PRODUCTIUN DE MATERIEL VEGETAL S A I N DE M A N I O C

PAR LA CULTURE I N VITRO rp-0 CA.A.3

4-t.0 CL6 4 -1.1 -2 5 (Bernard BOHER, ORSTOM, Brazzavi l le -

Christophe JENNY, IRAT, Brazzavi l le, j u i l l e t 1988 i' - v r*

que ce s o i t pour mener à bien un t r a v a i l de recherche (Qtude de l a

physiologie de l a p lante OU des r e l a t i o n s hÔte/parasite)

un programme d'évaluat ion OU d' amélioration, od t o u t simplement a f i n d'au-

gmenter l a prodirct ion il e s t indispensable de disposer de ma té r ie l végétal

sain .

pour démarrer

Dans l e cas du manioc, m u l t i p l i é par bouturage e t soumis à l ' a t t aque

de nombreux paras i tes e t prédateurs, 1' assainissement du ma té r ie l végétal

peut ê t r e prat iqué de diverses mani'eres.

Pour ce r ta ins agents de maladies (cocheni l le, acarien, agent de l ' an -

thracnose e t agent de l a cercosporiose) une bonne dés infect ion de surface

es t souvent suf f isante, pour d'autres (agents de l a mosarque a f r i c a i n e e t

de l a bactériose vasculaire) c e t t e prat ique n' e s t d' aucune aide.

Prof i t a n t de l 'expér ience acquise par ce r ta ins chercheurs (KARTHA ¿i

GAMBORG, FEREOC, MABANZA) dans l e domaine de l a c u l t u r e i n v i t r o dir manioc,

nous avons mis au p o i n t une technique de production de boutures saines de

manioc à p a r t i r de mérist'emes de r e j e t s ayant subi une thermothérapie.

Ihre PARTIE : ASSAINISSEMENT ET MUCTIPLICATION IN V I T R O

L'e mérist'eme a p i c a l assure, l a m u l t i p l i c a t i o n c e l l u l a i r e e t l a d i f f 6- renc ia t i on des organes de l a plante. Les c e l l u l e s eh d i v i s i o n de ce méris-

tème sont indemnes de l ' agen t de l a Mosaïque a f r i ca ine . Ca prat ique de l a

thermothérapie sur l e s re j e t s de boutcires permet d'augmenter l e volume de

t i s s u méristématique non contaminé par l e v i r u s e t f a c i l i t e l a régénération

i n v i t r o . A l a cond i t i on de prélever lrne p a r t i e du dôme méristématique ne

dépassant pas 0.8 mm on se débarrasse du pa ras i te dans 90 'a 100 % des cas.

I i .

- 2 -

A ) Choix des boutures.

I1 f a u t prélever l e s boutures sur des i n d i v i d u s sans symptômes de mala-

d ies mais b ien souvent c e l a n ' e s t pas possible dans l e s zones & f o r t e pres-

s ion paras i ta i re . On se tourne a lo rs vers des p lan ts faiblement a t t e i n t s

(pas de dessèchements de sommite's en ce q u i concerne l a bactér iose vasculai-

re, f a i b l e s symptômes f o l i a i r e s pour l a mosaïque). Ces t i g e s chois ies ne

doivent pas présenter de l és ions chancreuses. A p a r t i r de ces t i g e s on dé-

coupe des boutures de 3 à 5 noeuds.

B) Désinfect ion + thermothérapie.

Ces boutures sont désinfect6es dens une so lu t i on 'a 10 % d'hypochlo-

r i t e de sodium (OU dans une s o l u t i o h d i luée Équivalente d'eau de j a v e l du

commerce) par trempage pendant v i n g t minutes e t e l l e s sont lavées t r o i s

f o i s à l ' e a u s t é r i l e (ou t o u t simplement à l t e a u f i l t r é e ) . On p a r a f f i n e

1' extrémité d i s t a l e seulement e t on p lante l a bouture vert icalement dans

un melance sable/vermicul i te (1 /I ) additionné de s o l u t i o h n u t r i t i v e de

SHIVE & ROBBINS ( v o i r annexe 4 ) . Ce type de p lan ta t i on permet de disposer

un maximum de boutures dans l e f a i b l e volume de l '&uve & thermothérapie

(80 'a 100 boutures pour une cuvette de 45 x 55 cm). LfÉtuve ob e s t p r a t i -

quée l a thermsthérapie peut ê t r e fabriquée de manière a r t i sana le ( v o i r

anhexe Z), e l l e d o i t assurer une température de 36-37OC, l a lumière y e s t

fournie par un néoh de 40 watts (1000 l u x environ, 16/24 h.) e t l 'hygro-

métr ie maintenue à 70 % par une simple cuvette remplie d'eau. l e s boutures

r e s t e n t un mois dans ces condi t ions b t sont soumises à un arrosage r é g u l i e r

en é v i t a n t l a saturation.

