Practca Numero 3 de Biotec.

8/18/2019 Practca Numero 3 de Biotec.

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INSTITUTO TECNOLÓGICO DE CINTALAPA

CARRERA: INGENIERÍA EN INDUSTRIA ALIMENTARIAS

MATERIA: BIOTECNOLOGÍA

REPORTE DE PRACTICA N° 3“CARACTERIZACION DE CEPA MICROBIANA”

CATEDRÁTICO: M.C. IBQ. ANAYANCY LAM GUTIERREZ

INTEGRANTES DEL EQUIPO:

ANDRÉS IVÁN CRUZ ENRIQUES N !"##""!$%OSÉ ANTONIO PALACIOS MURIA N !"##"3&&

CARLOS DE %ES'S BAZÁN MORALES N° !"##"""&VÍCTOR MANUEL ROQUE VELÁSQUEZ N° !"#""()%OSÉ MANUEL SANTOS SANTIAGO N° !"##""&"

GRADO Y GRUPO: &“D”

*EC+A DE INICIO DE LA PRÁCTICA: !) ,"3,!3*EC+A DE TÉRMINO DE LA PRÁCTICA: !) ,"3,!3

CINTALAPA DE *IGUEROA- C+IAPAS A $! DE MARZO DE $"!$


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REPORTE DE PRACTICA N° 3“CARACTERIZACION DE CEPA MICROBIANA”

OB%ETIVOS

• Identificar las características microscópicas de la cepa microbiana de estudio.

• Comparar la morfología del microorganismo de estudio con el atlas de morfología

bacteriana.

• Conocer el género a la que pertenece el microorganismo presente.

INTRODUCCIÓN

La caracterización de cepas microbianas es un proceso por el cual debemos determinar a qué especie

pertenece una determinada cepa bacteriana, mediante la comparación de una serie de características

que pueden ser puestas en evidencia en el laboratorio y que han sido estudiadas para la gran mayoríade las especies importantes desde el punto de vista de la patología infecciosa humana. Cuanto ms

seme!anza haya entre las características obtenidas en el laboratorio y las que habitualmente presenta

una determinada especie, mayor ser la probabilidad de que esa cepa problema pertenezca a dicha

especie .Las características utilizadas en la identificación de cada grupo de microorganismos

dependen de las posibilidades de cada laboratorio, fundamentalmente económicas y de cualificación

del personal, así como de la epidemiología específica de la zona.

MARCO TEÓRICO"e entiende por identificación microbiana al con!unto de técnicas y procedimientos que se aplican para

establecer la identidad de un microorganismo. #stas técnicas se utilizan en diferentes reas, por

e!emplo$

% #n el rea clínica donde es de capital importancia conocer cul es el agente causal de la infección

que presenta un paciente, de manera de poder tratarlo con agentes terapéuticos.

% #n la industria farmacéutica, cosmética y de alimentos donde las normas de control de calidad

e&igen la ausencia de ciertos microorganismos.

% #n investigación bsica donde se aísla un determinado microorganismo que debe identificarse para

comprobar si se trata de un microorganismo conocido o de uno nuevo para poder clasificarlo.

'(rescott, )***+.

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Los rasgos morfológicos 'estructurales+ han ayudado a los ta&onomistas por muchos aos a clasificar

organismos. Los organismos superiores tienen rasgos anatómicos tan diferentes que pueden ser

fcilmente utilizados en su clasificación, pero con respecto a los microorganismos, éstos lucen ba!o el

microscopio tan similares que se dificulta su clasificación. #s decir, que estos microorganismos que seven tan parecidos ba!o un microscopio, pueden diferir en propiedades bioquímicas, fisiológicas y-o

serológicas. "in embargo, aun cuando la morfología celular dice poco sobre las relaciones

filogenéticas, sigue siendo til para la identificación bacteriana. (or e!emplo$ la presencia de

endosporas y su localización resulta de mucha utilidad en la identificación de bacilos esporulados.


