de digital, específicamente la digoxina
que es su principio activo), poco potentes (capítulos de manzanilla) y potencia intermedia (como
la flor de árnica y la raíz de regaliz), ya en el ejercicio terapéutico tenemos los dos últimos
grupos distinguidos por tener una actividad suave y moderada, con lìmites terapéuticos
relativamente amplios los mismos que permiten tratamientos menos agresivos y que hacen de la
fitoterapia una terapéutica suave.
Para situar los márgenes de la fitoterapia, debemos partir de las siguientes premisas:
Natural no es sinónimo de inocuo, sabemos que las plantas medicinales tienen límites
terapéuticos más extensos y producen menos efectos secundarios que los fármacos
sintéticos.
En la actualidad existe una base científica que apoya la validez de cuantiosos productos
naturales en determinados casos.
25
La efectividad se logra con el uso mesurado de los preparados fitoterápicos, tanto en su
administración como en sus indicaciones.
ACEITES ESENCIALES
2.5. COMPOSICION
(Alessandrini Díaz, 2014) Definió a los aceites esenciales como la unión compleja de
compuestos orgánicos que corresponden a distintas clases químicas como: hidrocarburos
terpénicos y sus derivados oxigenados, fenoles, aldehídos alifáticos y aromáticos entre otros, los
cuales son en su mayoría sensorialmente activos en las especias, por ejemplo el cuminaldehído
aporta fundamentalmente el aroma del comino, el cinamaldehído el aroma de la canela, así como
el timol y el carvacrol a todos los tipos de oréganos, a lo largo de la historia se han utilizado estas
especias para condimentar bebidas y alimentos ya que están constituidas por sustancias
aromáticas o sápidas que son agradables para el olfato y el paladar, al consumirlas estimulan
secreciones en el tubo digestivo aumentando el apetito.
2.6. COMPOSICIÓN QUÍMICA
(Azaña Espinoza, 2010), (Goldsmith, 1967) Están formados por varios compuestos
químicos que se los puede encontrar solos o de manera abundante o una mezcla heterogénea, los
componentes principales de los aceites esenciales son:
26
Hidrocarburos: Mirceno, cinemo, pinemo, canfeno, fenaldreno, bineno, limoneno.
Fenoles: Timol, carvacrol, eugenol, vainillina.
Aldehídos: Citral, citronelal, anisaldehído, benzaldehído, cinamadehído.
Cetonas: Alcanfor, carvona, mentona, piperitona, acetato fenona.
Éteres: Anetol, metilchavicol, eucaliptol, ascarodol.
Esteres: Salicilato de amilo, benzoato de metilo, acetato de terpinilo.
Alcoholes: Isoamílico, geraniol, linalol, citronelol, nerodinol, farsenol, terpinol, mentol,
borneol.
2.7. PROPIEDADES
(Alessandrini Díaz, 2014) Son altamente oleosos, volátiles, solubles en aceites, alcohol,
éter de petróleo, tetracloruro de carbono y además en solventes orgánicos, insolubles en agua
aunque le transmiten su perfume, son inflamables, responsables del aroma de las plantas, colores
y sabores, a veces dulces o amargos con densidad sumamente inferior a la del agua.
27
2.8. LOCALIZACION
(Miller, 2008) (Alessandrini Díaz, 2014) Más de dos mil tipos de plantas generan aceites
esenciales, las clases que proporcionan mayor cantidad de aceites esenciales pertenecen a las
familias labiadas, umbelíferas compuestas, Mirtáceas, Laureáceas, Rutáceas y Pináceas.
Podemos encontrar los aceites esenciales en las plantas en lugares como: raíz, tallos, hojas,
flores; son segregados por estructuras especializadas como los pelos glandulares, cavidades
esquizógenas, semillas, glándulas, sacos y venas de diferentes estructuras de la planta.
2.9. PROPIEDADES ORGANOLEPTICAS
(Alessandrini Díaz, 2014) Se caracteriza por tener un aroma parecido a la menta,
debemos tener en cuenta que la calidad y la intensidad de los aceites esenciales depende de la
variedad de la planta, condiciones en las que se cultivó, época de recolección, cosecha de la
planta, manejo de la misma, métodos de extracción entre otros.
28
2.10. PROPIEDADES FISICAS
(Agapito & Sung, 2003) Define varias de las propiedades físicas que poseen los aceites
esenciales como:
Líquidos a temperatura ambiente.
Raramente son coloreados.
Su densidad es inferior a la del agua.
Poseen un índice de refracción elevado.
Desvían la luz polarizada.
Son liposolubles y solubles en los disolventes orgánicos habituales.
Arrastrables en vapor de agua (muy poco solubles en ella).
Su punto de ebullición es superior a los 100 °C.
29
MINTHOSTACHYS MOLLIS (TIPO)
3.1. CARACTERISTICAS BOTÁNICAS.
(Rios M, 2009) La planta se presenta a manera de un arbusto perenne de 50 a 80 cm de
altura y bien ramificado desde la base. El tallo es cuadrangular y estriado. La hoja tiene una
lámina que es: ovada con margen dentada, truncada en la base y aguda en el ápice, además,
despide un olor mentolado cuando es macerada. La inflorescencia es verticilada y axilar o
terminal. La flor es bilabiada con pétalos de color blanco en forma de tubo y de 0,5 mm. El fruto
maduro es de tonalidad marrón y alberga una semilla.