C ) P r É l È m " t e t mise en c u l t u r e des méristèmes.

Ces sommets des r e j e t s é t i o l é s produi ts par l e s boutures après un mois d' incubat ion sont récol tés, débarrassés de toutes l e u r s f e u i l l e s e t désin-

fectés (trempages dans l ' a l c o o l à 70° pendant 5 minutes pu is dans l t hypw- .

c h l o r i t e de calcium à 10 % pendant 20 minutes s u i v i s de t r o i s lavages &

3

l ' eau s t é r i l e ) . Pour chaque r e j e t , l e dôme méristématique ap ica l (0.4-0.8 mg) es t décoclpé sous l a b inocula i re dans l a ho t te 5 f l u x laminai re p u i s déposé

sur l e m i l i e u 1 de MABANZA ( v o i r annexe 3) en bo î te de P é t r i . Après deux 'a t r o i s semaines d ' incubat ion (3000 lux, 28OC) l e maristeme produ i t un c a l por-

t a n t une ou p ~ u s i e u r s p e t i t e s pousses feu i l l ées . Ces pousses f e u i l l é e s sont

séparées du c a l e t plantées dans l e m i l i e u 6 de MABANZA ( v o i r annexe 3) en

tube (diam'etre 20 mm), il y a a lo rs élongat ion de l a t ige. Un dern ier rep i -

quage de l a t i g e f e u i l l é e obtenue sur l e m i l i e u I B A de SNITA e t a l . ( v o i r an-

nexe 3) permettra l a production de racines e t on disposera en t r o i s semaines

environ d'un v i t ro -p lan t complet . Toutes l e s opérations décr i tes do ivent se

prat iquer dans des condi t ions d' asept ie par fa i tes.

D) V é r i f i c a t i o n de l ' é t a t s a n i t a i r e du v i t ro -p lan t re"qénÉr6.

S i l e s contaminations par des.microorganismes d 'o r ig ine fongique oll bac-

tér ienne sont rapidement décelées i n v i t r o , l a détect ion de l 'agent de l a

Mosaïque a f r i c a i n e n 'est pas poss ib le 'a ce stade. Pour r é a l i s e r c e t t e détec-

t i o n on pra t ique d' abord une p e t i t e m u l t i p l i c a t i o n par microbouturage q u i four-

n i t , après deux mois de cul ture, une d iza ine d ' ind iv idus issus du p l a n t régé-

néré ( v o i r annexe 5). h e m o i t i é es t conservée i n v i t r o (souche) l ' a u t r e moi-

t i é es t sevrée ( v o i r I Ième p a r t i e ) e t eu l t i vée en pot en serre OU en cage à l ' a b r i s des insectes ( f i l e t NICOCON 66336, Clov is Cande Associated CTD, Gaza

Trading Estate, hildenborough, kENT T N l l Opt, U.K.). Après t r o i s

de croissance, s i l'absence de symptômes de mosaïque est vé r i f i ée , on consi-

dère l a souche mère en tube comme saine e t on peut a lo rs l a m u l t i p l i e r .

s i x mois

E) M u l t i p l i c a t i o n i n v i t r o .

Ce v i t ro -p lan t régénéré assa in i (souche) es t découpé en micro-boutures

de 0.5 à 1.0 cm q u i sont plantées sur m i l i e u I B A en tube. L'a m u l t i p l i c a t i o n

es t poursu iv ie e t dans l e s condi t ions hab i tue l l es de c u l t u r e ( m i l i e u IBA,

4000 lux, 28OC) le taux de mUl t i p l i ca t i on su ivaht l e s c l i l t i v a r s e s t de 3 à 4

par mois. On peut a i h s i produi te en s i x mois de 2000 5 16000 v i t ro -p lan ts sains

p a r t i r de l a souche d'or ig ine.

I Y

4 4

* quahd on i e juge u t i l e l e sevrage de ce r ta ins l o t $ de v i t ro -p lan ts e s t

prat iqdé ( v o i r 112" p a r t i e ) e t i l s soht placés en parc à b o i s i Ces micro- 1 : '

boutures destinées ii produ i re des piahtulet3 pour l e sevtege subissent Un t r a i - tement dif F érent de c e l u i permettant i a m d l t i p l i c a t i o n 8 e l l e s dont cu l t i vées

2 semaines 'a 28OC sous 4000 l u x p d s forcées une semaine à lo000 lux, 30-32OC

pour f a c i l i t e r l a r e p r i s e en pot,

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- 5 -

IIÈ" PARTIE : TECHNIQUE DE SEVRAGE

Les techhiques de cu l tu re i n v i t r a décr i tes précédemment do ivent abou-

tir à l a production de p lan ts de manioc sains e t vigoureux. Cependant, s i

ces techniques nécessitent une préc is ion e t des soins tous p a r t i c u l i e r s en

labora to i re , l e sevrage de ces p lan ts e t l e u r adaptation au champ doivent

auss i ê t r e s u i v i s de près.

