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AB SCIEX 临床应用方案 朱怀恩 应用专家
AB SCIEX 临床应用方案
朱怀恩
应用专家
2 © 2011 AB SCIEX
主要内容
海外临床客户群
一些成熟的临床检验项目
新生儿疾病筛查
维生素D
免疫抑制剂
抗逆转录病毒药物
痕量睾丸酮测定
痕量雌激素测定
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其他热点
1, 25 - dihydroxy Vitamin D and 24, 25 - dihydroxy Vitamin D
Free T3/T4 and reverse T3 (甲状腺激素)
Nicotine and metabolites 尼古丁及代谢产物
Histamines 组胺
Thyroglobulin 甲状腺球蛋白
Beta amyloid 淀粉样蛋白
血液中酒精代谢物
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海外临床客户群
4
Home
药学实验室
家庭
门诊化验室
医院
中心实验室
基准
实验室
测试场所 复杂的检测
拥有丰富经验的实验室
简单的检测
无需丰富的实验室经验
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十年间仪器数量变化 来自Stefan K.G. Grebe
仪器平台 1998年 2009年
液相色谱 >400 <100
气相色谱-质谱 >50 28
液相色谱-质谱 0 58
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国内市场状态 仅供参考
检测手段
酶联免疫法、荧光法、液相色谱法为主；
检测项目
血药检测；
新生儿氨基酸、酰基肉碱代谢异常；
……
地区差异
南强北弱；
浙江、广东；
发展趋势
医院——第三方实验室；
区域医疗检验中心（合资、民营）。
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一些成熟的临床检验项目
先天性代谢异常 Inborn Errors of
Metabolism
疾病生物标记物Biomarker of
Diseases
临床毒物学 Clinical Toxicology
治疗药物监测Therapeutic Drug
Monitoring
新生儿疾病筛查New Born Screening
维生素D2/D3与类固醇 Vit D2/D3 and Steroid
Panel
止痛药 Pain Panel Drugs
免疫抑制剂 Immunosuppressant
常见氨基酸分析 Amino Acid Analysis
内分泌紊乱 Measuring Endocrine
Analytes
苯二氮平类Benzodiazepines
抗逆转录病毒药物 Antiretroviral Drugs
滥用药物筛查 Drugs of Abuse
Screening
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干血点法分析血样流程
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经典法分析血样流程
50%乙腈水
直接提取
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三重四极杆质谱能做什么 目标化合物的定性、定量
样品处理
测试分析
结果报告
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主要内容
海外临床客户群
一些成熟的临床检验项目
新生儿疾病筛查
维生素D
免疫抑制剂
抗逆转录病毒药物
痕量睾丸酮测定
痕量雌激素测定
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新生儿疾病筛查
新生儿疾病筛查（neonatal screening）
是指医疗保健机构在新生儿群体中，用快速、简便、敏感的检验方法，对一些危及儿童生命、危害儿童生长发育、导致儿童智能障碍的一些先天性疾病、遗传性疾病进行群体筛查，从而使患儿在临床上未出现疾病表现，而其体内生化、激素水平已有明显变化时就做出早期诊断，结合有效治疗，避免患儿重要脏器出现不可逆的损害，保障儿童正常的体格发育和智能发育的系统服务。
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新生儿遗传性代谢缺陷研究 总结
根据40年来各国经验，只要能够建立一个完整有效的筛查系统，对个人、家庭和社会都可收到极好的效果，有显著的经济效益。
以苯丙酮尿症为例，在国际上，日本人的PKU发病率最低，为1：80500，其成本效益比达1:2.5。根据计算，即使发病率为1:140000，其成本效益比仍达到1:1.7。中国的PKU发病率约为1:11000,经济效益应该更为可观
1994年日本总结了开展筛查17年的费用，发现若不进行筛查，治疗和护理患儿的费用将是用于全民筛查费用的4.2倍。
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同型胱氨酸尿症 血、尿中同型胱氨酸含量偏高
同型胱氨酸
蛋氨酸
胱硫醚
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新生儿筛查 部分氨基酸代谢病 苯丙氨酸血症 Phe Phe/Tyr Tyr
枫糖尿症 Leu Val
同型胱氨酸尿症 Hcy
高甲硫氨酸血症 Met
酪氨酸血症 Try
高脯氨酸血症 Pro
低瓜氨酸血症 Cit
氨酸氨甲酰转移酶缺乏 Cit Orn 尿乳清酸
瓜氨酸血症 Cit
Citrin缺陷病 Cit,Arg,Met,Orn
高鸟氨酸血症 Orn
精氨酸血症 Arg
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新生儿筛查 其他氨基酸和脂肪代谢病