Figura 1: Minthostachys mollis (Tipo), se la puede encontrar de manera silvestre.
Fuente: Iván Aigaje
30
3.2. CLASIFICACION SITEMÁTICA
Nombre Científico: Minthostachys mollis (Kunth) Griseb.
Familia: Lamiaceae.
Otros nombres: muña, poleo, poleo blanco, tipo blanco, tifu o yurac tipo.
Origen: nativa.
Estado cultural: silvestre.
Distribución espacial: abundante.
Disponibilidad temporal: copioso desde enero hasta mayo.
Órganos usados: flor, hoja, tallos.
(Berdomes, 2006) Nos menciona que la planta en estudio crece generalmente en la zona
Andina entre los 2500 y los 3500 metros de altitud es frondoso y ramificado, en Perú es conocida
como muña, muña muña, arash muña, en Ecuador como tipo, tipillo, en Paraguay: burrito, en
Bolivia: Martín muña, en Argentina y Brasil: peperina, en Venezuela: oreganote. Otros:
peperina, chancua, coz, hauycha, poleo silvestre, kon, orccomuña, hupaimuña. Las hojas en
infusión tienen propiedades carminativas y estomacales, es rico en calcio y fosforo, previene la
osteoporosis y favorece el crecimiento de los huesos y los dientes en los niños así como su
recuperación en los adultos.
31
3.3. USOS Y APLICACIONES
(Díaz Ledesma, 2005) El (Tipo) es conocido por la gente de las comunidades ya que
posee propiedades digestivas contra cólico, flatulencia (carminativo), vómitos, diarreas,
antitusígeno, antiasmático, expectorante, antiespasmódico, analgésico, antiséptico,
antinflamatorio, antifebril, en tratamiento de tumores y mezclándola con chilca se empleaba en
fracturas, es excelente contra la halitosis y para combatir jaquecas y soroche.
(Rios M, 2009) De manera doméstica se puede hacer una decocción de 10 minutos de dos
ramas de 10 cm en un litro de agua. Se toman tres tazas por día, una en la mañana en ayunas, una
al medio día, y una en la noche antes de la cena, se repite la dosis durante 9 días o hasta que el
paciente presente mejoría.
(Díaz Ledesma, 2005) Es utilizada como condimento para preparar platos tradicionales,
en el sector agrícola se utiliza para la protección de varios productos como la papa, del ataque de
plagas. Se lo prepara como fumigante orgánico vegetal contra el gorgojo de los Andes y como
antimoho, en el campo pecuario se utiliza para atenuar los ectoparásitos y endoparásitos de los
animales domésticos, además para curar sarna de equinos y camélidos, en Argentina se la utiliza
para fabricar y aromatizar licores y bebidas.
32
3.4. EXTRACCION DEL ACEITE ESENCIAL.
(Alessandrini Díaz, 2014) Varios son los mecanismos mediante los cuales se puede considerar
extraer el aceite como:
TIPO DE METODO PROCEDIMIENTO PRODUCTO EXTRAIDO
MÉTODOS DIRECTOS
Extrusión
Aceite esencial cítrico.
Exudación
Gomas, resinas, bálsamos.
DESTILACIÓN
Directa
Aceites esenciales y aguas
aromáticas
Arrastre por vapor.
Destilación.
Maceración
(liberación
enzimática de
agliconas en agua
33
caliente).
EXTRACCIÓN CON
SOLVENTES
Solventes volátiles. Infusiones y resinoides
alcohólicos.
Concretos y absolutos.
Solventes fijos: grasas y
aceites.
Absolutos y pomadas.
Absolutos y enflorados.
Figura 2: Mecanismos de extracción del aceite esencial.
Fuente: Alessandrini Díaz, M. (2014). Buenas prácticas con las plantas medicinales en comunidades de la Amazonía
ecuatoriana: una experiencia en la fusión del conocimiento ancestral y el conocimiento científico. . En M.
Alessandrini Díaz, Buenas prácticas con las plantas medicinales en comunidades de la Amazonía ecuatoriana: una
experiencia en la fusión del conocimiento ancestral y el conocimiento científico. (pág. 157). Ciudad de la Habana:
Editorial Universitaria .
34
3.5. DESTILACION POR ARRASTRE DE VAPOR
(Peredo & E., 2009), (Alessandrini Díaz, 2014) En la destilación por arrastre de vapor de
agua se lleva a cabo la vaporización selectiva del componente volátil de una mezcla formada por
éste y otros no volátiles. Lo anterior se logra por medio de la inyección de vapor de agua
directamente en el seno de la mezcla, denominándose a este ¨vapor de arrastre¨, pero en realidad
su función no es la de arrastrar el componente volátil, si no condensarse formando otra fase
inmiscible que cederá su calor latente a la mezcla a destilar para lograr su evaporación.
(Alessandrini Díaz, 2014) El agua tiene la capacidad que al hervir puede arrastrar todo
liquido no miscible con ella y esto es debido a que cuando la presión de vapor es igual a la
presión atmosférica, el sistema entra en ebullición y la presión parcial de cada vapor será inferior
a la presión externa, trayendo como consecuencia que cada liquido entre en ebullición a una
temperatura inferior. La condición más importante para que este tipo de destilación pueda ser
aplicado es que tanto el componente volátil como una impureza sean insolubles en agua, ya que
el producto destilado formara dos fases al condensarse, lo cual permitirá la separación del
producto y del agua finalmente.