I A ) Pos i t i on du problème,

Lo rsqu ' i l s sont p rê ts Q ê t r e sevrésj l e s p lan ts de manioc en Cube

mesurent ent re 2 e t 6 cm. de hau t j possèdent de 1 2 3 f e u i l l e s hon ent iè-

rement d i f fé renc iées sur une t i g e dont i 'épaissedr hi excède que rakement

1 mm. Les racines sont t r è s f i n e s e t caSSahte!3 et; souvent ped nombrauses.

A ce stade, l e s p lan ts ont cd environ t r o i s semaines en tl lbes en

chambre de cu l tu re (éclairement e t température conkrôlés e t régu l i e rs , hu- m i d i t é constante dans l e s tubes t 400 %)i e t sur Un m i l i e u déterminé e t

équ i l ib ré .

Le sevrage consiste & accl imater ces p lan ts allx condi t ions de p l e i n

champ, beaucoup p lus var iab les e t a léa to i res . Les facteurs susceptibles d ' i n f luencer fortement l e développement des

VikrO-plahtS sont donc : I l

~ .- I ) - le c l imat (humidi t&$ température 9 ensolei l lement) ; 2) - l e s o l (composition chimique, présence dì éléments toxiques4 carences) ; 3) - l e s prédateurs ( insectes aér iens ou souterrains, acariens. ) .

I ) Le cl imat.

Lthumidi tÉ dans l e s tubes es t constante e t égale & 100 %, l e s tubes

é tan t hermétiquement fermés i

AU champ, l ihumidité S h i t deug tythmes superposés i un rythme journa-

l i e r e t un pythme annuel. E l l e e s t maximale l a nuit (ent re 85 X e t 95 % 2 6 heures en saisoh des p lu ies ) e t mir'rimaie à m i d i (de 60 % en saison sèche

à 72 % en saison des p lu ies) ,

- 6 -

La température ambiante de la chambre de culture varie entre 26OC

et 29% (éclairement 4000 lux) sur 24 heures de façon régulière (photo- période : 16 h jour / 8 h nuit),

En extérieur, les températures au sol varient de 1 5 O C à 6 heures (moyenne décadaire des minima) à plus de 41OC (moyenne décadaire des maxi- ma) à 13 heures (chiffres campagne 86/87). A 4 mètre du s o l cette amplitude

est moins grande, (mini saison sèche i 1 7 O C et maxi saison des pluies : 32OC) mais la température au sol intéresse partichlièrement les jeunes plants de

manioc lorsqu'ils ne mesurent que de 10 à 20 cmei lors du passage au champ. '

Ehfin l'éclairement en chambee était jusqu'à récemment de 4000 lux,

maintenant poussa' à 10000 lux, Quoiqu'il en soit et même avec une photo- période type 1lété11, liénergie reçu@ par les plants est bien inférieure à celle produite par l'éclairement natdrel (par exemple en saison sèche au soleil 'a 10 heures du matin, liéclairement est déjà de 28000 lu%).

Si lihomog6néité du climat en khambre de culture est totalement dif- f érente des conditions naturelles, 1 i intérêt ma jeUr ici est d obtenir une production à peu près synchrone de vitro-plants, permettant de travailler

Sur des lots suffisamment importants de plants. Cet objectif dépend aussi

beaucoup du type de microboLkure utilisée pour 1 i ensemencement (place de ld bouture sur le micro-plant) . 2) Le' sol

Le milieU de culture est Un mélange dosé diélémehts nutritifs, La composition de ce substrat est differente suivant ies objectifs visés : développement da méristèmes, rhizogenèse ou croissance du plant, mais dans tous les cas e l l e reste f ixe'e polir Une opération donnée. Cf. lère partie.

Ce milieu est donc équilibré bn minéraux, comporte des hormones vé- gétales (croisgance ou dif f Ékenciation) 9 mais surtout est stérile i. e * dé- barrassé de Cous organismes vi\lants. Enfin, tous ces éléments sont réunis

dans une gélose stérile, homogène et meublei I

Bien évidemment ces condit ions he se setrouvent pas au champ, t a n t

du po in t de vue de l a texture ¿II s o l que ¿e sa composition. Des changements

progressi fs de subst rat permettent de contourner l e problème de 1 i adaptation.