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#s posible sacar conclusiones en relación con la morfología de una bacteria, e&aminando una lmina

que fue sometida a un proceso de tinción diferencial. #stos criterios morfológicos encabezan las

primeras etapas del proceso de identificación bacteriana. La mayor parte de las bacterias, teidas con

/ram, las podemos clasificar como /ram positivas o /ram negativas, otras tinciones diferenciales,

como el cido resistente, se aplican a otro tipo de bacterias, como por e!emplo micobacterias. 0n

e&amen microscópico de una lmina teida por medio de /ram o de una tinción diferencial es til

para obtener una información rpida sobre la calidad de un ambiente clínico

La tinción de /ram es uno de los métodos de tinción ms importantes en el laboratorio bacteriológico

y con el que el estudiante debe estar perfectamente familiarizado. "u utilidad prctica es indiscutible y

en el traba!o microscópico de rutina del Laboratorio de 1icrobiología las referencias a la morfología

celular bacteriana 'cocos, bacilos, positivos, negativos, etc.+ se basan !ustamente en la tinción de

/ram.

#sta tinción se denominada así por el bacteriólogo danés Christian /ram, quien la desarrolló en )233.

"obre la base de su reacción a la tinción de /ram, las bacterias pueden dividirse en dos grupos, /ram

positivas y gramnegativos 'en este caso, los términos positivo y negativo no tiene nada que ver con

carga eléctrico, sino simplemente designan dos grupos morfológicos distintos de bacterias+. 4espués

de la coloración de contraste las células /ram negativos son ro!as, mientras que las /ram positivas

permanecen azules.

M/0102 424102 56 ?8@542 90@9742.

Las pruebas bioquímicas han sido ampliamente utilizadas para diferenciar bacterias. #stas pruebas

se fundamentan en demostrar si el microorganismo es capaz de fermentar azcares, la presencia de

enzimas, la degradación de compuestos, la producción de compuestos coloreados, etc. 5un bacterias

fuertemente relacionadas pueden separarse en dos especies diferentes con base a pruebasbioquímicas. (or e!emplo, las bacterias entéricas gram negativas, forman un grupo muy grande y

heterogéneo cuyo hbitat natural es el tracto gastrointestinal de humanos y otros animales. #sta

familia, #nterobacteriaceae, incluye a varios patógenos que causan síndromes diarreicos. 0n gran

nmero de ensayos han sido desarrollados de manera de identificar rpidamente al patógeno, para


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que posteriormente el médico, con base al reporte, indique el tratamiento adecuado, o para que los

epidemiólogos puedan localizar la fuente de la infección. #&isten flu!o gramas, como el que se

describe a continuación para la identificación bacteriana, mediante pruebas bioquímicas de

microorganismos.

#l tiempo necesario para la identificación de bacterias puede reducirse considerablemente con el uso

de sistemas miniaturizados basados en pruebas bioquímicas. #stas herramientas que permiten

reducir el tiempo del reporte, en primer lugar fueron elaborados para bacterias de importancia médica,

tales como las enterobacterias. #stos sistemas han sido diseados para realizar varias pruebas

bioquímicas simultneamente y permitir la identificación en un tiempo ms corto. Cada uno de los

ensayos, consta de tubos miniaturizados que contienen el medio de cultivo que se hidratan al

inocularlos con la suspensión bacteriana pura. Las pruebas se clasifican en grupos6 a cada uno de

resultados positivos de los ensayos de se le asigna un determinado valor numérico, obteniéndose un

código que corresponder a un determinado género o especie en un te&to de la base de datos.

Con fines de control microbiológico, la 0"( indica cuales son las pruebas bioquímicas mínimas que

se requieren para la identificación de los microorganismos ob!etables, pero no descarta que se

utilicen sistemas miniaturizados donde se realizan un nmero mayor de pruebas bioquímicas.