35
Figura 3: Destilación por arrastre de vapor de agua en el laboratorio. Fuente: http://www.ugr.es/~quiored/qoamb/qoamb.htm.
36
3.6. MECANISMO DE ACCION DEL ACEITE ESENCIAL SOBRE LOS
MICROORGANISMOS
(Kalemba & Kunicka, 2003), (Cano, Bonilla, Roque, & Ruiz, 2008) Se reconoce que los
aceites esenciales dependen de sus propiedades lipofílicas o hidrofílicas. Los terpenoides pueden
servir como un ejemplo de agentes liposolubles, los cuales afectan la actividad de las enzimas
catalizadoras a nivel de la membrana, por ejemplo ciertos componentes del aceite esencial
pueden actuar como desacopladores, los cuales interfieren en la translocación de protones
sobre la membrana y subsecuentemente interrumpir la fosforilación del ADP.
37
3.7. CARACTERISTICAS FISICO QUIMICAS DEL ACEITE ESENCIAL DE
MINTHOSTACHYS MOLLIS (TIPO)
PARAMETRO UNIDAD PURO 50 % 25 % METODO
ORGANOLEPTICO
COLOR N/A Amarillento Amarillento Amarillento
OLOR N/A Característico Característico Característico
ASPECTO N/A Liquido
homogéneo
oleoso algo
viscoso
Liquido
homogéneo
oleoso algo
viscoso
Liquido
homogéneo
oleoso algo
viscoso
FISICO
PH 5,8 6,0 6,0 USP XXVI
DENSIDAD g/ml 0,66 0,80 0,79 USP XXVI
INDICE DE
REFRACCION
1,385 1,437 1,448 USP XXVI
Figura 4: Características físico químicas del aceite esencial de Minthostachys mollis (tipo).
Fuente: Iván Aigaje, Elaboración: F.B. Darwin Roldan.
38
3.8. MOLECULAS PRESENTES EN MINTHOSTACHYS MOLLIS
3.8.1. PULEGONA
Es un compuesto orgánico de origen natural obtenido a partir de los aceites esenciales de
una variedad de plantas, es un monoterpeno, liquido incoloro, aceitoso transparente y tiene un
olor agradable se utiliza en agentes aromatizantes, es toxico para las ratas si se consume en gran
cantidad, es un insecticida lo que explica la actividad contra plagas y parásitos.
3.8.2. MENTONA
(Cosmos, 2015) Es ampliamente utilizado como aroma en la fabricación de productos
cosméticos, farmacéuticos y de perfumería, es un compuesto orgánico perteneciente al grupo de
las cetonas y monoterpenos, está relacionado estructuralmente con el mentol.
3.8.3. CARVACROL
(Acevedo Amner, 2009) Se encuentra en menor cantidad dentro del aceite esencial pero
tiene la propiedad de ser un antioxidante.
39
3.8.4. CARVONA
(Alarcon, Barrera, & L., 2008) Tiene la propiedad de ser un agente fungicida, insecticida
y antibacterial, es una sustancia saborizante ampliamente utilizada en productos farmacéuticos,
goma de mascar, pasta dental, enjuagues bucales, alimentos y bebidas.
3.8.5. MENTOL
(Flores, Carballo, & Ramos, 2009) Uno de los principales usos es que actúa como
antiséptico, es utilizado también en la agricultura para prevenir plagas e históricamente ha sido
utilizado en la elaboración de perfumes y licores.
3.8.6. TIMOL
(Salas, 2012) Posee propiedades antibacteriana, antifúngica, antioxidantes, es un
componente abundante en los aceites esenciales a base de tomillo.
40
3.8.7. LINALOL
(Guerrero & Medalith, 2014) El linalol más conocido es el del cilantro es empleado como
condimento y como insecticida, lo que explica el uso del Tipo como condimento.
41
CAPITULO III
METODOLOGIA
4.1. TIPO DE ESTUDIO
Es experimental ya que se manipula diferentes variables independientes, ejerciendo el
máximo control y su metodología es normalmente controlada.
Es in vitro porque el estudio se realizara en medios de cultivo que sirven para el
desarrollo de la bacteria, y todo se manejara en un laboratorio.
Es prospectivo debido a que la recolección de los datos se realizara con forme ocurren y
avanza la experimentación.
Es transversal debido a que las variables van a ser observadas en un solo momento de
acuerdo a los objetivos de la investigación.
42
4.2. POBLACION Y MUESTRA
La población a trabajar es una cepa estándar de Porphyromonas Gingivalis.
El estudio se lo va a efectuar realizando 18 repeticiones en cajas Petri obtenidos mediante la
fórmula.
TAMAÑO DE LA MUESTRA, COMPARACIÓN DE DOS MEDIAS.
𝑛 =2(𝑍𝛼 + 𝑍𝛽)2 ∗ 𝑆2
𝑑2
𝑛 =2(1,960 + 1,645) ∗ 2,5921
3,61
𝑛 =67,374
3,61
𝑛 = 18,7
𝑔𝑟𝑢𝑝𝑜 𝑎 = 18,7
𝑔𝑟𝑢𝑝𝑜 𝑏 = 18,7
43
n= Tamaño de la muestra.
Z= Valores correspondientes al riesgo deseado.
S2= Varianza de la variable cuantitativa (grupo de control observado)
S2= 1,61
d= Valor mínimo de la diferencia que se desea detectar (datos cuantitativos).
