UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS CARRERA DE LABORATORIO CLÍNICO E HISTOTECNOLÓGICO “DETERMINACION DE IgM PARA VIRUS SINCITIAL RESPIRATORIO EN NIÑOS MENORES DE 15 AÑOS, ESCOLARES DE LA CUIDAD DE TULCAN AÑO 2015¨ Trabajo De Fin De Carrera Previo a la Obtención Del Título de Licenciada en Laboratorio Clínico e Histotecnológico AUTORA: Cisneros Castillo Lourdes Liliana TUTOR: Dr. Carlos Wladimir Torres Serrano. QUITO, ENERO 2016
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UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS
CARRERA DE LABORATORIO CLÍNICO E HISTOTECNOLÓGICO
“DETERMINACION DE IgM PARA VIRUS SINCITIAL RESPIRATORIO EN
NIÑOS MENORES DE 15 AÑOS, ESCOLARES DE LA CUIDAD DE TULCAN
AÑO 2015¨
Trabajo De Fin De Carrera Previo a la Obtención Del Título de Licenciada en
Laboratorio Clínico e Histotecnológico
AUTORA: Cisneros Castillo Lourdes Liliana
TUTOR: Dr. Carlos Wladimir Torres Serrano.
QUITO, ENERO 2016
ii
DEDICATORIA
Este proyecto de investigación se lo dedico primero a Dios por que a través de su gracia
divina estoy aquí, segundo se lo dedico con mucho amor a mi madre Lucia Castillo ya
que ella fue mi fuente de inspiración y quien ha estado conmigo en esta lucha ha sido mi
apoyo incondicional en todo momento se lo dedico también a mi hermana Lucy por su
ayuda en los momentos difíciles y por último se lo dedico a mi hijo André Medina para
que mi sacrificio y entrega sea un ejemplo para él
Mi familia mi vida los adoro
CISNEROS CASTILLO LOURDES LILIANA
iii
AGRADECIMIENTO
A Dios por iluminarme cada día, a la Universidad Central del Ecuador porque aquí
forje mis sueños de ser parte del conglomerado de la salud porque no hay nada más
hermoso que trabajar por la salud de los demás.
Al Doctor Carlos Torres por su paciencia y por ser mi guía en este proyecto
investigativo, a la Unidad Educativa Carlos Romo Dávila de la ciudad de Tulcán
por darme apertura a la realización de mi proyecto investigativo.
A mi madre, mi hermana, mi sobrina y a mi hijo que en todo momento me apoyaron
para permitirme concluir mi carrera y a mis amigas con las cuales emprendimos
este camino lleno de conocimiento y alegrías.
GRACIAS
iv
AUTORIZACION DE LA AUTORIA INTELECTUAL
Yo, Cisneros Castillo Lourdes Liliana, en calidad de autora del trabajo de
investigación realizado sobre “DETERMINACION DE IgM PARA VIRUS
SINCITIAL RESPIRATORIO EN NIÑOS MENORES DE 15 AÑOS,
ESCOLARES DE LA CUIDAD DE TULCAN AÑO 2015¨por la presente autorizo a
la UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR, hacer uso de todos los contenidos
que me pertenecen o de parte de los que contiene en esta obra, con fines estrictamente
académicos o de investigación.
Los derechos que como autor (a) me corresponden, con excepción de la presente
autorización, seguirán vigentes a mi favor, de conformidad con lo establecido en los
artículos 5, 6, 8; 19 y demás pertinentes de la Ley de Propiedad Intelectual y su
El VRS pertenece al género Pneumovirus, de la subfamilia Paramixiviridae; posee un manto conformado por una bicapa lipídica en la que se insertan proteínas que sobresalen de este manto, de las cuales las más importantes son las proteínas G y F
La nucleoproteína N, la fosfoproteína P y polimerasa L, que conforman la cápsula del virus y se asocian al ARN genómico
Dos proteínas no estructurales capaces de inhibir la acción del interferón y que se encuentran en muy pequeña cantidad en los viriones, pero se acumulan en las células infectadas
Las proteínas no glicosiladas M, M2-1 y M2-2, que constituyen la capa proteica entre la cápsula y el manto, denominada matriz viral
El genoma viral está constituido por una hebra de ARN lineal que codifica para
10 proteínas:
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2.3 CARACTERÍSTICAS VIROLÓGICAS DEL VSR
La proteína F, o proteína de fusión, que se encuentra insertada en el manto lipídico, está
muy conservada en las distintas cepas de VSR; tiene un rol fundamental en el ingreso y
diseminación del virus a la célula y permite que el agente pase de célula en célula
causando la fusión de las membranas y la formación de los típicos sincitios de células
multinucleadas que caracterizan a esta infección. (Subhedar N.2000)
FACTORES DE RIESGO PARA CONTRAER EL VSR
Gráfico 7: Esquema de los factores de riesgo para contraer el VSR
Fuente: Revista médica de Chile 2015
•
• Tabaco,
• Bio- masa para calefacción
• Cocina
• Hacinamiento
• Invierno
• Asistencia a guarderías
• Madre analfabeta funcional
• Desnutrición
• Edad (menor de 3 meses)
• Atopías
• Rasa
• Lactantes (0-5 años)
•Falta de lactancia materna
•Vacunación incompleta
•Prematurez
Factores de Riesgo propios
del huésped
Bajo peso al nacer
Contaminación domiciliaria
Del medio
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Los lactantes que provenientes de familias con bajo nivel socioeconómico tienen mayor
frecuencia de infecciones graves, lo que se podría deber a que asisten más a salas cuna y
tienen mayor tendencia a adquirir la infección en forma más temprana, en comparación
con los niños de mejor nivel socioeconómico.Uno de los principales factores de riesgo
para contraer el Virus Sincitial Respiratorio es la hospitalización, debido a la alta
contagiosidad de este agente, que es la causa más común de infección nosocomial en las
salas de pediatría con pacientes hospitalizados por otra causa. Entre los factores
asociados a alto riesgo de infección nosocomial están: ser lactante menor de seis
semanas, presencia de enfermedad crónica, hospitalizaciones prolongadas y el
hacinamiento hospitalario que ocurre en la época invernal. (Rodríguez S, Bauer G.
