Universidad Nacional Autnoma de Mxico Facultad de estudios superiores Zaragoza
Universidad Nacional Autnoma de Mxico Facultad de estudios superiores ZaragozaMICROBIOLOGA GENERAL II
VIROLOGA: ESTRUCTURAS DEL EMBRIN DE POLLO Y SUS VAS DE INOCULACIN
Cruz Delgado Dolores YatzilFranco Prez Hugo Daniel Jess Grupo: 2752
Exmenes para el diagnstico de las infecciones vricas
*Microscopa ptica*Deteccin de acido nucleicos*Deteccin de antgenos *Microscopa electrnica*Diagnstico serolgico
REACCIN EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)
La PCR consiste en una reaccin enzimtica mediante la cual se amplifica selectivamente una secuencia especfica de ADN en relacin a la de otras secuencias presentes en la misma mezcla de reaccin
1 Desnaturalizacin del ADN doble cadena2 Acoplamiento de los cebadores (primers) sintticos2 Elongacin del cebador usando una ADN polimerasa.
INMUNOFLUORESCENCIA
Esta tcnica, cualitativa, puede ser utilizada para detectar antgenos virales presentes en clulas infectadas o para detectar anticuerpos generados contra antgenos virales. En el primer caso es necesario enfrentar clulas infectadas a anticuerpos especficos o antisueros generados contra un determinado virus. En el segundo caso, el suero problema se enfrenta a clulas infectadas con un virus conocido.
ELISA (Enzime Linked Immuno Sorbent Assays)La tcnica de ELISA es una tcnica inmunoenzimtica, cuantitativa con la cual se pueden buscar antgenos virales, en solucin, utilizando anticuerpos especficos (ELISA de captura), o buscar anticuerpos generados contra determinado virus (suero problema) con un antgeno conocido.La reaccin se revela a travs de la accin enzimtica de una enzima (peroxidasa fosfatasa alcalina, etc) sobre un sustrato , que al combinarse desarrolla una coloracin de intensidad proporcional a la cantidad de antgeno o anticuerpo presente, cuantificable mediante un espectrofotmetro.
Medios de cultivo para virus
Embrin de Pollo
Animales experimentales
Tcnicas de cultivo celular (primarios, secundarios y lneas celulares
d) Solo bajo las siguientes circunstancias:i. Virus que no puedan replicarse en embriones de pollo o en cultivosi. Virus que no puedan replicarse en embriones de pollo o en cultivoscelulares.celulares.ii. Para el estudio de la patognesis de laenfermedad y es aqu dondeii. Para el estudio de la patognesis de laenfermedad y es aqu dondees de gran utilidad.es de gran utilidad.iii. En casos deinvestigaciones epidemiolgicas.iii. En casos deinvestigaciones epidemiolgicas.iv. Para atenuar virus de humanos: Virus de la fiebre amarilla, virusiv. Para atenuar virus de humanos: Virus de la fiebre amarilla, virusVaccinia.Vaccinia.v. Para pruebasde seguridad yantigenicidad de vacunas parav. Para pruebasde seguridad y antigenicidad de vacunas paraobtener las licencias.obtener las licencias.vi. Para probaragentes antivirales quimioterapeticosvii. En la produccin de anticuerpospoliclonales y monoclonales.viii. Son fuente de rganospara los cultivos celulares.viii. Son fuente de rganospara los cultivos celulares.ix. Son fuente de sangre (eritrocitos y PMN) para muchas pruebas.ix. Son fuente de sangre (eritrocitos y PMN) paramuchas pruebas. EJEMPLOS:PICORNAVIRUS RABDOVIRUSPICORNAVIRUS delaFiebreaftosaVirusdelaRabiaVirusdelaFiebreaftosaVirusdelaRabiaRATNLACTANTE.RATNLACTANTERATNLACTANTE.
Vas de inoculacion en animales de experimentacin
CULTIVO EN EMBRIN DE POLLOSe emplean huevos con 5 a 14 das de incubacin, segn la va de inoculacin
*cavidad amnitica*saco vitelino*cavidad alantoidea
OVOSCOPIOHaz de luz que atraviesa al huevo sin romperlo, pudiendo observar as lo que sucede en el interior
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ESTRUCTURA NORMAL DEL EMBRIN15
ESTRUCTURA DEL EMBRIN DE POLLO
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INOCULACIN EN LA CAVIDAD ALANTOIDEA
1Transiluminar al embrin, identificar la cmara de aire y marcar un punto en la cima17
2Perforar los puntos marcados e inocular con aguja cortaLocalizar una zona libre de vasos a 5mm por debajo de la cmara de aire y del lado opuesto al embrin marcar el punto de inoculacin318
INOCULACIN EN CAVIDAD AMNITICA1Transiluminar al embrin, marcar la cmara de aire y el punto de inoculacin19
23Marcar el punto de inoculacinInocular con aguja larga20
INOCULACIN EN MEMBRANA CORIOALANTOIDEA21Transiluminar al embrin e identificar la cmara de aireDividir imaginariamente al embrin en tres partes, al final del primer tercio sealar el punto de inoculacin entre los vasos sanguneos21
34Perforar sobre la cmara de aire y punto de inoculacinSuccionar con una boquilla por el orificio de la cmara de aire para formar una segunda cmaraHacer la inoculacin con una aguja corta522
INOCULACIN EN SACO VITELINO1Transiluminar al embrin e identificar la cmara de aire23
2En posicin horizontal identificar el saco vitelino3Introducir una aguja larga verticalmente a travs de la cmara de aire e inocular24
VA DE INOCULACINVIRUSEFECTO CITOGNICOCavidad alantoideaInfluenzaPaperasEnfermedad de NewcastleHemaglutinacinMuerte embrionariaCavidad amniticaInfluenzaPaperasMuerte embrionariaMembrana corioalantoideaHerpes simpleSarcoma de RousViruelaPstulas en la membranaMuerte embrionariaSaco vitelinoHerpes simpleMuerte embrionaria25
EFECTOS CITOPATOGENICOS Efectos:Ltico: el virus rompe la clula por la gran masa de virus que se produce. Ejemplo: polio, herpes.Hiperplasia: la clula se transforma y multiplica aceleradamente.Ejemplo: verruga.
Son los cambios morfolgicos en una clula cultivada causados por dao citoptico
Faltan imgenes de cada uno
Mixto (ltico e hiperplasia): Induce una transformacin y luego se rompe. Ejemplo: viruela. Formacin de sincicios: son clulas multinucleadas porque las membranas celulares se funden (unin). Ejemplo: Virus del HerpesOncognicos: transformacin en clulas malignas.
Aplicaciones: solo embrin de pollo