Gran diferencia o pequeña diferencia entre los extractos.
Tabla 1: TAMAÑO DE LA MUESTRA, COMPARACIÓN DE DOS MEDIAS.
Z
test unilateral
test bilateral
0,200 0,842 1,282 0,150 1,036 1,440 0,100 1,282 1,645 0,050 1,645 1,960 dos colas
0,025 1,960 2,240 0,010 2,326 2,576
Nota. Fuente: Iván Aigaje, Elaboración: Ing. Molina, La potencia de una prueba estadística o el poder estadístico
es la probabilidad de que la hipótesis nula sea rechazada cuando la hipótesis alternativa es verdadera (es decir, la
probabilidad de no cometer un error del tipo II).
d= 1,90
44
Tabla 1: continuación.
Z 0,010 0,990 2,326
0,050 0,950 1,645 potencia 5%
0,100 0,900 1,282 0,150 0,850 1,036 0,200 0,800 0,842 0,250 0,750 0,674 0,300 0,700 0,524 0,350 0,650 0,385 0,400 0,600 0,253 0,450 0,550 0,126 0,500 0,500 0,000
45
4.3. CRITERIOS DE INCLUSION
Bacteria anaerobia estricta Gram negativa.
Bacteria que no ha estado expuesta a medicamentos o algún tipo de solución
antimicrobiana.
4.4. CRITERIOS DE EXCLUSION
Bacterias anaerobias que han estado expuestas a medicamentos.
4.5. VARIABLES
4.5.1. VARIABLE DEPENDIENTE
Porphyromonas Gingivalis.
Aceite esencial de Minthostachys mollis (Tipo) al 25, 50 y 100%.
4.5.2. VARIABLE INDEPENDIENTE
Efectividad antimicrobiana.
46
4.6. OPERACIONILIZACIÓN DE VARIABLES
VARIABLE DEFINICION CONCEPTUAL
DIMENSIONES INDICADORES ESCALA
CONCENTRACION DEL ACEITE ESENCIAL DE MINTHOSTACHYS MOLLIS (TIPO)
Se encuentra expresada en el porcentaje en el cual el aceite esencial de (Tipo) va a ser diluido.
Concentración al 100 % de aceite esencial de Minthostachys mollis (Tipo)
Concentración 100%
Concentración al 50% de aceite esencial de Minthostachys mollis (Tipo)
Concentración 50%
Concentración al 25% de aceite esencial de Minthostachys mollis (Tipo)
Concentración 25%
CULTIVO BACTERIANO
Condiciones óptimas mediante la cual nos van a permitir cultivar la cepa de Porphyromonas
Crecimiento de Porphyromonas Gingivalis en el medio de cultivo
Crecimiento positivo
47
Gingivalis y que le permita desarrollarse.
Crecimiento negativo
EFECTIVIDAD ANTIBACTERIANA DEL ACEITE ESENCIAL DE MINTHOSTACHYS MOLLIS (TIPO)
Efectividad mediante la cual tras aplicación del aceite esencial de (Tipo) al 25, 50 y 100% va a Repercutir en el desarrollo de Porphyromonas Gingivalis.
Cuantitativamente
Medición del diámetro de inhibición en mm
Cuantitativa Razón
Cualitativamente
Medición del diámetro de inhibición en mm y calificación según las pautas de Duraffourd, que nos da una medida cualitativa.
Cualitativa Ordinal
48
PROCEDIMIENTO
4.7. OBTECION DEL ACEITE DE MINTHOSTACHYS MOLLIS (TIPO)
4.7.1. RECOLECCION DE MINTHOSTACHYS MOLLIS (TIPO)
La recolección se la realizo al medio día, desde las once hasta las doce de la mañana, en
ese momento se ha eliminado ya el roció depositado sobre la planta y ha comenzado una
deshidratación antes de la humedad de la noche, la extracción del aceite se realizó a partir de
plantas frescas de (Tipo), con un máximo de almacenamiento de un día a temperatura ambiente,
se recolecto la planta en su totalidad, la recolección se la realizo en Pifo, Parroquia que se ubica
en el extremo nororiental del Distrito Metropolitano de Quito perteneciente a la provincia de
pichincha, con una altitud de 2770 m brinda el ambiente propicio para la proliferación en
abundancia de Minthostachys mollis ( Tipo).
Se recolecto aproximadamente 4 kg, los cuales fueron desinfectados con alcohol
antiséptico en spray de 72 G.L, para luego ser cortadas y seleccionamos las hojas, flores y
talluelos más aptos, obteniendo como resultado 600 gramos de materia prima, se las envolvió en
papel, luego fueron trasladadas a la Facultad de Ciencias Químicas de la Universidad Central del
Ecuador para su posterior procesamiento.
49
4.7.2. EXTRACCION DEL ACEITE ESENCIAL
La muestra se la sometió al proceso de extracción conocido como destilación por arrastre
con vapor de agua, teniendo en cuenta que la planta en estudio obtuvo un buen rendimiento en la
prueba piloto que lo promedio con un 1% de rendimiento.
(Alessandrini Díaz, 2014) El vapor provoca que los aceites esenciales se difundan desde
las membranas de la célula hacia afuera, los vapores de agua y aceite esencial que salen, se
enfrían hasta regresar a la fase liquida y se separan en un decantador.