2015)
Edad y Sexo: son más frecuentes las infecciones por Virus Sincitial Respiratorio en
niños menores de 2 años y en especial los menores de 3 meses, siendo el sexo
masculino más afectado. Lactancia materna: esto parece conferir cierto grado de
protección contra enfermedades de las vías respiratorias, y en particular por VSR.
Aunque el papel fundamental de la alimentación a seno materno no es la prevención de
la infección, sino la reducción de la gravedad de la enfermedad. Se ha detectado en el
calostro una gran actividad neutralizante contra el VSR que se debe en gran medida a la
presencia de IgM secretora y de interferón alfa.(Bouzas L, González P. 2002)
Raza: Las bronquiolitis por VSR parecen ser más severas en niños blancos que en niños
negros.
Factores socioeconómicos: el riesgo de padecer enfermedad grave por VSR es mucho
mayor en lactantes de familia de bajo recursos, y la causa más probable se relaciona con
condiciones de hacinamiento, familia numerosa y/o madre analfabeta funcional. La
presencia de hermanos mayores aumenta el riesgo por infección por VSR en la mayoría
de los casos. (Rogers B.2001)
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Tabaquismo pasivo: la exposición al humo de cigarrillo incrementa cuatro veces el
riesgo de sufrir infección por Virus Sincitial Respiratorio, y tres veces de contraer
cualquier enfermedad de las vías respiratoria. El riesgo se relaciona con el tabaquismo
materno más que paterno, y podría deberse en parte al mayor tiempo que las madres
suelen pasar con sus hijos.
Prematurez: los niños pretérmino mostraron mayor predisposición a la infección,
aunque sin ninguna significancia estadística.(Gutiérrez A, Quiroga G. 2006)
2.4 MANIFESTACIONES CLÍNICAS
Abarcan desde un resfrío simple hasta bronquiolitis o neumonías severas.El daño es más
localizado a los bronquiolos por toxicidad directa, con lesión del epitelio bronquial y
alveolar, con compromiso intersticial, edema de la mucosa e hipersecreción, por lo que
lleva a la obstrucción bronquial difusa, hiperinsuflación pulmonar. En niños menores de
tres semanas la infección es atípica, presentando irritabilidad y letargo, siendo raras las
bronquiolitis y las bronconeumonías.(Hall C. 2005)
Las infecciones en personas de más edad corresponden, en su mayoría, a reinfecciones y
suelen ser leves o asintomáticas. Generalmente afectan sólo al tracto respiratorio
superior y son clínicamente indistinguibles del resfriado común. La sintomatología, sin
embargo, es más grave en ancianos/as y en adultos inmunodeprimidos, siendo
frecuentes las bronquitis y neumonías.
Los síntomas de infección del tracto respiratorio superior son los relacionados con
rinitis, faringitis, otitis media, conjuntivitis. El niño se presenta con historia de rinorrea,
febrícula, tos de varios días de evolución.
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Existe una clásica evaluación de la gravedad a través de la alteración del sueño, de la
alimentación o de ambos y la aparición de insuficiencia respiratoria. Hay que tener en
cuenta que existe una pobre relación entre la severidad de los síntomas y su traducción
radiológica.(Simoes E, Rieger C.2007)
La gran mayoría de los niños infectados hacen una enfermedad clínica, cuya principal
sintomatología es de síntomas respiratorios altos: tos, conjuntivitis, coriza y rinorrea. En
lactantes pequeños, el Virus Sincitial Respiratorio puede producir apneas, sin embargo
su exacto mecanismo aún se desconoce. Una de las hipótesis, postula que el VSR
alteraría quimiorreceptores laríngeos y sobre estimularía la respuesta del reflejo de
apnea. A pesar de que la bronquiolitis es un término anatomopatológico, su uso en
clínica está universalmente aceptado, y se define como la primera bronquitis obstructiva
que ocurre principalmente en niños menores de un año, que presentan un cuadro
caracterizado por: tos, fiebre, taquipnea, dificultad respiratoria, signos de
hiperinsuflacion torácica y crepitaciones. (Larrañaga C, Palomino M. 2002)
En el examen físico se destaca el síndrome bronquial obstructivo: tórax con sus
diámetros antero-posteriores aumentados, retracción de partes blandas (supra esternal,
subcostal e intercostal).Otra situación conflictiva es la definición radiológica que
habitualmente se plantea entre bronquiolitis y neumonía. Por lo general se asume que
en la bronquiolitis, por su compromiso bronquiolar, la radiografía de tórax debería tener
signos de hiperinsuflación y compromiso intersticial leve. Mientras que en caso de una
neumonía, la ocupación alveolar y su traducción, la consolidación, la definirían en
términos radiológicos. Su rol no es diagnóstico, pero a tomar en cuenta, cuando la
evolución se ve desfavorable. La duración del cuadro clínico oscila entre cinco a ocho
días. Su inicio es como cualquier virosis respiratoria alta y en el transcurso de los tres
primeros días, se definirá el curso benigno o grave de la enfermedad. Durante los
primeros días de la evolución de la bronquiolitis, el médico tratante debe mantener la
calma y evitar adelantarse en las medidas terapéuticas, ya que puede precipitar una
hospitalización o el uso excesivo de medicamentos.(Carvalho V.2014)
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2.5 RESPUESTA INMUNE A LA INFECCIÓN POR VSR
El organismo responde a la infección por el VSR generando una respuesta inmune que
se caracteriza por la producción de anticuerpos específicos IgG, IgM e IgA, los cuales
se han encontrado en el suero y las secreciones de la vía aérea. Esta respuesta inmune
no necesariamente protege contra infecciones posteriores, aunque su presencia en el
plasma probablemente disminuya la frecuencia de reinfecciones y la gravedad de éstas.