3) l e s prédateurs

Le problème es t uniquement de protéger l e s p lan ts jusqu'à ce q u ' i l s

soient capables de r 6 s i s t e r aux attaques de prédateursr

E) Technique de sevraqe u t i l i s é e B 1 i ORSTOM Brazzav i l l e

1) - quand un Vi t ro-p lant e s t - i l sevrable ?

Même s i tou tes l e s condi t ions en chambre de c u l t u r e sont réunies pour

r é a l i s e r un environnement homogène ¿es Dlants, l e s Vitesses de développement e t de croissance sont t r è s d i f f é ren tes diune microboclture 2 l ' a u t r e . I). - - ',

Ceci corpespond en f a i t aux di f férences que l i o n observe au champ entre l e s

repr ises des d i f f é r e n t e s boutures dtuh mgme pied, selon l a hauteur de prélè-

vement sur l a t i ge .

Au t o t a l , il Vaut mieux pa r le r bn termes de stade de développement que ,

de temps de c u l t u r e en tube. Ces ind i ca t i ons de temps dépendent de plus du m i l i e u de c u l t h e U t i l i s é j q u i ne ntJUs ih téressg pas directemeht i c i . C f .

1Qre par t ie .

Caractér ist iques moyennes i

Hauteur ! 3 à 6 em& avec ati moins deux hoecldsi f e u i l l e s b ien dévelop-

t r o i s 1obes)j racines i au moins deux de p lus de 2 cm. p ies (ad moins Une

Les p l a n t s t r o p grands ne soht pas r i g i d e s e t SØ couchent l a s o r t i e

des tubes. Ce p l a n t aura tendance à SEI développer à l ' h o r i z o n t a l e e t de ce

f a i t Brehd un r e t a r d B l a croissances I1 e s t p l u s f r a g i l e e t p lus shscepti-

b l e dl ê t r e cassé lors de manipulations iAtér ieures.

2) - l a s o r t i e des tubes.

a) - Technique qénérale :

Ces p lan ts sont e x t r a i t s des tubes avec une pince longue en décol lant

l a gélose du Fond du tube. c'ensemble p lan t + gélose es t trempé dans un ba in d'eau d i s t i l l é e dans l eque l on él imine l a gélose en prenant so in de ne pas 1

casser l e s rac ines ex is tantes t r è s f r a g i l e s (annexe 6) . i

ce plank a i n s i dégagé est placé dans un sachet p last ique contenant un

mélange 50 % sable s t é r i l e + 50 % vermicu l i te s t é r i l e . Ce pot es t p lacé dans

un bac de c u l t u r e recouvert d'un f i l m p las t ique étanche, B l ' i n t é r i e u r duquel

1' humidité e s t maintenue maximale . L''arrosage se f a i t B l ' eau d i s t i l l é e addit ionnée au départ de s o l u t i o n

de Shive ek Robbins - v o i r composition en annexe I. Ii f a u t prendre so in de I I

he pas dé ter re r l e p lan t en versant l ieau t r o p brutalement. C'humidité dans

¡e bac es t maintenue en l a i ssan t en permanence un r é c i p i e n t d'eau en Qvapo-

ra t ion.

Ce bac de c u l t u r e es t placé SOLIS ombri'ere.

b) - De .façon p lus p ra t ique :

* Les sachets p last iques mesiir& 5 cm x 10 cm., sont perfore's e t

rempl is du mélange sable/vermicul ike humidif i 6 j u s t e avant l e sevrage . * Ca s t é r i l i s a t i o n du sable e t de l a vermicu l i te se f a i t par passage

3 heures B l i é tuve B ZOOOC.

* Ces bacs de c u l t u r e : Ce sont des i m i t é s de 1 m. sur 50 cm., pro-

fondes de 10 cm., en bois, pouvant conteni r une centaine de sachets p lus un bac d'eau en évaporation. I¡s sont 'surmontés d'un " t o i t " en f i l m p las t ique

2 deux couches. L'a couche in fé r i eu re es t perforée régdlièrement e t l a couche

supérieure e s t étanche. Ces deux f i l m s sont tendus par un poids pour coller

hermétiquement au baci : de cu l tu re ( c f . annexe i 7) .

L g. i

3) - Premier mois de sevraqe. '

S i t a n t e s t qu'on a pu sélectionner des p l a n t s homogènes en tube,

l e u r s développement

du sevrage, ce q u i f a c i l i t e l a manipulation des l o t s .

e t croissance res ten t & peu près synchrones au cours

¡!es bacs de c u l t u r e sont placés sur des tab les à 80 cm du so l , pour

permettre un t r a v a i l co r rec t (arrosage, comptages, mesures diverses j Ces

tab les sont i so lées du s o l par trempage des p ieds dans un bain de gas-oi l ,

pour empacher l e s insectes rampants d i a t te ind re l e s plants.

