� ���������������� � �������� ������ ������� ���� � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � �<
" ����������%�&��� ��� ������ ������$'��� �����(����� �����
���������� ��)��������� ����������������
���������8��������%�����C������� �%������
��7�������8���������
��
J������3� ��� ����7�������J����
�
��'����������������������������(���������������������������������������������������������+�������� �������
�'������������������������ ���������(���������������������������������������������������������+�������
�� ���������'����������2����/������������������������(����������2���������������������������������������+�������
�� ���������������������������� !�����������"�������#���������$���3�������/&
%�����1��(/������.���0��������.�)������.���
��������
�!"�����#��A���!A���������$�����!����� �� ���� ��������$������������ ���!#�$�������$�#����&
����������!A��������%��������#���� ��� �"������������ �!� ��B #��������1���4�����,�����������!��
% ���������B#� &�'���������$�����"���������� ��������������������������"���#��#��� ��� ���B#� ��$�������
�����"� � $��!������,��!A�#������� ����"���#���� ��!A�0�� ����"���#����,� #�!"��� � ���1���4����&'��� ��� ����� ���$������ �#��� ����� ����!�� �% �!�������� ����������� ��%��� � �$$�#�� �������������
� ������� �� � ���� ��� ����� ���$������ �#��� ����� ��� � � ��!#������ � ���!#� #�� ���� � �#�
% ����� ������&�'����������� �!��������������%����$��!������������� ���� $$����#������������$�������#��� &
'�����B#� ��$�%����$��!�������������������������� &��.��#�!"����������1���4�����,��!A�0������"���#���
����� �������!�� �������$���B#� �%������������"�����������$������#������B#� ��� ����#������ �#� �!������
����&� ��!"�����#��A�#�������"���#��������� � ����� ������ ��B#� �#�!"��� � ��� ����#�!!��#��� ������%��
�!A� $��!������&�'��� �������� �������� ������!A�����"���#���� ����� #������� ��� �� #������!������ ����
���$�������#��� �%��������������B#���"�#��� ��������"�#�����������������B#� �#�!"��� �����!A� ��B #������&
C!"� �#�����������"���#����������������������#�� ����#�!"��!�� �!#�&��'�� ����������� ����� �#���
�$�����!������ �������$�����!#��!����"��%�%� � ������%� ����$�#�� ���������"�� !������������������ �#�
�#��� ��� ���B#� &��'������������$�������� �� #����������!A�0������"���#�������������"�����������%�#�!�
������%��� ���� ����� �� ���!�$����!A,�%���!�������(������ � �$����� �#�����$�����"���#����4���$�����#�����
���� �������#����������$$#�# ��� � �#���������� ���$$�#��&
���� ����!"�����#��A,�0������,�����"���#��,�1�������$�#���,��������� ������
�����������
0���������������������������������������������������������� �������������������
��������������� �������������������������� ���������63#��������������)�����������
�������� �� �������*6<7#��������$�������������������������� ����� ����������������������
����� ���������������������������������������������������������������������4�����
�����$��.''59�����������.''&#$��6���������%�����������������+��*�+#���������2�������� ��
���������������������������������������������(������$��.'''9����������.''/#$�*�����������*�+
��������������������%����������������������������������������( ����������������������0���2���#$
�������������������������������������������������������������������������(���� ��7����� !!!#$
����������������������������������������������*�+���������������������������������(���� $�������
������%�����������������������������*�+��*�+��������*�������������*%������#������%��
����������� ��������������������������������G�����������$�� !!?#$�;��������� ����������������
��������� ������)����������������������0���2���$�8�������������������������8�7#�*�+
����������������������������������%���������������������������� ��������������������������
�0������H������7�������7��������7�����.''59�0������H������7�������7�����������������$��.''5#$
���������������������%��������������������� �� ���������*�+���������������������������������
����������������������������������������$��������������������������������������������������
*�+��������������������������������������%���������%����������$�C���������%�����������������
������ �������������������$�6������(���������������� ���������������������������������������������
��� � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � ���������������� � ���������������������������� ������ � �������� ������ ������ � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � ��
���%�������������� ����������������������� �� ����������H������.'''#$�������%,��������������
���� ������������������������������������������ ������������������������������������������
� ����������������������������������������������(���� ����*�+�-��������������������������
�����������������*�+�������������0���2����#$
����� ������������
1��������
*�����������+����� ���������� �����7������;7*$�-������� �����������������
5'�'''��!&B������� �����#��������������������*)�����������+��������������$�0���2���
���� ����������������4��(���#�������%�����������+�������1 ����7)��%%�-���� ����+�(���
=����� �G�%�������������� $�1�����6-#���������������% ���������*�����8�%������ �-�����
+��������������$
������������������*�����������+������������
����*�+�-�����������������������������% ������� ���������� �����)������ ����
�����������$�����������������������������������% ��������������������������%�������������������
��������������������������� �����������(�����������$��+����� ������ ������������������*�+
�������� ������(�����<17=#���������� '���:��#���������������'$'"&���������(�����������
�)��������������� B��:�#����(��������'$"&&���������2��������$�������������������������
��������� ������������A''����$������'$ ��������)�����������������������'$.&�B��:�#����������
��������� ��� ���� �������������������������� �������� ���� &�������$�0��� ������������� ��
������ �������������������&B��:�#���������������$������������������%���2���*�+������������
��������� 2��$���������������� ������ ��� �������������� ������������������� ��� �� ����
��������������&B�:�$������������������������������2������ ������2������'$/��%��
��� �5'�-�����./������$����� � ������2�������������������� ������� ������������������/
�-$
������������ ������2���*�+��������������������������������������������2�����&'A�@�!�������
��� ��������� ����(����'$'.&$
)����������������������
���� �� ����� ������� � ���0���2���� ���*�+�-��� ����������� ��������������
����������% ������������������������%��������01���������*�--� '.5'$�G���������%�������
01������������ ( '�����:����������������% ����������������������������� ����A''�����7�%�����
��(������%���������������������������������������%��������5&�-�����/?��$
)��������������������� �������
7 ������������������������������������������������ �������%������������������������
�0������H��������������������$��.''5#$�+����� ��������5'�/'��#�������������������� ��,����������
����������������������� ���������������������������� &'���:��$�7 ���������������������
���� �������% � ���������� �������������01��������� �&( '�� �����:�����#$�0���2����
*�+�-����������������������������������������������������� ��,������������������
$'���:���/���������������������������������������������$�*�������������������������������
���������% ����������������������������������������������������/�������������� ����������������
����������������./��������������������������$�����������������%����������� /��� ����������
� ����������������������� ���������������% ������������������������������������������$��<������
����������������'����&����������������% ���������%��������9�'�O�������� �O�������� �����������
������%���)����� �����������������������#��.�O���������� ����������� ����������������
����������������������#��5�O���� ��������������%�������������������������������#��/�O��(������
����������������������������������������#����&�O������$��*������(����������������������
% �����4�������-��������������������;������� $
��������� ������ � �������� ������ ������ � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � �9
*�������������(����
7�����������,���������������������������0���2�������*�+�-��������������� ��/����
?���:��#������������������������&�?������6-���������������5'�/'������������������$�4���
������������������������)���������������������������*�+�-������������������������
�,�����������������������������������$�<������������������������� ����� /��� �$�6���������
�������������������������������������������������� ���������%������������������+;�#���
����������������-�#����������������������%��������������%�������������������������� � /$
����� ��������D���(���� ������������%���������
<�������������%�����������+-#������������������������ �������%����0������H������7������
7�����������������$��.''5#$�������+-�����������������������������������������%�������
��������+7#�����������������+7��������������������&'B$�0���2�������*�+�-��������������
�������������� �A'���:�����������������+-������������������������� B���������������$����
��(������������������%���������5"��-�����.'���$�-����� ����������������% ����������������������
��������%����������� �����������������������% �����������������5'''���������&�����������
�������%����������������������������������������������������� ����&/ ��$ ''B�� �������
���������������������������$
7�������������� ���
������������������������������������������������������������������������������������
�� ���� ����������������*�=3*#$��7�������������������������������I�'$'&$
���� ��
)����������������������
��������������������������� ��������01������������*�+�-����������������������������
��������0���2���$���������������%���� ��������������16-#����0���2�������*�+�-��
����������������������(������ �'$ &A���:������'$ &'���:��������������� $��-�������������
������������������������������������� $
�������������������� ����������������������
7 ��������������������������������� �������������������������������������������
�-Q�����������������#$���������������������������������������������������������%�����������
������������������������������������������������������������������� �������������������������$
- ����������������������������������������������� ����%��� #$�*��������������������
01������������&( '�������:���������������������������� ''B��������� ���-Q�����������������
�7�������������$��.'' #��������������� ��������&'B��������� ��������(��������������������
�������%������������%��� #$�7��������� ������ ����������������������������������������������
���������������������������������������������������$���������������������� ������������������
��������������0���2�������*�+�-������������������������������������� ���������������
����������������������������������������������������-����������������������������������������
�����������������%���������������$�������������������*�+�-������������������������������������
0���2���$�+���������� �����������������0������ *#����������������������������0������ +#�
�������������������������������������������� $
3�� � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � ���������������� � ���������������������������� ������ � �������� ������ ������ � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � 3�
Table 1 Curing and mortality of fungal infected mice
Note.Each mice received treatment 4 h after fungal infection.
Figure 1 Antifungal activity in systemic candidiasis mice. Degree of sickness of each mouse was monitored after intravenous administration of single dose 4 h after fungal infection (A) or multiple doses (indicated by arrows) for 4 consecutive days (B) of Fungizone®, AmB-Chi nanoparticles or Chi nanoparticles. Degree of sickness scale 0 to 5 is normal to death and numbers in the between are different levels of sickness. Each point represents the mean+SEM of eight mice.
Numbers of sick/death�
Treatments�Day 7� Day 14� Day 21�
Cyclophosphamide 0 / 0 0 / 0 0 / 0
C. albicans 8 / 0 7 / 1 4 / 4
C. albicans+Fungizone® 0 / 0 0 / 0 0 / 0
C. albicans+AmB-Chi nanoparticles 1 / 0 0 / 0 0 / 0
C. albicans+Chi nanoparticles 8 / 0 8 / 0 7 / 1
C
C
C
C
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 200
1
2
3
4
5
Day after fungal infection
Deg
ree
of S
ickn
ess
A
C
C
C
C
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 200
1
2
3
4
5
Day after fungal infection
Deg
ree
of S
ickn
ess
C
C
C
C
C
C
C
C
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 200
1
2
3
4
5
Day after fungal infection
Deg
ree
of S
ickn
ess
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 200
1
2
3
4
5
Day after fungal infection
Deg
ree
of S
ickn
ess
A
C. albicans
C. albicans+Chi nanoparticle
C. albicans+ Fungizone®
C. albicans+AmB-Chi nanoparticle
Days after fungal infection
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 200
1
2
3
4
5
Deg
ree
of S
ickn
ess
B
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 200
1
2
3
4
5
Deg
ree
of S
ickn
ess
B
Days after fungal infection
C. albicans
C. albicans+ Fungizone
C. albicans+AmB-Chi nanoparticle
��������� ������ � �������� ������ ������ � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � 3�
)��������(���� D�����������+-����%����
+����0���2���� ���*�+�-������������������� ����� ����)���� � ����������
�� ����� ���� ���������������������������0������.#$��&'B������ ���������������% �0���2���
����*�+�-���������������������������&$AA���:������"$!5���:��������������� $�-������
������������������������������������*�+�������������������������������������������+-
���%������������������#$
��������'�B#� ����DA0��$��!A�$��!�������&�?�!�� ����������$�1���4������� ��!A�0������"���#���
������ #�� �#�� � ��� �������7!�� #��#�����������$��!A&�;��� #��#�����������$��!A������"�����
���������M���!�� ��&�C�#��"������"������������!���G:C*��$��������B"��!����&
)�������(���� D���������(����
6����������������������� �����������*�+�-���������������������������� �����������
��������(���� ��������������������������������0���2���$�1�����,�����������*�+�-�������������
������������ ��/����?���:����(��%����������������������(���� ����������,�������������������������
���0���2������0������5#$������������������������������������ ���:��#����������������(���� 9
����������������������������/���:�����������%����A&�"'B���������$��������������������������
����������������������?���:���������.�������������$�������������� �������������������������
������������������ �-����������������������������/���:��$�����������������������������
��������������?���:���������� ��������������������$
*��������������������������������������� ���B�������������0���2�������*�+�-��
�������������0������5#�������������� ����������% �0���2��������������� �������������������
*�+�-������������������������� ���������������0������/#$
������(���� ����*�+������������
7��������������������������� � /������������������(���� �������������������������� 2��
����%������������������+;�#����-������������%���.#$��1�����,�������������������������0���2���
�������������� ������������������������������������$�*������������+;�������������������
�������������������������� �������������������������������������������������������������������
�������������������/���:��$����������������������������������������(���� ������0���2���
������������$�=����������� ��������+;�����-�� ������������������������*�+�-�����
-��������������������������������������������������������(���������������������������������$
7�����+;��������������%������������ ������������������������������ ��������������������
������������������(������ �"$.���:��$�6���������%����������������0���2�������*�+�-��
������������(�����������������������������������������������������������������������������
������������ ���������$
100.5
0
20
40
60
80
100
A
F
Log (Amphotericin B), mM
% H
emol
ysis
101.0 102.0101.5100.0 100.5
0
20
40
60
80
100
A
F
Log (Amphotericin B), mM
% H
emol
ysis
101.0 102.0101.5100.0
AmB-Chi nanoparticle
Fungizone®
3�� � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � ���������������� � ���������������������������� ������ � �������� ������ ������ � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � 3�
��������� ������ � �������� ������ ������ � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � 33
��������
������������������������� ������������������������������������� ������(���� ����*�+�-��
����������������������������������������*�+�������������0���2���$������������������
����� ����� ����� ����������� ���%���� � ������������ �16-#��������01��������� ��� %���
�������������������������$������������������������ ������*�+������������������������������������
�������������������� ������������������������%�����������������������$
�������������������������������������� ������������������������������ ������
�����������% �-Q������������$��7��������%�����������(������������������� ����������� �&'B
���������������������������������������������������������������������������� ����������%���
%�������������� ��������������������$���������(�����������������������������������������������
*�+�-����������������������������*�+�������������0���2���#������������������������
������������� �����������������$�4�����������������������������������������������������������
������� �������������$�7��������� ��������������������������������� ���������������������������
������������������������� ������������� ��������,������/������������������������$�-����������
��������� ���������������������������������������������������������������������������
������C��������$��.''5#$�6��������������������%������������������� ����������%������������� �%��
��������������01�������������������������������������%���� ����������������������������������%����
����������$
=����� ���� ��������� ��� �����������*�+�-��� ���������������� ��� �������*�+
��(���� $�C�������������������������������(���� �������������0���2���$�=�������������������
0���2�������*�+�-����������������������������������(���� $��������(���� ����*�+�����%��
�������������%����������������������������������*�+��������,���������������+�����2������$�� !!.#$
C������������*�+���*�+�-����������������������������0���2��������������������
���������� ����������������������������������%�����������#$�C��������%���������������
�������� �������������% ����( ��������*�+�����������������������������% �*�+��������
�����������$��0�������������������������������*�+�������%����������������������� ��������
���������������������������������������������� ���������)������������������������������������
���( ��������������������0���2�������������������������� ����� �����(���� $�������� ���������������
%���������������������������%���������$������������������������%�������(�����������������������
���������������*�+�-���������������������+;�����-�����������������������������������$
0���2�������������� ���������������(���� ���������������������������������%������$
6���������� ��������������%����*�+�������������������������������������������� ����� ��
� �����������������&'B������ �������*�+�-�������������������������� �������������������
0���2���$�-�������������(������� ������������������������������������(���� �����������
���������+;�������������������%��������� ��������������$��6��������������� �����������������
����������������������������������������������������������������������������������$�� !!!#$
�����������������������������%����������������������������������������������������������$
C��%������������������������������%��������������� ���������������������%���� �����������������������
����������������������%��������������������������������������������% �������������������
�����������2�$�C���������������������������������������������������������������������,�����
������%����������������������%���������������%����������������% ����������������$��������������������
�����������������������������������%��������������������%����������������%���������������$
���� �����
*�+�-�����������������������%�������������������� �� ������������������������
� �����������������$�*��������������������(���� �������������������� �������������������������
*�+������������������������������������������������������(���� $��C����������������������������
�����������% �����������������������������2���������������%������������������� ����������
��(���� �����������������������������������$
3�� � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � ���������������� � �������������������
������ ���������
�����������������������������������$�����4$�J���������������������������������������
����������������������$���������� ���������������% �������������������������-��������
G������4�����������+���������� ��+������#���������$
����������
+�����2��J$��-���������7$����G������6$�� !!.#$�4����������������������������������������������+��
������(���� ��������$�.�����������.��������0�������������4��.5 '�.5 &$
4��������$��G��%����J$������������<$��.''5#$�4���������� �����������������������������
��������� ������������������������������$����+�����)������ ��������������A?&�"'.$
0�������$��H�������$�������������$��7�������*$��7������7$���������Q$�������$��.''5#$�-��������
���8�7�*�+D�*�����������������������������������������+���������������������
�8�7#�� ����� ����������� ������%����� �����������$� )����������� ! ���� �
�������� ������#4(�� ' � .$
0�������$��H�������$��7�������*$��7������7$����7�����J$��.''5#$�*������������� �� ��������
������������+�����������������������8�7#$�)�����������! ������������� �����
#4,��5"�/&$
0�������$��H�������$��7�������*$��7������7$���������Q$����7�����J$��.''5#$�4���������������
������� � ��� ��(���� ���� ������������+� ������������ �� ���������������� �8�7#$
)�����������! ������������� ������#4���& �A'$
G�������1$��+�,����7$��7�����7$��0��������*$�J$����7�����1$�� !!?#$�<����������������������
������������+�����������$�! �����"��������� �������&,�� 5"� & $
��������� J$�$� �.''/#$�*�������� ���������D������������� ����$6����� ;%����������7<�
&��� &�..$
����H������1$��$�3$� �.'''#$�*� ��������������������������������������$'����������
= ����������������84�� �."$
�(��J$��$��C�������$�J$��7�%����J$�<$��0�������7$�G$�����������$�G$��<���������C$�4$�������$��.'''#$
�������������������������������������������������$�6���������<��������7����� ����*������$
0�������)������ ������������3��AA.�A"?$
����������1$�<$��.''&#$�-�������������������������� ���������������������$����! ����
�.�����������0������������,4�7����$� #���&�� $
����������7$�-$��H��%����$�3$����<�����$�� !!!#$������������������������������������������
��<�*�������� �� ����D�+���������%���� ��%�� �������%���������%���� ����������(���
��������<�*$�)�����������! ������������� ������&(���.5 �./5$
7���������Q$����7������4$��.'' #$��������������(�������������������������������������
+���������������(�����������������������������$����! �����.�����������
0������������8���./&�.& $
7�����<$� � !!!#$� 8�����%����� ������������+� ���� ���� ��������� ��� ������ ��������$
����������������&*��5'A�5.5$
C����J$��$��C����-$�C$��8�����$�-$����Q������$��$��.''5#$�+�����������1G�A5��������� ��:
��������%���������%����$� ! ���� �9��������"��������'�����������.�
,8��A'A�A &$