#&isten muchas casas comerciales que producen sistemas miniaturizados para diferentes tipos de

microorganismos adems de las enterobacterias. Cada casa fabricante tiene su propia presentación,

clculos, manuales, etc. 0na limitación de este tipo de método de identificación es la aparición de

cepas mutantes y la adquisición de plasmidos que pueden dar origen a cepas con características

diferentes. #ste tipo de método de identificación también ha sido desarrollado para la identificación de

levaduras y de otros hongos.'1ahón, 7888+.

M/0102 424102 56 /9?9;97479=6 706 ;4>02.

La interacción entre un virus bacteriano 'fago+ y su célula bacteriana sensible es sumamente

específica, ya que el proceso de adsorción se encuentra mediado por receptores específicos tanto enel virus como en la célula bacteriana. 5 una placa con medio de cultivo sólido inoculado con un cultivo

puro de una determinada bacteria, se le aade una alícuota de un fago específico6 éste puede

ocasionar la lisis de las bacterias, hecho que se evidencia en el cultivo como zonas claras definidas,

denominadas placas, que indican que hubo infección y lisis celular. #l uso de fagos específicos

permite identificar y subclasificar bacterias dentro de una misma especie.


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Los métodos serológicos, implican la utilización de preparaciones de inmunoglobulinas específicas

provenientes del suero o de un reactivo, y que pueden ser de gran utilidad en la identificación

microbiana en muestras puras o en muestras biológicas. Cada uno de los métodos tiene su

fundamento particular, pero en líneas generales, todos se basan en la reacción de un antígeno

presente en el agente microbiano con su anticuerpo correspondiente. La solución que contiene los

anticuerpos se denomina antisuero.

#stos métodos son muy tiles en diversas situaciones$

% "i a través de un sistema miniaturizado basado en pruebas

bioquímicas se determinó que la bacteria causante de la infección es

un miembro del género "almonella, utilizando una batería de

antisueros contra el antígeno 9 presente en el lipopolisacarido de

las bacterias gram negativas, es posible identificar a la "almonella

aislada hasta el nivel de serotipo 'poli 9, 5, :, C, 4, etc.+.

% La inmunofluorescencia ha resultado ser sumamente til en

casos de infecciones de diferente origen. (uede utilizarse para la identificación del microorganismo

aislado o presente en una muestra biológica. #n el método directo se fi!a la muestra problema a una

lmina y se pone en contacto con el antisuero específico marcado con una sustancia fluorescente

'rodamina o fluoresceína+. 0na vez transcurrido el

tiempo para que tenga lugar la reacción antígeno

anticuerpo, se e&pone la lmina a la radiación ultravioleta paravisualizar la reacción. ;ambién e&iste la técnica indirecta, donde

en primer lugar se utiliza el anticuerpo específico no

marcado y posteriormente se utiliza un anti anticuerpo

marcado.

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calienta para que las cadena s complementarias se separen. (osteriormente se aade la sonda, y se

de!a transcurrir un periodo para que tenga lugar la hibridación si e&iste la cadena complementaria. La

unión de la sonda a la secuencia complementaria se detecta mediante la seal radiactiva que emite la

sonda o mediante métodos enzimticos.

EQUIPO- MATERIAL Y REACTIVOS

TERIALES EQUIPOS REACTIVOS MUESTRASorta ob!etos.

ubreob!etos.

a de platino.

echero de bunsen.

otero.

istalizador.

uente para tinción.

:alanza analítica.

1icroscopio.

Cmara digital para

microscopio.

5lcohol>

acetona.

"afranina.

5ceite de

inmersión.

Aioleta de

cristal.

Lugol.

1uestra de estudio

aislada de estiércol

de ganado vacuno.


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METODOLOGÍA

E/847acetona.

Colocar en una probeta de @8 ml, ?8 ml de alcohol etílico y 78 ml de acetona, mezclar perfectamente.