Ces tab les sont protégées par Un t o i t en f i l e t 5 ombrage q u i diminue

l e rayonnement e t l a température (sur tout important en saison des p lu ies ) e t

casse l e s p l u i e s t r o p f o r t e s sans a r rê te r l a c i r c u l a t i o n d ' a i r (c f . annexe 8).

L'es p lan ts res ten t quatre Semaines en bacs de cu l tUre :

?ère semaine : l e s 2 f i l m s pliAstiques soht en place 24 h/24 ; 2ème semaine : l e f i l m supérieur étanche es t enlevé l a n u i t

3hme semaine : seu l es t maintehU 24 h /24 l e f i l m per foré ; 4hme semaine : l e s p lan ts soht & l ' a i r l i b r e j o u r e t nuit.

Ces p lan ts sont arrosés régulièrement tous l e s jours .

Un bac d'eau en évaporation es t maihtenu en place t o u t l e mois : a in 's i

1 'humidité ambiante autour des p lan ts he diminue que tres progressivement.

ces bacs hermétiques tamponnent assez b ien l e s var ia t ions de tempé-

ra tu re joimnalières. De p lus 1' ombrage permet d' é v i t e r l e s températures chau-

des extrêmes (on r e j o i n t quasiment l e s condi t ions d'un a b r i météo standard)

Enfin, l e a p lan ts res ten t protégés d' Qventuels prédateurs aériens . Ca h i l e d'ombrage permet de p lus de b r i s e r l e s f o r t e s p lu ies suscept ib les de casser l e s jeunes p lan ts pendant l e s deux dernières semaines, t o u t en !

n'empichant pas Qventuellement ce t te eau d' a t te ind re l e s plants.

Ce mélange sable/vermicul i te const i tue un subst rat aéré dans l eque l

l e s rac ines peuvent se développer 'sans contra in tes . Théoriquement 'a l a f i h de c e t t e période, l e s p lan ts sont p r ê t s 'a

ê t r e por tés auf champ. Cependant, s i physiologiquement i l s sont capables de

supporter l e s condi t ions du m i l i e u extér ieur, i l s res ten t souvent t r o p f ra -

g i l e s pour kQsisCer aux prédateurs habi tue ls du manioc e t en p a r t i c u l i e r aux

insectes broyeurs (c r iquets sur tou t ) q u i peuvent sectionner l a t i g e f a c i l e -

ment . Ainsi , l ' u t i l i s a t i o n d ' i nsec t i c ide se révele i n u t i l e car il n ' a g i t

sur l e s insectes qu'une f o i s l e s dégâts commis.

S i l a per te d'un p l a n t de manioc n 'est pas t r o p dommageable, il n'en

e s t pas de même pour un v i t r o - p l a n t q u i 'a ce stade e s t le fondateur d'une

l i gnée de p lan ts %eufsll. On peut estimer & 50 le nombre de p l a n t s en pre-

mière product ion issus d'un seu l v ikro-p lant . Voir schéma de m u l t i p l i c a t i o n

en annexe 9.

Toutes ces considérations, a i n s i que l e s r é s u l t a t s de t e s t s ef fectués

nous ont donc condui t B a jou te r une étape au procédé de sevrage des v i t r o -

p lan ts de manioc.

4) - Phase de qrossissement sous .hllnnël ,pla$tique.

A l a s o r t i e de l 'ombrihre, l e p l a n t avec sa motte e s t t ransplanté

dana un sac plaskiqile: p lus grand (ehviron t r o i s l i t r e s ) remp l i de.Ikt5freau '

l o c a l e t perf'ore' pour l ' a é r a t i o n e t l'écoulement de liead.

Ces pots a i n s i const i tués sont! posés directement sur des tab les à 80 cm. i so lées comme pr6cédemment k k placées sous thnne l p las t tque - c f .

photo (annexe I O ) .

Un grand bac d'eau en &vaporation est placé sous chaque u n i t 6 d'envi-

ron 1 m x 2 m.

ces planks sont t r a i t é s au TQmik i Aldicarbe + kindane (systémique)

à l e u r a r r i vée sous l e tunnel e t continuent à ê t r e arrosés tous l e s jours.

Ca température ambiante res te élevée tou te l a journée mais l e s p lan ts

y rés i s ten t t r è s b ien

ment. Ces températures élevées e t l a s i t u a t i o n sur tab les protégent l e s plan-

tes des insectes; A toutes f i n s u t i l e s , on dispose en supplément un piège

sous l a serre (plaque jaune enduite de glu).

ce stade. Plus jeunes, i l s dépérissent assez rapide-

Au bout d'un mois l e s p lants mesurent 15 à 20 cm de haut, on t une t i g e

d'au moins 2 mm. d'épaisseur ab c o l l e t e t comportent ¿e 3 à 6 f e u i l l e s b ien

développées en moyenne . Il e s t temps de t ransplanter ad champ car l e volume de s o l a l loué aux

racines devient j u s t e s u f f i s a n t e t l e p lan t encore jeune supporte b ien une

dernière t ransplantat ion.