Los niños nacidos cercanos al término tienen anticuerpos maternos que parecen
disminuir en forma significativa la probabilidad de infección durante el primer mes de
vida. La administración de inmunoglobulina intravenosa (IgIV) contra VSR es eficaz
para reducir la incidencia y gravedad de la infección en lactantes de alto
riesgo.(Caloca.O,.Aranda..S)
Existe evidencia de que se genera una respuesta inmune celular, mediada por células T,
con secreción de productos con actividad antiviral, entre ellos interferón gamma e
interleuquinas 4 y 5 producidas por las células CD4 y T helper. Se ha demostrado la
presencia de T helper en el lavado bronquioalveolar posterior a la infección por VSR.
Sobre la transmisión, se sabe que el VSR se transmite a través de gotas grandes que se
generan en estornudos a distancias cortas, mano-ojos, mano-nariz, mano-mano; o a
través de contacto cercano con personas infectadas o con secreciones; las secreciones
nasales en la ropa son infectantes por 30 minutos; en superficies como estetoscopios,
vajilla, cunas, se mantiene 6 a 12 horas; el período de incubación es de 2 a 8 (4 a 6)días,
desde el contacto; el contagio se mantiene mientras se mantenga la eliminación del
virus, la que a menudo comienza antes de los síntomas mayores; su probabilidad es
altamente variable y parece depender de la edad, gravedad e inmunocompetencia del
huésped. Los adultos lo eliminan durante los 3 a 7 días que siguen a la infección y los
niños durante 14 días en infecciones altas, pero en los lactantes menores de 6 meses con
infecciones graves puede persistir por 3 semanas y en los inmunocomprometidos,
algunos meses.(Medina J. 2013)
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2.6 EFECTOS RELACIONADOS CON LA INFECCIÓN POR VSR
Un tercio de los niños desarrolla otitis media aguda y en 1,8% de los pacientes
hospitalizados se produce encefalopatía. En un estudio realizado en 32 niños con
síndrome nefrótico, con seguimiento de cuatro años, se observó que la exacerbación de
la enfermedad aumentó a más del doble en pacientes con infección respiratoria y que el
VSR era el agente más frecuente. La secuela más frecuente en los pacientes infectados
por VSR es la presencia de sibilancias asociadas a aumento de la hiperreactividad
bronquial y asma, aunque esto último aún es motivo de controversia. El VSR aparece
fuertemente relacionado con sibilancias recurrentes y se han planteado 2 hipótesis para
explicar esta asociación.
1) La primera propone una relación causal: el cambio inducido por la replicación
viral en la vida temprana alteraría el patrón normal del desarrollo pulmonar, de
tal modo que el lactante quedaría predispuesto a presentar episodios de
sibilancias.
2) La segunda plantea una relación de provocación: ciertos lactantes tendrían una
alteración preexistente de la función de la vía aérea o de la respuesta inmune y
las infecciones virales tempranas generarían una obstrucción aguda de la vía
aérea.(Saworki M. 2000)
2.7…TRATAMIENTO
Las infecciones leves desaparecen sin tratamiento, cuando los bebes y los niños son
atacados por esta infección severa, su hospitalización podría hacerse necesaria para
brindarles oxigeno suplementario, aire humidificado e hidratación con líquidos
intravenosos; también es posible que se necesite brindarsoporte respiratorio con un
respirador. El medico es el mejor juez para indicar el tratamiento adecuado, algunas
veces se utiliza un medicamento para abrir las vías respiratorias de los pulmones
(broncodilatador) y en algunos casos, se utiliza un medicamento antiviral como el
Ribavirin. (Goldman D. 2001)
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2.8….COMPLICACIONES
Toda enfermedad por lo general, pude presentar complicaciones si no es tratada a
tiempo. En el caso del VSR las infecciones del oído, la neumonía y la insuficiencia
respiratoria son las más riesgosas y frecuentes. Es necesario buscar asistencia médica si
se presentan dificultades respiratorias u otros síntomas de esta enfermedad. Cualquier
problema respiratorio en los bebés debe ser tomado como emergencia y por lo tanto es
necesario buscar asistencia médica adecuada.