苯丙酮尿症
酪氨酸代谢紊乱
高胱氨酸尿
瓜氨酸血症
超苯丙氨酸血症
精氨酸酶缺乏症
精氨琥铂酸尿症
超甲硫氨酸血症
中链槭糖尿症 (MCAD)
短链槭糖尿症(SCAD)
长链槭糖尿症(LCAD)
超长链槭糖尿症(VLCAD)
戊二酸血症
Glutaric Acidemia
3-Hydroxy-3-methylglutaryl-CoA-lyase Deficiency
ß-Ketothiolase Deficiency
异戊酸血症
甲基丙二酸血症
丙酸血症
Multiple Carboxylase Deficiency
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LC-MS/MS新生儿遗传性代谢缺陷筛查 工作流程
提取 取样 上清液吹干
衍生 吹干，复溶
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LC-MS/MS新生儿筛查 庞杂的数据需要一种简单可行的数据处理手段
原始数据 结果报告
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主要内容
海外临床客户群
一些成熟的临床检验项目
新生儿疾病筛查
维生素D
免疫抑制剂
抗逆转录病毒药物
痕量睾丸酮测定
痕量雌激素测定
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LC-MS/MS测定维生素D
维生素D是骨骼健康的重要指标
最近的研究表明维生素D缺乏可能和其他一些身体状况相关：
骨质疏松
几种类型的癌症
自身免疫性疾病
心脏病
糖尿病
and more…
由于公众增加关注维生素D缺乏对于身体健康的影响，在过去的1-2年内，样品数量检测大大增加。
目标分析物通常 是25-OH-Vit D2 and 25-OH-Vit D3
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LC-MS/MS测定维生素D
标准曲线
（血浆样品）
25-OH
Vitamin D3
25-OH
Vitamin D2
Control
Level I
22.4 ng/mL
(55.9 nmol/L)
16.5 ng/mL
(40 nmol/L)
Calibrant 61.3 ng/mL
(153 nmol/L)
42.7 ng/mL
(103 nmol/L)
Control
Level II
92.5 ng/mL
(231 nmol/L)
66 ng/mL
(160 nmol/L)
样品处理 取200uL血浆或血清；
加入200uL内标，混匀，取上清液；
加入1mL有机溶剂，高速离心；
取上清液，氮气吹干；
50%甲醇水溶液复溶，高速离心；
取上清液，进样。
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LC-MS/MS测定维生素D 具有方法豁免权的脱水母离子
标准曲线 标准曲线
Control Level I 数据
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主要内容
海外临床客户群
一些成熟的临床检验项目
新生儿疾病筛查
维生素D
免疫抑制剂
抗逆转录病毒药物
痕量睾丸酮测定
痕量雌激素测定
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免疫抑制剂测定 示例数据
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免疫抑制剂测定 器官移植患者临床用药窗口对重现性的要求
1500.00
1700.00
1900.00
2100.00
2300.00
2500.00
2700.00
2900.00
3100.00
1 2 3 4 5 6
优异的重现性，是用药安全性的保证
限量值
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免疫抑制剂测定 方法小结
仪器条件
API 4000™ 或 4000 QTRAP质谱
Shimadzu Prominence 20A 或 Agilent 1200
方法信息
全血样品，仅做蛋白沉淀
4.5min分析时间
Chromsystems 6PLUS1® Whole Blood Multilevel Calibrator Set and controls from the Chromsystems MassCheck® Whole Blood Controls Levels I, II, III and IV
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主要内容
海外临床客户群
一些成熟的临床检验项目
新生儿疾病筛查
维生素D
免疫抑制剂
抗逆转录病毒药物
痕量睾丸酮测定
痕量雌激素测定
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抗逆转录病毒药物 示例数据
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抗逆转录病毒药物 方法小结
项目特点
联合用药——鸡尾酒疗法
仪器条件
API 3200™ 或 3200 QTRAP质谱
Shimadzu Prominence 20A 或 Agilent 1200
方法信息
全血样品，仅做蛋白沉淀
7min分析时间
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主要内容
海外临床客户群
一些成熟的临床检验项目
新生儿疾病筛查
维生素D
免疫抑制剂
抗逆转录病毒药物
痕量睾丸酮测定
痕量雌激素测定
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痕量睾酮的意义 不同人群参考值
Population Low (total) High (total) LOQ (pg/mL)