Al final del proceso se obtuvieron 10 ml de aceite esencial de Minthostachys mollis (Tipo) puro.
4.7.3. DILUCION DEL ACEITE ESENCIAL
Una vez obtenido los 10ml de aceite esencial puro se procedió a la dilución del mismo en
la cual 2 ml fueron utilizados para hacer una dilución al 25% en una proporción de 1:4, 2 ml para
una dilución al 50% en una proporción 1:2 y los 6 ml restantes se los mantuvo puros y en más
cantidad por cualquier eventualidad. Para realizar las diluciones se utilizó Aceite mineral
estabilizado.
50
4.8. PREPARACION DEL INOCULO BACTERIANO
El inóculo se prepara de forma que presente la misma turbidez que la solución
McFarland, se diluye en agua destilada 1:10 con lo que quedara una suspensión bacteriana
aproximada de 107
Unidades Formadoras de Colonias por mililitro (U.F.C/ml), tenemos que
agitarla constantemente para luego compararla de una manera visual con una solución
McFarland de igual concentración.
4.9. PREPARACION DE LOS DISCOS DE PAPEL
Los discos tienen un tamaño de 5 a 7 mm y un espesor de 0,02 mm, la cantidad de
antimicrobiano selectivo debe ser justo, puesto que una sobre carga falsearía los resultados, en
este caso vamos a utilizar 20 µL (microlitros) en cada disco de papel los mismos que fueron
esterilizados en el autoclave y secados en la estufa.
Con una micropipeta se colocó 20 µL de aceite esencial de Minthostachys mollis (Tipo),
en cada uno de los discos, teniendo en cuenta que se realizó tres concentraciones del aceite al
25%, 50% y 100%.
51
4.10. SIEMBRA EN EL AGAR SANGRE
(Britania lab, 2010) El agar sangre es un medio de cultivo utilizado para el aislamiento de
cuantiosos microorganismos, al ser suplementado con sangre ovina, favorece al desarrollo de
microorganismos nutricionalmente exigentes y la clara visualización de reacciones de hemolisis.
La infusión de musculo de corazón y la peptona, otorgan al medio un alto valor nutritivo, El
agregado de 5-10 % de sangre ovina desfibrinada estéril (Britas-heep) promueve el crecimiento
de bacterias exigentes en sus requerimientos nutricionales.
4.11. CEPA BACTERIANA
El estudio se lo realizo con una cepa de Porphyromonas gingivalis ATCC 33277, el
ATCC nos indica que es un material biológico de referencia certificado cuyo significado en
inglés es American Type Culture Collection. La cual se la reactivo para ser una cepa viable.
En el duopack encontramos un tubo con la cepa liofilizada y un líquido, que al momento
de romper estas dos se mezclan y ya tenemos la cepa diluida, este contenido lo transferimos a
T.S.B. de 10 ml que es el Agar Tripticasa de Soya que nos permite un crecimiento vigoroso de
los microorganismos, es una base nutritiva y de gran variedad de suplementos, colocamos aceite
52
mineral para hacer anaerobiosis, por ultimo trasladamos a la incubadora a 35 grados centígrados
por 7 días.
4.12. PRUEBAS DE SUCEPTIBILIDAD BACTERIANA
Una vez que tenemos la caja Petri con el agar sangre, realizamos un hisopado con el
inoculo bacteriano, que consiste en tomar la caja y hacer estrías en la superficie del agar en las
tres direcciones y alrededor, lo que nos permite que la bacteria crezca en toda la extensión de la
caja.
Realizado esto dejamos secar las placas por 5 minutos y luego con una pinza estéril se
colocan los discos de papel filtro impregnado con 20 µL del aceite esencial a las diferentes
concentraciones.
Se deja reposar las placas por 15 minutos a temperatura ambiente para que el disco
absorba agua del medio de cultivo y así permita difusión radial del antimicrobiano para luego
trasladar a una jarra de incubación de anaerobios por 48 horas y a 37 grados centígrados.
Después de dos días se procedió a la lectura de las medidas de los halos de inhibición.
53
4.13. DETERMINACION DEL EFECTO ANTIBACTERIANO
Se la realizo tanto cuantitativamente como cualitativamente, de manera cuantitativa
utilizando un calibrador para método de ensayo de la susceptibilidad de Kirby Bauer se procedio
a la medición de cada uno de los halos de inhibición de todas las cajas Petri.
Para realizar la medición de manera cualitativa nos basamos en las tablas de actividad
antimicrobiana sustentada en porcentajes, la cual establece el diámetro del halo de inhibición de
crecimiento bacteriano y lo encasilla dentro de los parámetros determinados como las pautas de
Duraffourd que nos indica:
Para un diámetro inferior a 8 mm, se le otorga la característica de Nula (-).
Para un diámetro comprendido entre 8 a 14 mm, se lo define como sensibilidad límite
(sensible = +).
Un diámetro entre 14 y 20 mm, se lo encasilla como Medio (muy sensible =++)
Finalmente para un diámetro superior a 20 mm el microorganismo es sumamente sensible
(+++).
54
CAPITULO IV
5.1. RESULTADOS
INTRODUCCIÓN:
Inicialmente se verifica que las muestras tomadas provienen de una población con distribución
Normal, esto se realiza con las pruebas de Kolmogorov - Smirnov o con la prueba de Shapiro -
Wilk (menor a 20 datos), luego a demostrar:
Ho: La muestra proviene de una población con distribución Normal
Ha: La muestra NO proviene de una población con distribución Normal
Pruebas no paramétricas: Pruebas de Normalidad
Tabla 2: PRUEBAS NO PARAMÉTRICAS: PRUEBAS DE NORMALIDAD.