2.9...TRANSMISIÓN
La transmisión del VSR es primariamente por autoinoculación de membranas mucosas
del ojo o de la orofaringe tras haber sufrido contacto con secreciones con virus u objetos
contaminados. El contacto directo es la causa más frecuente de transmisión, pero
grandes gotas de aerosol también son infectantes. El VSR puede sobrevivir varias horas
en las manos y superficies sólidas (juguetes por ejemplo de la consulta médica). Por su
alta contagiosidad, la medida más trascendente para impedir la diseminación
nosocomial, es el lavado de manos y la técnica de aislamiento de contacto (guante,
mascarilla y delantal).(Gwatkin D. 2011)
DIAGNÓSTICO
El diagnostico de laboratorio del VSR se hace a través del análisis de las secreciones
respiratorias. El aspirado nasofaringeo y el lavado nasal generalmente producen una
buena muestra, como así mismo se puede tomar una muestra en pacientes intubados o
en aquellos en los que se les está realizando una broncoscopia. Como en casi todos los
virus, el estándar de oro es el cultivocelular (en células HEp-2), pero por lo lento, entre
cuatro días a dos semanas, su uso está restringido a la investigación. La tinción con
técnica inmunofluorescencia por su rapidez, buena especificidad y sensibilidad, hoy día
es la técnica más usada en la confirmación diagnóstica.
El diagnóstico serológico no es de utilidad en los lactantes por la transferencia
transplacentaria de anticuerpos y en adultos tampoco es garantía por la alta frecuencia
de infecciones a lo largo de la vida.
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Como la infección por VSR no produce un cuadro clínico patognomónico, se puede
confundir casi con cualquier virus respiratorio, no solo en niños sino también en
ancianos. Entre ellos están: el virus influenza, parainfluenza y adenovirus.
Recientemente se añaden a esta lista, los coronavirus y el metapneumovirus.(Geriatram
S. 2013)
VACUNAS
Los esfuerzos por desarrollar una vacuna para el VSR no han tenido éxito a la fecha. En
los años 60 se utilizó una vacuna inactivada por formalina la que fue evaluada en el
estado de Washington, Colorado y California. A pesar de una buena respuesta medida
por títulos de anticuerpos, la vacuna no fue protectora e incluso algunos niños tuvieron
infecciones por VSR de mayor gravedad que los niños no vacunados A la fecha se han
planteado dos hipótesis. La primera, la vacuna habría inducido una respuesta
fundamentalmente mediada por células T tipo Th2 y la segunda sería por la formación
de complejos inmunes, ambos mecanismos montarían una poderosa respuesta que
afectaría más al huésped que al virus. Actualmente se trabaja en el desarrollo de
vacunas a virus vivos atenuados o de subunidades.(Tello P. 2010)
ELISA
El ELISA se basa en el uso de antígenos o anticuerpos marcados con una enzima, de
forma que los conjugados resultantes tengan actividad tanto inmunológica como
enzimática. Al estar uno de los componentes (antígeno o anticuerpo) marcado con una
enzima e insolubilizado sobre un soporte (inmunoadsorbente) la reacción antígeno-
anticuerpo quedará inmovilizada y, por tanto, será fácilmente revelada mediante la
adición de un substrato especifico que al actuar la enzima producirá un color observable
a simple vista o cuantificable mediante el uso de un espectrofotómetro o un
colorímetro.(Dewar R, Goldstein D,.2009)
Los diferentes tipos de ELISA son los que se enumeran a continuación:
• Anticuerpos marcados:
ELISA Directo
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ELISA Indirecto
ELISA sándwich
Doble (DAS)
Heterólogo (HADAS)
• Antígeno marcado
ELISA competitivo
ELISA Directo.
Consta de las siguientes etapas:
Fijación al soporte insoluble (“tapizado”) de antígenos específicos. Lavado para
eliminar los antígenos fijados deficientemente o no fijados.
Adición de anticuerpos marcados (“conjugados”) con una enzima; si los
anticuerpos reaccionan con los antígenos, el complejo quedarásolubilizado.
Lavado para eliminar los anticuerpos marcados que no hayan reaccionado.
Adición de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora.
Se puede parar la reacción si se desea.
Lectura visual o colorimétrica del producto final coloreado.
ELISA Indirecto.
Consta de las siguientes etapas:
Fijación al soporte insoluble de antígenos específicos para los anticuerpos objeto
de estudio. Lavado para eliminar los antígenos fijados deficientemente o no
fijados.
Adición del suero problema, de tal forma que sus anticuerpos reaccionarán
específicamente con los antígenos fijados al soporte. Lavado para eliminar los
anticuerpos marcados que no hayan reaccionado.
Adición de anti-anticuerpos conjugados con una enzima, los cuales reaccionan
con los anticuerpos específicos añadidos en el paso anterior y
que se encuentran fijados a los antígenos. Lavado para eliminar los anti-
anticuerpos marcados que no hayan reaccionado.
Adición de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora.
Se puede parar la reacción si se desea.
Lectura visual o colorimétrica del producto final coloreado.
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Gráfico 8: Etapas de ELISA
Fuente: Revista Virus Usal 2012
Pasos generales de un ELISA.
1. Tapizado del pocillo con el antígeno o anticuerpo.
2. Adición de la muestra problema con la mezcla de antígenos o anticuerpos.
3. Unión del antígeno o anticuerpo específico al anticuerpo o antígeno tapizado en el
pocillo
4. Lavado del pocillo para eliminar el exceso de antígeno o anticuerpo no unido
5. Adición del anticuerpo secundario marcado con la enzima
6. Unión del anticuerpo secundario al antígeno o anticuerpo
7. Lavado del pocillo para eliminar el exceso de enzima no unida
8. Adición del substrato
9. Unión del substrato a la enzima
10. Desarrollo del color
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ELISA Y EL VIRUS SINCITIAL RESPIRATORIO
ELISA es un método sensible y específico para eldiagnóstico de infecciones por VSR.