ULQ (pg/mL)
Prepubertal Children (0.5- 9 year) 20 pg/mL 500 pg/mL 10-30 pg/mL 5000 pg/mL
Female (Adult) 150 pg/mL 700 pg/mL 10-30 pg/mL 5000 pg/mL
Male (Adult) 2.60 ng/mL 10 ng/mL - -
TIETZ Textbook of Clinical Chemistry and Molecular Diagnostics; 4th Edition
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痕量睾酮测定
仪器条件
AB SCIEX Triple Quad™ 5500 质谱
Shimadzu Prominence 20AD
方法信息
200 µL sample volume required
One step liquid-liquid extraction
Clinically relevant dynamic range of 20-5000 pg/mL
5.5 minute total run time
同时测定妇女和婴幼儿、儿童
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痕量睾酮测定 数据来源——美国CDC睾酮测试标准化项目
R2 = 0.998
0
2
4
6
8
10
0 2 4 6 8 10
CDC Standard Results (ng/mL)
AB
Sc
iex
iM
eth
od
Re
su
lts
(n
g/m
L)
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痕量睾酮测定 数据小结
运行时间 LLOQ 线性范围 重现性 准确度
日常测试 3 min 1 ng/mL 1-400 ng/mL ≤8% ±5%
痕量测试 5.5 min 10 pg/mL 10-5000
pg/mL ≤10% ±5%
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主要内容
海外临床客户群
一些成熟的临床检验项目
新生儿疾病筛查
维生素D
免疫抑制剂
抗逆转录病毒药物
痕量睾丸酮测定
痕量雌激素测定
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雌激素类的意义
雌激素是一种女性激素相关的整类 ：Estrone 雌酮（E1） ，Estradiol 雌二醇（E2），Estriol 雌三醇（E3）；
雌酮（E1）广泛存在整个身体。这是唯一在妇女绝经后依然能存在的雌激素；
雌二醇（E2）是育龄妇女的主要的性激素，是维持女性特征和功能的雌激素。 另外，雌二醇对于妇女的骨骼健康是非常重要的激素。雌二醇的失调会引起相关妇科疾病，甚至相关女性癌症；
雌三醇（E3）的是由胎盘产生，只有在怀孕期间据有重要的意义。
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雌激素测定 不同人群参考值
Population Estrone (E1) Estradiol (E2) Estriol(E3)
(Pregnancy)
Adult Male 10-65 pg/mL 10-50 pg/mL < 2ng/mL
Premenopausal Female 15-250 pg/mL 20-750 pg/mL
(Pregnancy) 30-570 ng/mL
Postmenopausal Female 15-55 pg/mL <10 pg/mL
(non-pregnancy) <2 ng/mL
Target LOQ 5 pg/mL 5 pg/mL < 10 pg/mL
ULQ 500- 1000 pg/mL 500- 1000 pg/mL 2000 pg/mL
TIETZ Textbook of Clinical Chemistry and Molecular Diagnostics; 4th Edition
Estradiol: LC-MSMS test: 300K- 500K samples in US for one year Reference: Steroids 73 (2008) 1318-1321 ; Steroids 73 (2008) 1333-1338
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雌酮（E1）、雌二醇（E2）测定
仪器条件
API 5000™ 或 AB SCIEX Triple Quad™ 5500 质谱
Shimadzu Prominence 20A 或 Agilent 1200
方法信息
500 µL血清样品
液-液萃取和非衍生化方法
与临床相关的定量范围，5-500 pg/mL
6min 分析时间
同时测定，婴幼儿、儿童和不同年龄的成年人
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其他热点
1, 25 - dihydroxy Vitamin D and 24, 25 - dihydroxy Vitamin D
Free T3/T4 and reverse T3 (甲状腺激素)
Nicotine and metabolites 尼古丁及代谢产物
Histamines 组胺
Thyroglobulin 甲状腺球蛋白
Beta amyloid 淀粉样蛋白
血液中酒精代谢物
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法医毒物学筛查
Fingerprint Chemical Fingerprint
Parent
ion
Fragment ions
NO CH3
CH3
44 © 2011 AB SCIEX
总结 LC-MS/MS的特点
成熟的检测项目
快速
可扩展性
准确性
需要样品前处理
通过软件辅助，简化数据处理过程
前期投入较大
谢谢