5) -.Passaqe au champ.

L'es v i t ro -p lan ts sont placés en planches. Cel les-c i mesurent 1 mètre

de large. L!a densi té standard es t de bn p ied tous l e s mètres p lantés en

QUinquonce sur deux l i g n e s dÉca16eg do 50 cm. mais c e l l e - c i peut ê t r e doublée

en p lantant tous l e s 50 cm. sur chaque l igne.

Lk~s planches son t recouvertes d'un p a i l l a g e p las t ique face blanche

dessus qui permet de maintenir l e s o l humide e t r a l e n t i t l e s invasions de

prédateurs ( r é f l e x i o n de l a lumière) . Un t ra i tement au TÉmik 3 (Aldicarbe + Lindane) es t e f fectué l o r s de l a

p lan ta t ion pu is renouvelé tous l e s mois.

l e s p lan ts sont arrosés tous l e s jours pendant un mois, e t p lus s i

l ' o n se t rouve en saison sèche.

En hu i t mois on peut obteni r des p lan ts de 2 m. 2 2,50 m. de haut,

août& sur 1,80 m..'& 2 m. e t pouvant fou rn i r en t re 8 e t I O boutures à 2 ou

3 noeuds.

- 12 -

IIIÈ" p a r t i e : MISE EN PCAGE ET SURVEILk!ANCE DES PARCS A BOIS

- L'es v i t ro -p lan ts sevrés sont destine's dans un[!&emier temps B l a pro- ,

duct ion de bois. L'e schéma général peut-être le su ivant :

V i t r oplant

( Sevrage) \1

P lan t adu l te ( 8 mois)

. fl (Mu l t i p l i ca t i on ) .

Production de tubercules

Théoriquement , l e s v i t ro -p lan ts i ssus du sevrage sont indemnes de

mosaïque e t de bactér iose (cf. I è r e par t ie ) .

Quoi q u ' i l en s o i t , l e s planches b t i l i s é e s pour l e sevrage e t l e

l i e u du parc B bo is doivent ê t re , dans l a mesure du possible, choisis j u d i -

cieusemeht pour é v i t e r une recontaminatioh b ru ta le des p lants , c' est-'aAdire

6loignQs de champs contamine's d'au moins 500 mètres, ces planks développant

t o u t de même des symptômes doivent ê t r e Qliminés.

llne surve i l lance des vecteurs de l a mosaïque e s t 'a e f fec tue r régu l iè -

rement e t il f a u d r a i t t r a i t e r avec Lin p rodu i t ae'rosol non systémique (donc

compl6mentaire du Témik'. i par exemple Carbaryl contre Bemisia tabac i e t Co--

c h e n i l l e j Dicophol acar ic ide).

Ø

Annexe 1

Solution nutritive de Shiva ¿i Robbins (1942)

Na NO3

Ca CX2

KH2 PO4

Mg 504 7H20

Fe SO4 7H28

H3 BO3

Mn SO4 4H20

Zn 504 7H20

0.34 gill.

0.17 g./1.

0.21 g./1.

0.51 g./l.

5.5 mg./l.

0.57 mg./l.

0.57 mg./l.

0.57 mg./l.

pk 5.5 - 6.0.

Annexe 2

Thermostat Y

Ø - Orifice d'aération Y-

Ampoule 1OOW commandée par thermostat

Serpilli6re ' -

Petit ventilateur .L---.-, i-

côté

Cuvette - sable + vermiculite

Cuvette Eau -

Tube fluorescent

O

face

U 1 Ocm

Orifice d'aération

Porte

Etuve B thermothérapie

en C.T.P. 10mm.

Annexe 3

i

M i l i e u 1 de MABANZA

S o l i t i o n n u t r i t i v e de Murashige e t Skoog

( v o i r annexe 4)

Saccharose

Myo-inosi to l

Agar

Ajuster l e pH : 5.6/5.8.

Autoclaver (20 minutes B 12OOC).

Maintenir en sur fus ion . A jou ter l e s so lu t ions de phytohormones préalablement s t 6 r i l i s 6 e s par micro-

f i l t r a t i o n (Min isar t O .4!5 )4) . Benzylamino pur ine (BAP) 0.5 mg

Acide Alpha-naphtalène acétique (NAA) ?.O mg Acide g ibbere l l ique (GA3) 0.1 mg

1 l i t r e

30 go

100 mg

7 9.