Los resultados obtenidos en ladetección de IgG en neonatos deben ser interpretados con
precaución, yaque las IgG maternas son transferidas pasivamente de la madre al
fetoantes del nacimiento. La determinación de IgM es mejor indicador deinfección en
niños. Si bien se han desarrollado test de
ELISA empleando péptidos sintéticos, las pruebas que emplean antígenocrudo
presentan mayor sensibilidad.( Berman S,2015)
FUNDAMENTO DEL MÉTODO:
Método de ELISA basado en la reacción de los anticuerpos de la muestracon el antígeno
unido a la superficie de poliestireno. Las inmunoglobulinasno unidas por reacción con
el antígeno son eliminadas en el proceso delavado. En un paso posterior la globulina
anti-humana reacciona con elcomplejo antígeno-anticuerpo, y la que no se une es
eliminada por loslavados; la unida reacciona con el sustrato, para dar una
reaccióncoloreada azul, que cambia a amarillo tras la adición de la solución de
parada.(Bennett G, Dolin R. 2008)
Gràfico9: Unión de las inmunoglubµlinas por acción del antígeno
Fuente: Revista Virus Usal 2012
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TOMA DE MUESTRA:
La sangre debe extraerse en condiciones asépticas mediante técnicas de venopunción
por personal experimentado. Se recomienda el uso de técnicasasépticas o estériles para
evitar la contaminación de la muestra. Los suerosdeben mantenerse refrigerados entre 2
y 8ºC si se van a procesar dentro delos 7 días siguientes a la toma, pero si el
procesamiento se va a prolongardeben congelarse a -20ºC, evitando las congelaciones y
descongelacionesinnecesarias. No utilizar sueros hiperlipémicos, hemolizados o
contaminados. Los sueros que presenten partículas pueden ser clarificadospor
centrifugación. Pueden utilizarse muestras de suero o plasma indistintamente.
LIMITACIONES DEL MÉTODO:
1.-Este método está diseñado para ser utilizado con suero humano.
2.-El uso de este kit requiere la cuidadosa lectura y comprensión del folletode
instrucciones. Es necesario seguir estrictamente el protocolo para obtener resultados
fiables, en particular el correcto pipeteo de muestras y reactivos, lavados y tiempos de
incubación.
3.-Los resultados de las muestras deben ser valorados junto con la sintomatología
clínica y otros procedimientos diagnósticos. El diagnóstico definitivo debe realizarse
mediante técnicas de aislamiento.
4.-El test no indica el lugar de la infección. No pretende sustituir al aislamiento.
5.-La ausencia de un aumento significativo en el nivel de anticuerpos no excluye la
posibilidad de infección.
6.-Las muestras recogidas muy pronto en el transcurso de una infección pueden no tener
niveles detectables de IgM. En esos casos se recomienda realizar un ensayo para
determinación de IgM u obtener una segunda muestra transcurridos entre 14 y 21 días
para ser ensayado en paralelo con la muestra original con el fin de determinar una
seroconversión.
7.-Los resultadosobtenidos en la detección de IgM en neonatos deben ser interpretados
con precaución, ya que las IgM maternas son transferidas pasivamente de la madre al
feto antes del nacimiento. La determinación de IgM es mejor indicador de infección en
niños menores de 6 meses.
8.-Los resultados de determinación de anticuerpos de una muestra única no deben ser
usados para el diagnóstico de una infección reciente. Se deben recoger muestras
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pareadas (aguda y convaleciente) para ser ensayadas paralelamente y determinar
seroconversión o un incremento significativo en el nivel de anticuerpos.
9.-Para la determinación de IgM se debe realizar la técnica utilizando sorbente de
anticuerpos IgG humanos ya que de otro modo se pueden obtener resultados falsos
positivos por la presencia de factor reumatoide o resultados falsos negativos por exceso
de anticuerpos IgG.
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CAPÍTULO III
METODOLOGÍA
3.1 TIPO DE ESTUDIO
El diseño de este estudio es descriptivo, de corte transversal, realizado en 131
estudiantes escolares de la ciudad de Tulcán menores de 15 años durante el periodo
2015, se les hizo firmar el consentimiento informado a los padres de dichos niños.
A los niños se les realizó encuestas y se extrajo 5 cc de sangre para obtener suero
y realizar la determinación de IgM contra el Virus SincitialRespiratorio, la muestra
se trasladó conservando la cadena de frio al laboratorio de Genética de la Facultad
de Ciencias Médicas donde se procesó las muestra mediante técnica de ELISA en el
Equipo ELISYS Uno.
3.2 NIVEL DE INVESTIGACIÓN
Estudio tendrá un nivel descriptivo de corte transversal
TECNICAS E INSTRUMENTOS DE INVESTIGACION
La técnica de toma de muestra y ELISA se realizó aplicando normas bioéticas,
controles de calidad, calibraciones para determinar el nivel de dioptrías en el
laboratorio de Genética de la Facultad de Ciencias Médicas.
3.3 UNIVERSO Y MUESTRA
3.4 UNIVERSO
Para la realización de la investigación sobre “DETERMINACION DE IgM PARA
VIRUS SINCITIAL RESPIRATORIO EN NIÑOS MENORES DE 15 AÑOS,
ESCOLARES DE LA CIUDAD DE TULCAN PERIODO 2015.” se tomó como
universo a los estudiantes de nivel básico menores de 15 años de la UNIDAD
EDUCATIVA DEL MILENIO “CARLOS ROMO DAVILA”de la ciudad de
Tulcán.
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3.1.1 MUESTRA
La muestra fue de 131estudiantes de educación básica de la ciudad de Tulcán
Criterios de inclusión
Ser estudiante de la educación básica de la ciudad de Tulcán
Los estudiantes no deben estar tomando corticoides de forma crónica
Criterios de Exclusión
Tener enfermedad viral aguda por otra causa.