"olución safranina.

#n un matraz aforado de @8 ml colocar @ ml de alcohol etílico y disolver 8.)7@ gr. de safranina. 5forar con agua destilada.

"olución crista violeta.

#ste colorante se prepara en dos partes.

a. "olución a$ en un vaso de precipitado de @8 ml. colocar )8 ml. de alcohol etílico y disolver )gr

de cristal violeta."olución b$ en otro vaso se disuelven 8.3 gr de o&alato de amonio en 38 ml. de agua destilada.

b. 1ezclar cuidadosamente las soluciones a y b.c. /uardar la mezcla en un frasco mbar en obscuridad durante 73 horas.

N0/4: ;odo este procedimiento requiere de la total asepsia posible para contrarrestar todo tipo decontaminación en los colorantes y así poder tener un buen resultado.


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S529=6 15


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RESULTADOS

Los resultados que se obtuvieron una vez realizado las observaciones de los frotis en fresco y con la

tinción de /ram se reportan en las siguientes tablas, ad!untando algunas imgenes. #n ellas se

encuentran también las características microscópicas observadas en los diferentes ob!etivos del

microscopio.

T4


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me!or enfoque.

;amao 1icrómetros 1icrómetros

T4


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1uestra obtenida de

aislamiento de cultivo de

estudio '#stiércol de

vacuno+.

1edio de Cultivo "olido "olido

5umento total 'ob!etivo+ B8& B8&

Dorma #l aumento permite ver

ms de cerca la forma

de las cadenas de

cocos, algunas de estas

cadenas son ms cortas

y otras mas largas.

La tinción permite ver la

coloración rosa>violeta

de las cadenas de

cocos, algunas de estas

cadenas son ms cortas

y otras ms largas, pero

se encuentran mas

dispersas.;amao 1icrómetros 1icrómetros

T4


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DISCUSIONES

#n prcticas anteriores de aislaron las cepas bacterianas de la muestra de estiércol de ganado

vacuno, esto con la finalidad de encontrar microorganismos que son capaces de hidrolizar las

moléculas de almidón, esto debido a la producción de una enzima llamada amilasa. #n esta prctica

se encarga de identificar qué tipo de microorganismo es el que se encuentra presente en dichas

muestras de estiércol. La caracterización se llevó acabo por medio de métodos de identificación

basados en el criterio morfológico y en tinción diferencial 'tinción de /ram+ ambos por medio de la

observación al microscopio.

Como resultado de obtuvieron que la muestra de estudio vista en los diferentes ob!etivos del

microscopio '3&, )8&, 38&, B8& y )88&+, resulto que en las primeras observaciones con los ob!etivos

3&, )8&, 38& de la tabla ).), ).7 y ).? no había una observación clara, a comparación de los ob!etivos

B8& y )88&. 4e la tabla ). 3 y ).@. Las formas que se presenciaron en la observación microscópica por

medio de los frotis en fresco y con la tinción de /ram, fueron de grnulos o agrupaciones de cadenas


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formadas por células redondeadas, que comparndolo en la morfología bacteriana del cuadro )'ver

ane&os+, se pueden deducir, la apariencia de microorganismos del género estreptococos, este tipo de

microorganismos tiene tamao de 8.3 a )3 μm. 5dems de que en la coloración azul presente en los

frotis con tinción de /ram, corresponde a este tipo de microorganismos /ram positivos segn a la

bibliografía que cita 1adigan 1.;. et al . '7883+.