M i l i e u 6 de MABANZA

I1 est en p a r t i e ident ique au précédent seules l e s concentrat ions en phy-

tohormones changent, 1' acide g ibbere l l ique es t absent . Benzylamino pur ine

Acide alpha-naphtalhne acétique

0.5 mg

0.1 mg

M i l i e u I.B*A. de SMITH & al..

Solut ion n u t r i t i v e de Murashige e t Skoog d i l u & (1/1) 1 l i t r e

Saccharose 30 g.

Agar 8 9.

Ajuster l e pH : 6.0.

Autoclaver e t maintenir en surfusion.

A jou ter l a phytohormone stérilisée par m i c r o f i l t r a t i o n !

Acide Indole-3-butyrique ( I H A ) 0.2.mg.

Annexe 4

So lu t ion n u t r i t i v e de Murashiqe &.Skooq.

préparer des so lu t ions de réserve (mg /500 ml d' eau d i s t i l l é e ) . A ) NH4N03

KN03

8) CaC12 2H20 Kl CoCl2 6H20

C ) MgS04 7H20 MnS04 H20 ZnS04 7H20

CuS04

D) Na-EDTA

FeS04 7H20

E) KH2P04

H3B03 hJa2Mo04 2H20

F) Thiamine H C 1

Pyr idoxine H C l

N ico t ine acide amine

Glycine

82500

95000

22000

41.5

1.25

18500 - 845

430

1.25

1865 1392

850

31 O 12.5

20

I O0

1 O0 400

Pour préparer un l i t r e de so lu t i on n u t r i t i v e on prélève 10 m l de chacune

des so lu t ions (5 ml'seulement pour F) e t on amène 'a un l i t r e avec de l ' eau

d i s t i l l é e . Ces so lu t ions de réserve sont konservées au rh f r i gé ra ted r , l a so lu t i on F

est congelée SOUS forme de doses de 5 ml .

L!e m i l i e u Murashige 8 Skoog peut ê t r e obtenu en sachets p r ê t s 6 l 'emplo i

chez Flow Caboratories s.a., 99 r u e de l a République 92800, Puteaux, France.

j !Anhexe 5 I

l

SChEMA DES TECHNIQUES APPLIQUEES

POUR LA PRODUCTION DE VITRO-PLANTS SAINS

DE MANIOC.

Incubation 1 mois dans encein- t e B 38"C,Bclairage 1000 lux sur vermicCllite imbibee de milieu SHIVE 8 ROBBINS.

Production de deux rejets feuilles Gtiolgs.

Recolte de l'apex qui est desinfecte par l'hypochlo- rite de calciClm.

1 PrelGvement du m6ristSme (0,4 B 0,8mm) sous la loupe.

MQristGme depose sur milieu 1 de MABANZA en conditions d'aseptie parfaites.

En deux semaines (28°C 3000 lux) formation d'un cal avec une OLI plusieurs pousses feuil- lees.

Pousses decoupfies et transfe- rees sur milieu 6 de MABANZA. En une B deux semaines (28"C, 4000 lux), elongation de la tige.

Annexe 5 (suite).

Découpe de la tige e t repi- quage sur milieu de SMITH, 8 AI..En deux 8 trois semaines (28"C, 4000 lux) rhizogensse e t obtention d'un plant complet in vitro.

Multiplication de ce plant par microbouturage in vitro. 3 semaines d'incubation a 28"C, 4000 lux sur milieu IBA.

3. Nouvelle multiplication par microbouturage : 2 semaines a 28"C, 4000 lux 1 semaine 8 31"C, 10 O00 lux.

3. O n obtient 9 8 12 vitro-plants +

". . . -_ ___. . .. . -- I une niditi6 est sevr6e

.L une moitié conservge en tube

comme souche.

Sevrage en serre 6tanche aux insectes sur melange vermiculite/sable imbibe de

Durée 3 a 4 semaines I milieu WIVE 8 ROBBINS.

Transfert en terre dans des sacs plastique de 3 l i t res

3. Aprgs 3 mois de dbveloppe- ment on appr6cie la cor mination par observation symptbmes.

Si l e plant sevrg h'a pas ex- i ta- ,/ prim6 ' de 'symptBmes, :,on le

des considere comme sain'' i e t on commtmcei r , unk 1 multiplication 3 partir *de .:la souche corres- pondante.

SEVRAGE

$. M a t e r i e l vegetal

sain -

Annexe 7

Bac de c u l t u r e avec double f i l m p last ique

dont un percé de trous. Construction en

CTP de 10mm.

I-

.-

------?

I

x___.

1. . 03

X

X

E-

I .