PRUEBAS DE NORMALIDAD
Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk
Estadístico gl Sig. Estadístico gl Sig.
ACEITE_25 ,406 18 0,000 ,662 18 0,000
ACEITE_50 ,245 18 0,006 ,802 18 0,002
ACEITE_100 ,275 18 0,001 ,869 18 0,017
Nota. Fuente: Iván Aigaje, Elaboración: Ing. Molina, De la prueba de normalidad, en todas las muestras se tiene
valores del nivel de significación (sig) menores que 0,05 (95% de confiabilidad) luego las mismas no provienen de
poblaciones con distribución Normal, entonces se procede a realizar pruebas de hipótesis no paramétricas Kruskal
Wallis y Mann Whitney. Dentro de la tabla Sig: nos indica el nivel crítico de significación y gl: los grados de
libertad.
55
Se realizó la prueba no paramétrica: Kruskal Wallis teniendo en cuenta que; Ho: Las medias de
las dos muestras son similares y Ha: Las medias de las dos muestras NO son similares
Tabla 3: PRUEBA NO PARAMÉTRICA: KRUSKAL WALLIS.
Nota. Fuente: Iván Aigaje, Elaboración: Ing. Molina, De la prueba de Kruskal Wallis Sig. Asintótica = 0,00 es
menor que 0,05 (95% del nivel de significación) luego se rechaza Ho, esto es alguna de las medias no son similares
a las demás, se compara dos a dos a ver cuáles son similares.
56
Tabla 4: COMPARACIONES POR PAREJAS DE CONCENTRACIONES.
Nota. Fuente: Iván Aigaje, Elaboración: Ing. Molina, De la prueba dos a dos se observa que ninguna es similar a
las otras dos.
El valor más alto es la concentración al 100%, le sigue la concentración al 25% y por último la concentración al
50%
Comparando con el agua, Clorhexidina y ampicilina.
57
En este cuadro se realiza la Prueba no paramétrica: Kruskal Wallis donde Ho: Las medias de las
dos muestras son similares y Ha: Las medias de las dos muestras NO son similares
Tabla 5: PRUEBA NO PARAMÉTRICA: KRUSKAL WALLIS.
Nota. Fuente: Iván Aigaje, Elaboración: Ing. Molina, De la prueba de Kruskal Wallis Sig. Asintótica = 0,00 es
menor que 0,05 (95% del nivel de significación) luego se rechaza Ho, esto es alguna de las medias no son similares
a las demás, se compara dos a dos a ver cuáles son similares.
58
Tabla 6: COMPARACIONES POR PAREJAS DE CONCENTRACIONES.
Nota. Fuente: Iván Aigaje, Elaboración: Ing. Molina, de la prueba dos a dos se observa que la concentración al
50% es inferior a la Clorhexidina y ampicilina, el 25% es inferior a la ampicilina
59
Tabla 6:
Continuación
60
Tabla7: EFECTIVIDAD ANTIBACTERIANA SEGÚN LA ESCALA DE DURAFFOURD.
Nota. Fuente: Iván Aigaje, Elaboración: Autor, Muestra la efectividad antibacteriana del aceite esencial de
Minthostachys mollis (Tipo) en sus diferentes concentraciones, encasillándose dentro de una escala sensible y muy
sensible.
SUSTANCIA A APLICAR
HALO DE INHIBICION
TOTAL
NULA (-)
SENSIBLE (+) MUY
SENSIBLE (++) SUMAMENTE
SENSIBLE (+++)
ACEITE ESENCIAL DE TIPO AL 25%
0 (0%)
18 (100%)
0 (0%)
0 (0%)
18
ACEITE ESENCIAL DE TIPO AL 50%
0 (0%)
18 (100%)
0 (0%)
0 (0%)
18
ACEITE ESENCIAL DE TIPO AL 100%
0 (0%)
6 (33,33)
12 (66,66)
0 (0%)
18
CONTROL NEGATIVO
AGUA
0 (0%)
0 (0%)
0 (0%)
0 (0%)
0
CONTROL POSITIVO
CLORHEXIDINA 0,12
0 (0%)
0 (0%)
3
0 (0%)
3
AMPICILINA 10 ug
0 (0%) 0 (0%) 0 (0%) 3 3
TOTAL 0 42 15 3 60
61
Figura 5: Nos muestra la efectividad antibacteriana según la escala de Duraffourd, teniendo en cuenta el total de
repeticiones y las sustancias empleadas.
Fuente: Iván Aigaje.
Mejores resultados cualitativos se observó con el aceite esencial de Minthostachys mollis
(Tipo) al 100% o aceite puro encasillándose en un rango de sensible y muy sensible, seguido por
la concentración al 25% y al final la concentración al 50% que se encuentran en el rango de
sensibles. Mientras que la Clorhexidina al 0,12% estuvo en un rango de muy sensible y la
Ampicilina de 10 ug se mantuvo en un rango de sumamente sensible.
02468
101214161820
NU
MER
O D
E R
EPET
ICIO
NN
ES
EFECTIVIDAD ANTIBACTERIANA SEGÚN LA ESCALA DE DURAFFOURD.