#stos resultados concuerdan con el resultado del informe de =odríguez et al . '7882+. 0no de los

microorganismo que pueden degradar el almidón y que se encuentran en el estómago de los

rumiantes pertenece al género estreptococos, llamado Streptococus bovis, este es una bacteria

amiolitica, que al igual que las bacterias hemiceluloliticas y celuloliticas son responsables de hidrolizar

o degradar las macromoléculas que componen los sustratos presentes en los alimentos, como

celulosa, hemicelulosa, almidón, grasas y aceites, y pectina. #l producto final de la fermentación de

los carbohidratos lo son mayormente cidos grasos voltiles '5/AE", i.e. acético, propiónico y butírico+

los cuales representan la principal fuente de energía para el rumiante. 4espués de su producción en el

rumen los 5/AE" son absorbidos a través de la pared ruminal y transportados al hígado, órgano

donde se metabolizan o son distribuidos a los diferentes te!idos del cuerpo 'e!. te!ido adiposo, te!ido

muscular, glndula mamaria+.

La presencia de microorganismos en el comple!o retículo>rumen le permite al pequeo rumiante

utilizar nutrientes presentes en los alimentos que no pueden ser degradados por enzimas producidas

por mamíferos.

CONCLUSIONES

VÍCTOR MANUEL ROQUE VELÁZQUEZ

Los herbívoros convierten los productos vegetales en alimentos. La eficiencia de conversión depende,en parte, de la eficiencia de digestión de las fibras vegetales en el rumen. La digestión de la pared

celular vegetal en los rumiantes depende, a su vez, de la colonización y digestión de la misma dentro

del comple!o ecosistema microbiano del rumen.

La diversidad de microorganismos del rumen es importante porque la presencia de especies distintas

aporta un con!unto de enzimas, así como reacciones bioquímicas precisas para una conversión

m&ima del alimento consumido, los microorganismos ms comunes de tipo amilolíticas que se

encuentran en el rumen de los bovinos son$ streptococus bovis, Succinomonas amilolytica y

Bacteroides amylophylus, las cuales degradan grandes cadenas de almidón.

#n la prctica se aislaron cepas que se encontraban en las heces de bovinos, teniendo en cuenta los

parmetros morfológicos, el crecimiento en los medios modificados con almidón y con base a la

prueba de lugol 'solo se seleccionaron aquellas que no presentaron modificaciones oscuras al

aplicarse a los cultivo en placas+, también se tomaron en cuenta la marcada similitud fisiológica y

bioquímica e&istente entre algunos de las cepas aisladas, entre ellas. "e seleccionaron las cepas para

su respectiva identificación, dentro de las cepas obtenidas figuran microorganismos de tipo bacilos y

cocos, tanto /ram (ositivos como /ram negativos, con una predominancia en streptococus bovis

/ram positivas.

%OSÉ MANUEL SANTOS SANTIAGO.

La caracterización de cepa microbiana sigue siendo el principal método de identificación de la mayoría

de las cepas aisladas. =ecordemos que en la prctica anterior se logró aislar una cepa para que

http://es.wikipedia.org/wiki/%CE%9Cmhttp://es.wikipedia.org/wiki/%CE%9Cm


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posteriormente se procediera a identificar sus características microscópicas mediante un microscopio

que incluye una cmara.

(ara poder identificar la cepa microbiana se realizó una tinción /ram'#s la tinción diferencial ms

utilizada en bacteriología pues permite separar las bacterias en dos grandes grupos, las /ram

positivas y las /ram negativas+. 28G de las

células y por ltimo que esta célula permanezcan genéticamente estables.

(ara finalizar se cumplieron en tiempo y forma los ob!etivos establecidos anteriormente, identificando

el grupo al que pertenecía la bacteria analizada como su morfología, no se presentaron ningn

inconveniente al momento de efectuar la prctica todo se realizó adecuadamente sin retrasos y todo

se realizó con buena prcticas de higiene. #n términos ms comunes fue una prctica poco tediosa yse realizó en un poco tiempo obteniendo resultados satisfactorios.

CARLOS DE %ESUS BAZAN MORALES.

La caracterización de las cepas microbianas, se realizan por diversos métodos, algunos de ellos se

basan en la forma que tienen, es la ms sencilla, y se puede basar en atlas de morfología microbiana,

otros se basan en la coloración que obtienen cuando se le aplican tinciones diferenciales, la ms

usada es la tinción de /ram. #&isten otros métodos, por e!emplo pruebas bioquímicas, por ensayos

serológicos, o biología molecular.