Estudiantes que estén cursando con alguna patología que ocasione
inmunodepresión.
3.1.2 TÉCNICA E INSTRUMENTO DE RECOLECCIÓN DE
DATOS
3.1.3 TÉCNICA
Se utilizó Kit comercial Human Virus Sincitial Respiratorio virus (HVSR)
antibody, IgM ELISA Kit de ELISA Inmunoensayo enzimático para la
determinación cualitativa de para la determinación de anticuerpos anti Virus
Sincitial Respiratorio en suero y plasma humanos, Marca HUMAN.
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PROCEDIMIENTO DE ENSAYO
1. Preparar todos los reactivos y muestras como se indica en el inserto.
2. Consulte la hoja de ensayo disposición para determinar el número de pozos que
ser usada y coloque pozos restantes y el desecante de nuevo en la bolsa y sellar la
ziploc, almacenar pozos no utilizados a 4 ° C.
3. Establecer un pocillo blanco con 100 µl Diluir la muestra.
4. Agregue 100µl de muestra diluir al por pocillo. A continuación, añadir 10μl del
control negativo y control positivo o muestra por pocillo. Cubrir con la tira
adhesiva proporcionada. Incubar durante 45 minutos a 37 ° C.
5. Aspirar cada pocillo y lavar, repitiendo el proceso tres veces para un total de
cuatro lavados. Lave llenando cada pocillo con tampón de lavado (200μl) utilizando
un botella con atomizador, pipeta multicanal, colector dispensador, o lavado
automático, repita y se deja reposar durante 2 minutos, la eliminación completa del
líquido en cada paso es esencial para un buen rendimiento. Después del último
lavado, eliminar cualquier resto lave buffer aspirando ordecanting. Invertir la placa
y secar contra toallas de papel limpias.
6. Añada 100µl de HRP-conjugado a cada pocillo (no en blanco). Cubra la placa de
microtitulación con la tira adhesiva. Incubar durante 30 minutos a 37 ° C.
7. Repetir el proceso de aspiración / lavado de cuatro veces en el paso 5.
8. Añadir 50µl de sustrato A y B 50µl de sustrato a cada pocillo. Incubar durante 10
minutos a 37 ° C. proteger de la luz.
9. Añadir 50µl de solución de parada a cada pocillo, golpear suavemente la placa
para asegurar mezcla completa.
10. Tome en blanco así como cero, determinar la densidad óptica de cada pocillo
dentro de 10 minutos, utilizando un lector de microplacas ajustado a 450 nm.
(Longitud de onda de referencia: 600-650 nm) dentro de los 60 min de haber
agregado la solución de parada.(Human HSVR: Passenger or pathogen in acute
respiratory tract infections,2015)
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TIPOS DE ANÁLISIS
El análisis que se utilizara para la elaboración de esta investigación será de tipo
cuantitativo mediante estadística descriptiva con tablas, gráficos medidas de
tendencia central promedios, medianas, porcentajes y medidas de dispersión con
desvíos estándar, análisis de Chi cuadrado y estimación de prevalencia.
a. CONSIDERACIONES ÉTICAS
Para la recolección de datos se contó con consentimiento informado y la realización
de encuestas para los estudiantes menores de 15 años que fueran o no vacunados
contra el Virus Sincitial Respiratorio, bajo normas de manejo ético, moral y
profesional. Siguiendo lo estipulado en la cuarta carta de Helsinki
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CAPÍTULO IV
RESULTADOS
Se encontró una tasa de prevalencia de infección por Virus Sincitial Respiratorio de
1,66% por mil estudiantes
TABLA Nº1 DISTRIBUCIÓN DE ESTUDIANTES SEGÚN SEXO
Elaborado por: Cisneros Lourdes 2015
GRÁFICO Nº10
Elaborado por: Cisneros Lourdes 2015
ELABORADO POR: CISNEROS LOURDES 2015
Se visualiza que el sexo más frecuente fue el masculino con 51 % y femenino con el
49%, aunque no hubo diferencia estadísticamente significativa p=0,34
51% 49%
DISTRIBUCION DE ESCOLARES SEGUN SEXO
FEMENINO
MASCULINO
SEXO FRECUENCIA PORCENTAJE
FEMENINO 67 51,15
MASCULINO 64 48,85
Total general 131 100,00
41
TABLA Nº 2DISTRIBUCIÓN DE ESTUDIANTES ESCOLARES SEGÚN EDAD
EDAD FRECUENCIA PORCENTAJE
5 4 3,05
6 1 0,76
9 1 0,76
10 21 16,03
11 13 9,92
12 19 14,50
13 45 34,35
14 13 9,92
15 14 10,69
Total general 131 100,00
Elaborado por: Cisneros Lourdes 2015
GRÁFICO Nº11 DISTRIBUCIÓN DE ESTUDIANTES SEGÚN EDAD
Elaborado por: Cisneros Lourdes 2015
PROMEDIO 12,1 ± 2,42 AÑOS
Que un 34,35 % de estudiantes tienen 13 años siendo el grupo etario más frecuente
seguido de los de 10 años con el 16,05 % y seguido de los de 12 años con 14,5 %. No
se encontró diferencia estadísticamente significativa entre los grupos etarios y resµltado
de Elisa p=0,39.