SENSIBLE (+)
MUY SENSIBLE (++)
SUMAMENTE SENSIBLE (+++)
62
5.2. DISCUSIÓN
Fueron Cano, Bonilla, Roque & Ruiz en el 2008 uno de los primeros en evaluar la
actividad antimicrobiana que poseen los aceites esenciales, en su estudio ¨Actividad
antimicótica in vitro y metabolitos del aceite esencial de las hojas de Minthostachys mollis
(Muña) ¨. Se observó un alto efecto antimicótico frente a cepas de Cándida albicans en las
concentraciones al 50 y 100%, lo que difiere un poco con nuestra investigación ya que
obtuvimos mayor eficacia con la concentración al 25 y 100%.
Mientras (Azaña Espinoza, 2010) en su investigación ¨Determinación de la actividad
antibacteriana in vitro de Minthostachys mollis griseb (muña) frente a bacterias orales de
importancia estomatológica¨ obtuvo resultados satisfactorios los mismos que se comparten
con este estudio, puesto que la actividad antibacteriana fue mayor en una concentración al
100% o aceite puro, que en sus otras concentraciones.
(Donato, 2012) Obtuvo resultados exitosos al hallar la Concentración Inhibitoria
Mínima, después del conteo de Unidades Formadoras de Colonias (UFC´s) trabajando sobre
Streptococcus mutans, se concluyó que es en una dilución al 50%, sabiendo que la CIM es la
concentración más baja de un antimicrobiano que inhibe el crecimiento de un
microorganismo después de su incubación, en el estudio realizado la concentración más baja
que se utilizo fue al 25% obteniendo resultados favorables.
63
(Guerrero & Medalith, 2014) Demuestra que tiene un mayor efecto inhibitorio el
aceite al 100% sobre la bacteria con un halo promedio de 10.79 mm, comparado con las
diluciones al 50 % y 25 %. En su estudio ¨Efecto antibacteriano in vitro del aceite esencial de
Minthostachys mollis (muña) en Streptococcus mutans¨, concordando con esta investigación
ya que el aceite al 100% también obtuvo un mejor actividad con un halo promedio de 13,6
mm, seguida por la concentración al 25% con un halo de 11,2 mm y el aceite al 50% con un
halo promedio de 9,6 mm.
En relación a los resultados podemos decir que la efectividad del aceite está mediada
por la calidad de la planta, la época y el lugar de recolección, el manejo de la misma y el
proceso de extracción. El presente trabajo investigativo tuvo como fin demostrar la
efectividad antimicrobiana del aceite esencial de Minthostachys mollis (tipo) en sus
diferentes concentraciones al 25, 50 y 100 % frente a Porphyromonas gingivalis, sabiendo
que esta es una de las bacterias más comunes dentro de las periodontopatias y está en
segundo lugar de las patologías orales solo después de la caries. Se trató de demostrar la
riqueza que existe en la flora ecuatoriana y sus innumerables formas de aprovecharla,
obteniendo resultados positivos.
64
CAPITULO V
6.1. CONCLUSIONES
Se concluyó que los aceites esenciales poseen actividad antibacteriana
independientemente de sus concentraciones.
Se determinó que la concentración que posee una mejor efectividad antimicrobiana es la
concentración al 100% o aceite puro de Minthostachys mollis (Tipo) con un halo
promedio de 13,6 mm.
Se observó que el aceite esencial en dilución al 25% obtuvo un halo promedio de 11,2
mm es decir que posee mejor efectividad que la dilución al 50% ya que esta tuvo un halo
promedio de 9,6 mm.
Tanto la clorhexidina al 0,12 y la ampicilina de 10 ug, presentan una mejor actividad
antimicrobiana que el aceite esencial de Minthostachys mollis (Tipo), tomando en cuenta
que son productos sintéticos elaborados con este fin, con investigaciones de años de
precedencia.
65
6.2. RECOMENDACIONES
Comparar la efectividad antimicrobiana del aceite esencial de Minthostachys mollis (tipo)
con otros extractos, aceites, bálsamos, resinas, infusiones, etc., de plantas de interés
estomatológico.
Plantear nuevas investigaciones partiendo de la actividad antimicrobiana que posee el
aceite esencial de Minthostachys mollis (tipo) al 25%, 50% y 100%, sobre la amplia flora
bacteriana oral.
Establecer una base de datos sobre las plantas que poseen una actividad antimicrobiana
de interés odontológico, que permita a futuras generaciones poseer un conocimiento más
amplio sobre estos temas.
66
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Mexico D.F.: Instituto Politécnico Nacional.
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ANEXOS
ANEXOS
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Figura 6: Resultados del laboratorio de química farmacéutica.
Fuente: Iván Aigaje, Elaboración: B.F. Darwin Roldan.
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Figura 7: Efectividad antimicrobiana del aceite esencial de Minthostachys mollis (tipo) en sus diferentes
concentraciones.
Fuente: Iván Aigaje, Elaboración: Dra. Rachide Acosta.
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Figura 7: continuación.
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Figura 8: Certificado del laboratorio de análisis clínico y bacteriológico.
Fuente: Iván Aigaje, Elaboración: Dra. Rachide Acosta.
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Figura 9: Lugar de recolección en la parroquia de Pifo del distrito metropolitano de Quito.
Fuente: Iván Aigaje.
Figura 10: Planta a recolectar Minthostachys mollis (tipo).
