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Amplificação do FLO10
1- Lambda Hind III2- FLO10 amplificado da linhagem laboratorial W3031a 3- FLO10 amplificado da linhagem industrial GA001 4- FLO10 amplificado da linhagem industrial FleischmanFLO10 amplificado da linhagem industrial Pedra2
COM GLICOSE SEM GLICOSE
UniformeDuas fases
(Fase superior ainda turva)
Fleischman Selvagem Fleischman Transformada
Uniforme Duas fases
Fleischman Selvagem Fleischman Transformada
pYADE4
ADH2 FLO5 MOX-BB
YEp-FLO5 pUC-BB
ClaISmaI(SphI) ClaI SacI HincII
pYADE4-FLO5
(SphI)/SmaI ClaI SmaI/HincII
SacI
SacI
YEp352-MOXBB-FLO5
YEp352
NI FLO5 MOXBB-FLO5
A. B. C.YEp352
NI FLO5 MOXBB-FLO5
12 14 16 18 20 22pYADE4-FLO5 (C)
-0,5
0
0,5
1
1,5
2
2,5
0 10 20 30
Time (h)
glu
cose
co
nce
ntr
atio
n
(%)
YEp352 YEP352-FLO1
pYADE4-FLO1 YEP352-FLO1-BB
YEp352-BB-FLO5 (D)12 14 16 18 20 22
YEp 352 (A) YEp352-FLO5 (B) 12 14 16 18 20 22 12 14 16 18 20 22
Determination of glucose concentration (E)
pYADE4 pGEM-T-FLO10
FLO5
Sal IBamH I
pYADE4-FLO10
BamH I Sal I
ADH2
BamH I Sal I
12 14 16 18 20 22pYADE4-FLO5 (C)
-0,5
0
0,5
1
1,5
2
2,5
0 10 20 30
Tempo (h)
Co
nce
ntr
ação
de
glic
ose
(%
)
YEp352 YEP352-FLO1
pYADE4-FLO1 YEP352-FLO1-BB
YEp352-BB-FLO5 (D)12 14 16 18 20 22
YEp 352 (A) YEp352-FLO5 (B) 12 14 16 18 20 22 12 14 16 18 20 22
Determinação da concentração de glicose (E)
1° estágio 2° estágio 3° estágio 4° estágio
TRATAMENTO
MOSTO
ESTÉRIL
INÍCIO DE PRODUÇÃO Vinho para a destilaria
300 l50 l 12.000 l 150.000 l
400.000 litros por dorna
* * * * * * *
Pré inóculoS. cerevisiae
Centifugação
Crossing
pYADE4-FLO5
ADH2CAN1 CAN1FLO5
ADH2 FLO5
Gene CAN1 no cromossomo
PCR
Construção se integra no cromossomoADH2CAN1 FLO5 CAN1