TABLA Nº3 DISTRIBUCIÓN DE ESTUDIANTES SEGÚN GRADO
3,05 0,76 0,76 16,03
9,92 14,50
34,35
9,92 10,69
5 6 9 10 11 12 13 14 15
PO
RC
ENTA
JE
AÑOS
DISTRIBUCION DE ESCOLARES SEGUN EDAD
42
GRADO FRECUENCIA PORCENTAJE
5to 1 0,76
6to 18 13,74
7mo 26 19,85
8vo 40 30,53
9no 41 31,30
10mo 5 3,82
Total general 131 100,00
Elaborado por: Cisneros Lourdes 2015
GRÁFICO Nº12
Elaborado por: Cisneros Lourdes 2015
Se observa que del grado que más muestra se obtuvo fue el noveno grado con el
31,3%, seguido de octavo grado con 30,53% de los Estudiantes.
TABLA Nº4 DISTRIBUCIÓN DE ESTUDIANTES SEGÚN HAN PRESENTADO
ALGUN ANTECEDENTE PATOLOGICO PERSONAL DEINFECCION POR
VIRUS SINCITIAL RESPIRATORIO
0,76
13,74
19,85
30,53 31,30
3,82
5to 6to 7mo 8vo 9no 10 mo
DISTRIBUCION DE ESCOLARES SEGUN GRADO
43
ANTECEDENTES
PATOLOGICO PERSONAL
FRECUENCIA PORCENTAJE
NO 95 72,52
SI 36 27,48
Total general
131 100,00
Elaborado por: Cisneros Lourdes 2015
GRÁFICO Nº 13
Elaborado por: Cisneros Lourdes 2015
ELABORADO POR: CISNEROS LOURDES 2015
Se reporta que el 73% no tiene antecedente de infección de Virus Sincitial Respiratorio
pero el 27 % si, lo que demuestra que la bacteria está circulando.
TABLA Nº5 DISTRIBUCIÓN DE ESTUDIANTES SEGÚN HAN SIDO
DIAGNOSTICADO POR VIRUS SICITIAL RESPIRATORIO
DIAGNOSTICADO POR VIRUS FRECUENCIA PORCENTAJE
73%
27%
DISTRIBUCION DE ESCOLARES SEGUN HAN PRESENTADO ALGUN ANTECEDENTES
PATOLOGICO PERSONAL DE VIRUS SINCITIAL RESPIRATORIO
NO
SI
44
SICITIAL RESPIRATORIO
NO 111 84,73
SI 20 15,27
Total general 131 100,00
Elaborado por: Cisneros Lourdes 2015
GRÁFICO Nº 14
Elaborado por: Cisneros Lourdes 2015
Se determinó que el 85 % de estudiantes no han sido diagnóstico de haber padecido de
virus Sincitial Respiratorio , pero se encontró 15 % de estudiantes que reportaron haber
padecido la enfermedad..
TABLA Nº6DISTRIBUCIÓN DE ESTUDIANTES SEGÚN HAN PRESENTADO
SIGNOS RESPIRATORIOSPOR VSR
HAN PRESENTADO SIGNOS
RESPIRATORIOS
FRECUENCIA PORCENTAJE
85%
15%
DISTRIBUCION DE ESCOLARES SEGUN HAN SIDO DIAGNOSTICADO POR VIRUS SINCITIAL
RESPIRATORIO
NO
SI
45
NO 54 41,22
SI 77 58,78
Elaborado por: Cisneros Lourdes 2015
GRÁFICO Nº 15
Elaborado por: Cisneros Lourdes 2015
Según la información dada por los estudiantes se establece que el 58,78% han tenido
signos respiratorios dela enfermedad por Virus Sincitial Respiratorio y el 41,22% no
han tenido sintomatología en los últimos tres meses.
TABLA Nº7 DISTRIBUCIÓN DE ESTUDIANTES SEGUN HAN PRESENTADO
SINTOMATOLOGIA DEL VSR
SINTOMATOLOGIA FRECUENCIA PORCENTAJE
ASINTOMATICO 79 60,31
SINTOMATICO 52 39,69
41,22
58,78
0,00
10,00
20,00
30,00
40,00
50,00
60,00
70,00
NO SI
PO
RC
ENTA
JE
SIGNOS
DISTRIBUCION DE ESCOLARES SEGUN HAN PRESENTADO SIGNOS RESPIRATORIOS POR VSR
46
Total general 131 100,00
Elaborado por: Cisneros Lourdes 2015
GRÁFICO Nº 16
Elaborado por: Cisneros Lourdes 2015
Se Observa que el 60,31 % de los estudiantes son asintomáticos y el 39,69 % han
presentado sintomatología en los últimos tres meses.
INTERPRETACION FRECUENCIA PORCENTAJE
NEGATIVO 66 50,38
POSITIVO 65 49,62
Total general 131 100,00
Elaborado por: Cisneros Lourdes 2015
TABLA Nº8 DISTRIBUCIÓN DE ESTUDIANTES SEGÚN RESULTADO DE
IgM CONTRA VIRUS SINCITIAL RESPIRATORIO
RESµLTADO DE IgM FRECUENCIA PORCENTAJE
Negativo 66 50,38
Positivo 65 49,62
60,31
39,69
0,00 10,00 20,00 30,00 40,00 50,00 60,00 70,00
ASINTOMATICO
SINTOMATICO
PORCENTAJE
DISTRIBUCION DE ESCOLARES SEGUN SINTOMATOLOGIA VIRUS SINCITAL
RESPIRATORIO
47
Total general 131 100,00
Elaborado por: Cisneros Lourdes 2015
GRÁFICO Nº17
Elaborado por: Cisneros Lourdes 2015
El 49,62 % de los estudiantes presentaron presencia de IgM contra Virus Sincitial
Respiratorio, lo que nos indica que la Virus Sincitial Respiratorio está presente entre
los estudiantes escolares de la ciudad de Tulcán.