Fuente: Iván Aigaje.
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OBTENCIÓN DEL ACEITE ESENCIAL DE MINTHOSTACHYS MOLLIS (TIPO).
Figura 11: Agitación continua de la planta con agua.
FUENTE: Iván Aigaje.
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OBTENCIÓN DEL ACEITE ESENCIAL DE MINTHOSTACHYS MOLLIS (TIPO).
Figura 12: Destilación por arrastre de vapor de agua.
Fuente: Iván Aigaje.
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OBTENCIÓN DEL ACEITE ESENCIAL DE MINTHOSTACHYS MOLLIS (TIPO).
Figura 13: Embudos de separación con solvente (hexano).
Fuente: Ivàn Aigaje.
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OBTENCIÓN DEL ACEITE ESENCIAL DE MINTHOSTACHYS MOLLIS (TIPO).
Figura 14: Destilación, en esta fase se evapora el hexano.
Fuente: Ivàn Aigaje.
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OBTENCIÓN DEL ACEITE ESENCIAL DE MINTHOSTACHYS MOLLIS (TIPO).
Figura 15: Aceite esencial de Minthostachys mollis (tipo) a sus diferentes concentraciones.
Fuente: Ivàn Aigaje.
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PREPARACIÓN DEL INOCULO BACTERIANO.
Figura 16: Recolección de Porphyromonas gingivalis para la preparación del inoculo bacteriano.
Fuente: Ivàn Aigaje.
Figura 17: Dilución en agua destilada de P. gingivalis para la preparación del inoculo bacteriano.
Fuente: Ivàn Aigaje.
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PREPARACIÓN DEL INOCULO BACTERIANO.
Figura 18: Comparación del inoculo bacteriano de manera visual con una solución MCfarland de igual
concentración.
Fuente: Ivàn Aigaje.
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PREPARACIÓN DE LOS DISCOS DE PAPEL.
Figura 19: Colocación del antimicrobiano, aceite esencial de minthostachys mollis (tipo) puro, al 25% y 50%,
en los discos de papel.
Fuente: Ivàn Aigaje.
Figura 20: Discos de papel embebidos a las diferentes concentraciones de aceite esencial.
Fuente: Ivàn Aigaje.
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PREPARACIÓN DE LOS DISCOS DE PAPEL.
Figura 21: Discos de papel dos de los cuales están embebimos con agua como control negativo y dos con
clorhexidina 0,12% como control positivo.
Fuente: Ivàn Aigaje.
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PREPARACIÓN DE LAS CAJAS DE PETRI.
Figura 22: Hisopado del inoculo bacteriano en todas las cajas Petri.
Fuente: Ivàn Aigaje.
Figura 23: Colocación de los discos de papel embebidos con el aceite esencial de tipo en las cajas de Petri.
Fuente: Ivàn Aigaje.
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PREPARACIÓN DE LAS CAJAS DE PETRI.
Figura 24: A de más de la clorhexidina al 12% como control positivo, se usó discos de 10 ug de ampicilina.
Fuente: Ivàn Aigaje.
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INCUBACION DE LOS CULTIVOS BACTERIANOS
Figura 25: Cajas de Petri colocadas en una jarra de incubación de anaerobios.
Fuente: Ivàn Aigaje
Figura 26: Se coloca en la jarra una vela para consumir el oxígeno dentro de esta y que se vuelva un medio
anaerobio.
Fuente: Ivàn Aigaje.
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INCUBACION DE LOS CULTIVOS BACTERIANOS
Figura 27: Colocación de la jarra de incubación de anaerobios en la incubadora a 37 grados centígrados.
Fuente: Ivàn Aigaje.
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HALOS DE INHIBICIO DE LOS DISCOS CON ACEITE ESENCIAL DE
MINTHOSTACHYS MOLLIS (TIPO) AL 25%, 50% Y 100%
Figura 28: En la caja de Petri # 2 podemos observar la inhibición de la bacteria tras 48 horas de incubación.
Fuente: Ivàn Aigaje.
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HALOS DE INHIBICIO DE LOS DISCOS CON ACEITE ESENCIAL DE
MINTHOSTACHYS MOLLIS (TIPO) AL 25%, 50% Y 100%
Figura 29: En la caja de Petri # 9 podemos observar la inhibición de la bacteria tras 48 horas de incubación.
Fuente: Ivàn Aigaje.
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HALOS DE INHIBICIO DE LOS DISCOS CON ACEITE ESENCIAL DE
MINTHOSTACHYS MOLLIS (TIPO) AL 25%, 50% Y 100%
Figura 30: Medición de los halos de inhibición con un calibrador para método de ensayo de la susceptibilidad de
Kirby Bauer.
Fuente: Ivàn Aigaje.
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HALOS DE INHIBICIO DE LOS DISCOS CON ACEITE ESENCIAL DE
MINTHOSTACHYS MOLLIS (TIPO) AL 25%, 50% Y 100%
Figura 31: Halos de inhibición del control negativo agua y del control positivo clorhexidina 0,12%.
Fuente: Ivàn Aigaje.
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HALOS DE INHIBICIO DE LOS DISCOS CON ACEITE ESENCIAL DE
MINTHOSTACHYS MOLLIS (TIPO) AL 25%, 50% Y 100%
Figura 32: Halos de inhibición del control positivo alternativo disco de Ampicilina de 10 ug.
Fuente: Ivàn Aigaje.