"e identificó el género a la que pertenece la cepa microbiana de estudio, el cual pertenece al género

de estreptococo, debido a que estos microorganismos forman cadenas de cocos, y cuando se le

realiza las tinciones de /ram se colorean azules, perteneciendo a un microorganismo /ram positivo.

#n las referencias bibliogrficas e&plican que en los animales rumiantes se pueden encontrar,

microorganismos que ayudan a la hidrolizarían de diversas macromoléculas, como pueden ser

bacterias amilioliticas, celuloliticas, hemiceluloliticas, entre otras. #n las bacterias amilioliticas se

encuentra el microorganismo streptococus bovis perteneciente al género estreptococo.

La caracterización de las cepas es importante desde el punto de las diversas reas que son aplicadas,

en el rea clínica donde es de capital importancia conocer cul es el agente causal de la infección quepresenta un paciente, de manera de poder tratarlo con agentes terapéuticos. #n la industria

farmacéutica, cosmética y de alimentos. #n esta prctica el ob!etivo que se cumplió fue identificarse la

cepa de estudio para comprobar si se trata de un microorganismo conocido o de uno nuevo para

poder clasificarlo.

%OSÉ ANTONIO PALACIOS MURIA.

#n conclusión podemos decir que se realizaron técnicas apropiadas para la caracterización de la cepa

microbiana del estiércol de vaca. "e logró identificar dos tipos de microorganismo las /ram


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positivas y negativas ya que a la hora de realizar la tinción hubo coloración morada que corresponde

que hay presencia de bacterias /ram positivas y de color rosa las /ram negativa esta característica

est íntimamente ligada a la estructura de la envoltura celular , por lo que refle!a un tipo natural de

organización bacteriana. 5l comparar las características de las bacterias podemos decir que hubo

presencia de "treptococcus bovis ya que es un grupo de bacterias formado por cocos /ram

positivos pertenecientes al filo firmicutes y al grupo de las bacterias cido lcticas. #stas bacterias

crecen en cadenas o pares, donde cada división celular ocurre a lo largo de un e!e. H bacilos en

forma de bastón.

ANDRÉS IVAN CRUZ ENRÍQUEZ.

#n el laboratorio de microbiología del Instituto ;ecnológico "uperior de Cintalapa, se tomaron las

muestras inoculadas a partir de un cultivo de estiércol de vacuno. #l aislamiento y caracterización de

microorganismos de interés biotecnológico es de suma importancia porque se ha demostrado que

bacterias aisladas del ambiente pueden ser patógenas al hombre, animales y plantas.

La identificación de los microorganismos puede permitir evaluar la patogenicidad y virulencia de unacepa, así como su uso y aplicación en procesos biotecnológicos. (or lo tanto, el ob!etivo de la

presente prctica se logró, debido a que se caracterizó la bacteria proveniente de un cultivo, cuya

nica fuente de carbono es una dilución de carne. Con esto se logra identificar qué tipos de

microorganismos pueden crecer en este alimento, adems de la inocuidad en la que se encuentra

dicha muestra.

Las bacterias que detectaron con la ayuda del microscopio, las cuales fueron identificadas como gran>

positivas debido al color violeta que se colorió en las membranas plasmticas de dichos

microorganismos.

BIBLIOGRA*ÍA

A8/7@


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presente cuando en realidad est ausente+ se incrementan. La mayoría de las técnicas moleculares se

basan en la hibridación de los cidos nucleicos o bien en la reacción en cadena de la polimerasa

'(C=+.

$.F Q@ ?8@542 90@9742 ?0184 ?80?0658 ?484


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T46 2@ 4;969141 ?08 /9?0 15 2@2/84/0 56 5< 70?

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