50,38 49,62
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
NEGATIVO POSITIVO
DISTRIBUCION DE ESCOLARES SEGUN RESULTADO Ig M CONTRA VIRUS
SINCITIAL RESPIRATORIO
48
ANÁLISIS DE RESULTADOS
El diseño de este estudio es descriptivo de corte transversal, realizado en 131
estudiantes escolares de la ciudad de Tulcán menores de 15 años durante el periodo
2015.
En el estudio se visualizó que el sexo más frecuente fue el masculino con 51 % y
femenino con el 49%, aunque no hubo diferencia estadísticamente significativa p=0,34,
con un 34,35 % de estudiantes tienen 13 años siendo el grupo etario más frecuente
seguido de los de 10 años con el 16,05 % y seguido de los de 12 años con 14,5 %. No
se encontró diferencia estadísticamente significativa entre los grupos etarios y resultado
de Elisa p=0,39
El 49,62 % de los estudiantes presentaron presencia de IgM contra Virus Sincitial
Respiratorio, lo que nos indica que el Virus Sincitial Respiratorio está presente entre
los estudiantes escolares de la ciudad de Tulcán. Similar a lo reportado por Salas-Chave
quien indica que las infecciones del tracto respiratorio inferior son generalmente
causadas por el VSR; ocurren en forma epidémica y la aparición de éstas varía con la
altitud, latitud y clima del lugar; la estacionalidad, en la cual la epidemia de VSR ocurre
en el 73% de los casos, depende de la localización geográfica y de la altitud. Durante las
estaciones del año las epidemias tienden a aparecer en cúmulos; sin embargo, los
patrones de aparición de estas epidemias varía de un continente a otro y usualmente
empieza en las áreas costeras. Similar a lo reportado por Goldman D en el 2001 con
56% de presencia de VSR en escolares del reino unido
Se encontró una tasa de prevalencia de infección por Virus Sincitial Respiratorio de
1,66 por mil estudiantes.La distribución de los agentes virales en los países
subdesarrollados es como sigue: VSR 15% a 20%, según reporto Law BJ en el año
2000 estos porcentajes concuerdan con lo encontrado en el presente estudio. También es
común encontrar infecciones mixtas (virales y bacterianas) las cuales ocurren
frecuentemente.
Se observa que el grado que más aportó a la muestra fue el noveno grado con el 31,3%,
seguido de octavo grado con 30,53% de los Estudiantes.
Se reporta que el 73% no tiene antecedente de infección de Virus Sincitial Respiratorio
pero el 27 % si, lo que demuestra que la bacteria está circulando.
49
Se reportó que el 85 % de estudiantes no han tenido alguna vez diagnóstico de haber
padecido de infección por Virus Sincitial Respiratorio , pero se encontró 15 % de
estudiantes que reportaron haber padecido la enfermedad..
Según la información dada por los estudiantes se establece que el 58,78% ha tenido
signos respiratorios de la enfermedad por Virus Sincitial Respiratorio y el 41,22% no
han tenido sintomatología en los últimos tres meses.
Se observa que el 60,31 % de los estudiantes son asintomáticos y el 39,69 % han
presentado sintomatología en los últimos tres meses.
50
CONCLUSIONES
De los resultados obtenidos en el presente estudio se concluye que :
El 49,62 % de los estudiantes presentaron presencia de IgM contra Virus Sincitial
Respiratorio
Se encontró una tasa de prevalencia de Virus Sincitial Respiratorio de 1,66 por mil
estudiantes
No se encontró diferencia estadísticamente significativa entre los grupos etarios y
resultado de ElISA p=0,23
RECOMENDACIÓNES
Realizar más investigaciones de seroconversión de IgM contra Virus Sincitial
Respiratorio en el resto del país, para determinar la prevalencia de este virus en todo el
Ecuador.
Realizar campañas de prevención en los hospitales, escuelas y guarderías para que la
comunidad tenga mayor conocimiento del medio por el cual se transmite esta
enfermedad y así poder evitarla.
51
CAPITULO V
5.1 PROPUESTA
Difusión de información y concientización acerca del Virus Sincitial respiratorio, para
con esto tomar medidas preventivas.
5.2 JUSTIFICACION
El Virus Sincitial Respiratorio (VSR) es el principal agente etiológico causante de las
infecciones respiratorias agudas bajas, es un importante agente patógeno productor de
infecciones respiratorias agudas a veces graves, en niños pequeños. Es la causa más
frecuente de neumonías y bronquiolitis en niños menores de un año.Las complicaciones
que se originan repercuten no solo en el aspecto biológico sino también en la calidad de
vida. Por esta razón es importante la realización de esta guía informativa.
5.3 OBJETIVO
Concientizar a la comunidad sobre la enfermedad del Virus Sincitial
Respiratorio mediante charlas difundiendo información básica a través de
este tríptico.
5.4 BENEFICIARIOS
Los beneficiarios directos de este proyecto de investigación son los niños de la Unidad
Educativa “CARLOS ROMO DAVILA” de la Ciudad de Tulcán, ya que mediante su
resultado se dará a conocer cuál es la prevalencia de esta enfermedad y se podrá realizar
campañas de prevención.
52
TRIPTICO
53
BIBLIOGRAFIA:
American Academy of Pediatrics. Prevention of respiratory syncytial virus
infections: Indications for the use of palivizumab and update on use of RSV-
IGIV. Pediatrics 2008;
Berman S. Epidemiology of acute respiratory infections in children of