_.._

\

h I I --

li

I

I

\- -

I

Annexe 9 : P o t e n t i a l i t é s de m u l t i p l i c a t i o n - Renawellement des parce l les

de product ion - C f . schéma.

Dans l e s condi t ions dil CAIEM (Bouenza) pour l e q u e l sont actuellement

destinés l e s v i t ro-p lants , l a cu l tu re du manioc dure deux ans. Plante' en

novembre de l 'année 1, il e s t réco l té B p a r t i r de septembre de l 'année 3.

Nous nous basons sur c e t t e durée pour é t a b l i r l e schéma de mise en produc-

t i o n (I).

Par contre l a production de bois pour l a p l a n t a t i o n 'a p a r t i r des

v i t ro-p lants peut se f a i r e en h u i t mois depuis l a mise au ichamp. Considé-

r a n t l e sevrage

mois pour obteni r une t i g e aoÛte'e exploi table, Pour que ces t i g e s so ient

prêtes en novembre il f a u t ef fectuer l e sevrage au p l u s t a r d en f é v r i e r pré-

cédent. On peut donc sevrer des v i t ro -p lan ts en t re novembre de l 'année n e t

f é v r i e r de l 'année n+1 pour l a production de boutures en novembre de l 'année

n+l .

p a r t i r de l a s o r t i e des tubes, il f a u t donc compter d i x

Prenons par exemple un l o t type de 300 v i t ro -p lan ts sevrés en novembre

O1 (début de l 'année de c u l t u r e en novembre).

En novembre 02 on obtient; 300 p lan ts pouvant produi re 2.400 boutures

à t r o i s noeuds (8 boutures par pied, 1 seule t i g e puisqu' issus directement

des v i t ro-p lants) . On p lan te donc en novembre 02, 2.400 boUtcrres en premier

parc à bois.

En novembre 03 on coupe 'a blanc pour produi re 19.200 boutures (8 bou-

tures par pied, est imat ion minimum). Un quart e s t rep lanté en dellxi&me parc

?i bois (4.800 boutures) e t l e res te es t mis en product ion (14.400 bou'tures).

Sur l a p a r t i a en production, on peut r e c u e i l l i r en novembre 04

72.000 boutures (coupe sé lec t i ve d'une t i g e par p ied au maximum e t 5 boutu-

res par t i g e ) à replanter. Sur l e deuxième parc à bois, on peut r é c o l t e r

38.400 boutures (coupe à blanc).

(1) Un essai mis en place en novembre 87 d e v r a i t permettre de savoir s ' i l es t possible de gagner un an 2 l a production avec l ' i n t r o d u c t i o n des v i t r o - plants.

' i

Au t o t a l , on rep lan te en novembre 04, 110.000 bol i tures pour l a production,

s o i t 1 I hectares environ . I

En novembre 05, on r é c o l t e 1+4 hectare.

En novembre 06, on r é c o l t e 11 hectares 'a p a r t i r de 300 v i t ro-p lants .

I

En début de 3e année on a donc m u l t i p l i é par 350 l e nombre de planks disponi-

b les réco l tab les au bout de 5 ans.

I

En admettant que l ' o n peut sevrer 4 l o t s de 300 v i t ro -p lan ts par an

en période optimale, on peut mettre en ou l tu re p lus de 40 hectares all bout

de t r o i s ans. On reneuvel le donc 160 hectares en quatre ans.

Actuellement au CAIEM, p lus de 3.800 v i t ro -p lan ts sont au stade de

premier parc 'a boisó

annexe 9 ( su i t e )

_I. 300 VITROPLANI'S ..--

i -

Ann&? 2

/. , --.-

Ann& 3 ----

i &nee 4

. - - - - -

h.800 PLANTS EN 26me PARC A HQIS

SEVRAGE ET PRE-MUL'TIPLIT:A'lIOT\I

2.40U PLANTS EN PREMIER

PARC A BOIS

1 * --I--__-

-

BOU'I'URES

RE CUL. TE

1,5 I-lA - . _ _ ..

SCHEMA DE MULTIPLICA TIUN PROPOSE PUUR LES VITRIJPLANTS --------... -CI----

REFERENCES B I BI! IOGRAPHIQUES

COCK J.H., 1985. Rapid propagation techniques for cassava, PRCRTC, VISCA, 1

b y t e , Phil ippines . CIAT/IITA/VISCA/UNDP. I

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KARTHA K.K., GAMBORG 0.C. j 1975; Elimination of Cassava MosaYc Digease by

meristem culture. Phytopatholoqy , 65 (7) 826-828.

MABANZA J., JONARD R., 1981. Ca mulhiplicatioh des clbnes de manioc à par t i r

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SMITH M.Kd, BIGGS B.J., SCOTT K.J., 1986, Ih v i t ro propagation of cdssavai

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i ! I I !

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